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Rapid Détection moléculaire et différenciation des virus grippaux A et B
Rapid Détection moléculaire et différenciation des virus grippaux A et B
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JoVE Journal Immunology and Infection
Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Rapid Détection moléculaire et différenciation des virus grippaux A et B

Full Text
16,132 Views
05:38 min
January 30, 2017

DOI: 10.3791/54312-v

Caitlin C. Otto1, Samuel E. Kaplan1, Jeffrey Stiles1, Albina Mikhlina1, Cindy Lee1, N. Esther Babady1, Yi-Wei Tang1

1Department of Laboratory Medicine,Memorial Sloan Kettering Cancer Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Nous décrivons un essai rapide, à base moléculaire de la grippe A et B. L'essai détecte la grippe chaque cible dans les 15 minutes en utilisant une amplification isotherme avec des amorces spécifiques de la grippe suivie par la détection de cibles avec des sondes de balises moléculaires. Le dosage et la grippe A B est convivial et nécessaire minimes mains sur le temps d'effectuer.

L’objectif global de ce test est de diagnostiquer ou d’exclure une infection par le virus de la grippe chez les patients présentant un système respiratoire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du diagnostic clinique, telles que le diagnostic des principales causes d’infections respiratoires. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une méthode rapide qui peut être utilisée dans le cadre de soins de rendez-vous.

La démonstration de la procédure sera faite par Sam Kaplan, un technicien de notre laboratoire. Pour prélever un échantillon d’écouvillon nasal, insérez l’écouvillon dans la narine qui a le drainage le plus visible ou qui est la plus encombrée. Avec une rotation douce, enfoncez l’écouvillon dans la narine jusqu’à ce qu’une résistance soit rencontrée et tournez plusieurs fois contre la paroi nasale avant de le retirer lentement de la narine.

Par la suite, conservez l’écouvillon et transportez-le dans un flacon contenant trois millilitres de milieu de transport viral. Ensuite, amenez l’échantillon et le récepteur d’échantillon bleu à température ambiante avant de procéder au test. La base de test orange peut être testée sans qu’il soit nécessaire de la réchauffer à température ambiante.

Laissez toutes les pièces d’essai dans la feuille jusqu’à ce qu’elles soient immédiatement avant utilisation. Ensuite, allumez l’instrument, entrez l’ID utilisateur et appuyez sur OK.To commencer le processus de test, appuyez sur Exécuter le test sur l’écran de l’instrument. Entrez ensuite l’identifiant du patient à l’aide du clavier à l’écran ou du lecteur de codes-barres et appuyez sur OK. Après cela, ouvrez le couvercle et insérez le tube de base d’essai orange dans le support de base d’essai orange.

Vérifiez que le test correct s’affiche à l’écran et appuyez sur OK. Insérez ensuite le récepteur d’échantillon bleu dans le support bleu du récepteur d’échantillon et attendez que le récepteur d’échantillon se réchauffe. Ensuite, retirez le sceau en plaçant deux doigts sur le bord du récepteur d’échantillon pour vous assurer qu’il reste en place. Placez ensuite l’écouvillon du patient à tester dans le récepteur d’échantillons.

Mélangez vigoureusement l’écouvillon et le liquide pendant 10 secondes et appuyez la tête de l’écouvillon contre le côté du récepteur d’échantillon pour aider à déloger l’échantillon de l’écouvillon. Si les écouvillons de test sont stockés dans un milieu de transport viral, agitez le milieu de transport viral pendant 10 secondes et ajoutez-en 200 microlitres au récepteur d’échantillon. Appuyez ensuite sur OK pour continuer.

Après cela, appuyez sur la cartouche de transfert blanche dans le récepteur d’échantillon bleu. Continuez à appuyer sur le récepteur d’échantillon jusqu’à ce que le voyant orange augmente. Soulevez ensuite et connectez la cartouche de transfert à la base de test.

L’indicateur orange doit descendre une fois que le transfert de la cartouche est correctement fixé. Fermez le couvercle et ne l’ouvrez pas tant que l’écran Résultats n’apparaît pas. Appuyez maintenant sur Exécuter le test QC sur l’écran d’accueil.

Sélectionnez le test de contrôle qualité à exécuter. Confirmez ensuite le type de test qui correspond à l’échantillon de CQ destiné au test en cliquant sur OK et en suivant les instructions à l’écran pour terminer le test. Une fois l’essai terminé, observez les résultats du test affichés à l’écran avec des interprétations pour la présence de la grippe A, B ou de sous-types inconnus, et répétez le test pour les résultats non valides.

Après cela, nettoyez l’instrument et la paillasse environnante avec une solution d’éthanol à 70 % ou d’eau de Javel à 10 %. Cette figure montre les valeurs moyennes de TDM déterminées par le test RP pour les échantillons positifs et négatifs pour chaque sous-type de grippe. Les résultats démontrent que les échantillons faussement négatifs déterminés par les tests de grippe A et B étaient dus à des échantillons de faible charge virale.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 15 minutes si elle est bien exécutée. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que lors de la configuration initiale du test, la cartouche de transfert doit être connectée à la base de test jusqu’à ce qu’elle s’enclenche. Si ces deux pièces ne sont pas correctement fixées, la course échouera et devra être répétée depuis le début.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer ce test de diagnostic de la grippe. N’oubliez pas que travailler avec des échantillons de patients potentiellement infectés par la grippe peut être extrêmement dangereux et que des précautions, telles que le port d’un équipement de protection individuelle approprié, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

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Infection numéro 119 la grippe la grippe le diagnostic moléculaire les tests Point-of-care échantillons respiratoires la grippe A et B de dosage

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