Name: Enquêtes sur le complexe Ga (III) de EOB-DTPA et son 68 Ga radiomarqué analogique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Découvrez la synthèse du complexe Ga(III)-EOB-DTPA et son radiomarquage au gallium-68 pour l'imagerie moléculaire. Cette méthode évalue l'efficacité de marquage, la stabilité in vitro et la lipophilicité du traceur.

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1. Préparation de EOB-DTPA et Ga [EOB-DTPA] Attention: S&#39;il vous plaît consulter toutes les fiches de données de sécurité des matériaux pertinents (MSDS) des solvants organiques, les acides et alcalins utilisés avant utilisation. Effectuez toutes les étapes dans une hotte et utiliser l&#39;équipement de protection individuelle (lunettes de sécurité, gants, blouse de laboratoire). <ol><li> L&#39; isolement de EOB-DTPA à partir d&#39; acide gadoxetic <ol><li> Mettez 3 ml de 0,25 M solution injectable gadoxetic acide dans un ballon. Ajouter 500 mg (5,6 mmol) d&#39;acide oxalique à la solution agitée. </li><li> Après agitation pendant 1 heure, on filtre la suspension à travers un élément fritte en utilisant une pression réduite. Laver le résidu à trois reprises avec 3 ml d&#39;eau, respectivement. </li><li> Combinez les filtrats aqueux et équiper la solution avec une électrode de pH. Ajouter l&#39;acide chlorhydrique 12 M au filtrat jusqu&#39;à ce que le pH est environ -0,1. </li><li> On élimine le solvant sous vide pour obtenir un résidu incolore. Stocker sous gaz inerte. </li><li> Laver le résidu à fond (au moins troisfois) avec de l&#39;acétate d&#39;éthyle pour éliminer l&#39;excès d&#39;acide oxalique. Sécher le résidu sous vide. </li><li> Redissoudre le résidu dans 2 ml d&#39;eau à température ambiante, puis refroidir la solution dans un bain de glace. Sans enlever le bain de glace, ajouter 0,5 M d&#39;hydroxyde de sodium aqueux à une solution goutte à goutte jusqu&#39;à la formation d&#39;un solide incolore, on observe gluante. </li><li> Retirer l&#39;eau par décantation. On lave les solides deux fois de plus avec 1 ml d&#39;eau froide. Sécher le solide sous vide pour obtenir la première fraction du produit. </li><li> Isoler une seconde fraction de produit à partir des fractions combinées de l&#39; eau décantée par Chromatographie sur colonne (silice, méthanol / eau 4/1). 24 On élimine le solvant sous vide. </li><li> Si le solide ainsi obtenu est blanc pur, on redissout dans 1 ml d&#39;eau, ajouter 10 ml d&#39;éthanol et ensuite 10 ml d&#39;éther diéthylique pour précipiter le produit. Filtrer à travers un fritte en utilisant une pression réduite et sèche sous vide. </li><li> Combinerles deux fractions solides de EOB-DTPA et effectuer RMN spectroscopique, 25 spectrométrie de masse 26 et élémentaires 27 analyses. </li></ol></li><li> Synthèse de Ga [EOB-DTPA] ATTENTION: Magasin solide Ga (III) le chlorure sous une atmosphère inerte sèche, car au contact de l&#39;air, l&#39;humidité ou la graisse décomposition a lieu, ce qui entraîne des vapeurs corrosives et formation d&#39;impuretés jaunes, brunes ou noires. <ol><li> Préparer une solution de 0,11 M en dissolvant 1,94 g (11,0 mmol) de Ga (III) chlorure dans 100 ml d&#39;eau. Diluer 1 ml d&#39;une solution aqueuse d&#39;ammoniac à 25% avec 4 ml d&#39;eau. </li><li> Dissoudre 80 mg (0,15 mmol) de EOB-DTPA dans un ballon dans 10 ml d&#39;eau. Si nécessaire, chauffer le solvant pour obtenir une dissolution complète. </li><li> Ajouter 1,4 ml (0,15 mmol) de la Ga (III) solution de chlorure de stock. Equiper le flacon d&#39;un agitateur et électrode de pH. Ajouter goutte à goutte aqueuse diluée de la solution d&#39;ammoniaque jusqu&#39;à ce que le pH de la solution est d&#39;environ 4,1. Agiter à room température pendant 30 min. </li><li> On élimine le solvant sous vide. Placer le résidu dans un flacon, équipé d&#39;une tête de distillation avec un col central et parallèle côté. Équiper le col central avec un doigt de refroidissement et le col latéral avec une sortie de pompe à vide, </li><li> Chauffer le résidu sous pression réduite (125 ° C, 0,6 mbar). Retirez régulièrement sublimées chlorure d&#39;ammonium (visible comme revêtement blanc de la surface du verre) du doigt de refroidissement et toujours à la tête, ainsi que des parties supérieures du ballon avec un chiffon légèrement humide. Poursuivre le processus jusqu&#39;à ce qu&#39;il n&#39;y a pas de formation visible de nouveau sublimé. </li><li> Pour éliminer les traces finales de chlorure d&#39;ammonium laver le résidu trois fois avec 0,5 ml de méthanol chaud, respectivement. Sécher le résidu incolore sous vide. Effectuer RMN spectroscopique, 25 masse spectrométrique 26 et élémentaires 27 analyses. </li></ol></li></ol> 2. Procédure générale d&#39;étiquetage ATTENTION: Tous les exexperiences y compris le contact direct ou indirect avec des substances radioactives doivent être effectuées par du personnel qualifié seulement. S&#39;il vous plaît utiliser l&#39;équipement de protection approprié. Collecter les déchets radioactifs séparément et stocker et éliminer conformément aux réglementations en vigueur. <ol><li> L&#39; élution du générateur Note: A 40 mCi 68 Ge / 68 Ga générateur avec le nucléide mère lié sous forme d&#39; oxyde de silice dodécyl-3,4,5-trihydroxybenzoate a été utilisé. Elution et la purification peuvent être effectués manuellement ou, comme cela a été le cas dans cette procédure, comme un processus automatisé combinée à l&#39;aide d&#39;une pompe péristaltique et l&#39;unité de distribution. <ol><li> Préparer des solutions de 5,5 M, 1,0 M et de l&#39;acide chlorhydrique 0,05 M. Préparer une solution de 5,0 M de chlorure de sodium contenant 25 pi de 5,5 M d&#39;acide chlorhydrique par ml. Préparer une solution tampon à pH 4,6 en combinant 4,1 g d&#39;acétate de sodium, 1 ml de HCl (30%) et 2,5 ml d&#39;acide acétique glacial et en diluant le mélange avec de l&#39;eau jusqu&#39;à 50 ml. </li><li> precondition le PS-H + cartouche en le rinçant lentement avec 1 ml de 1,0 M d&#39; acide chlorhydrique, puis 5 ml d&#39;eau. </li><li> Éluer la colonne de silice du générateur avec 4 ml de 0,05 M de HCl. 12 Charger le 68Ga éluat sur ​​le PS-H + cartouche. </li><li> Rincer la cartouche avec 5 ml d&#39;eau et ensuite sécher avec 5 ml d&#39;air. Éluer le 68 Ga à partir de la cartouche avec 1 ml de 5,0 M acidifie une solution de chlorure de sodium. 28 </li></ol></li><li> Étiquetage des EOB-DTPA avec 68 Ga <ol><li> Dissoudre 1 mg (1,9 umol) de EOB-DTPA dans 1 ml d&#39;eau. De cette solution prendre 100 pi (0,19 pmol) et les diluer avec 9,9 ml d&#39;eau pour préparer un 19 uM (10 pg / ml) de solution mère de EOB-DTPA. </li><li> Retirer 50 ul (équivalant à 22-29 MBq) de la solution contenant 68 Ga et mis dans un flacon. Ajouter 50 pi (0,5 ug) d&#39;une solution mère 19 mM de EOB-DTPA et 300 pi of tampon pour élever le pH à 4,0. Agiter brièvement et incuber la solution à la température ambiante pendant 5 min. Retirer une aliquote de 1-5 ul et mis à HPLC ou analyse par CCM. </li><li> Effectuer une analyse HPLC radio sur une phase inversée (RP) C18 colonne 29 Utiliser la phase mobile suivante:. A - eau / acide trifluoroacétique (99,9% / 0,1%), B - acide acétonitrile / trifluoroacétique (99,9% / 0,1%), gradient : 06 min 80% A → 0% de A (0,5 ml / min), 610 min 0% de A (0,5 ml / min). </li><li> Déterminer les intensités de pic des signaux radio HPLC comme aire sous la courbe. Calculez le rendement de marquage que la pureté radiochimique (RCP) du traceur comme suit: RCP = Une Ga-EOB-DTPA / (A Ga + A Ga-EOB-DTPA) ∙ 100% Une Ga-EOB-DTPA: aire sous la courbe de 68 Ga [EOB-DTPA] A Ga: aire sous la courbe de droits 68 Ga </li></ol></li></ol> 3. Étiquetage efficacité <ol><li> Exécuter les procédures d&#39;étiquetage décrired dans la section 2. Utiliser une gamme cohérente de départ activité de 68 Ga éluat, par exemple, 22-29 MBq (40-140 ul, en fonction de la fraîcheur de l&#39;éluat). </li><li> Ajouter la quantité requise de solution tampon pour ajuster le pH à 3,8-4,0 (40-190 ul, en fonction du volume de 68 Ga éluat). Ajouter la quantité requise de solution de ligand stock (10-70 pi d&#39;une solution 19 mM). </li><li> Ajouter les quantités requises d&#39;eau pour régler le volume global de chaque sonde de marquage à 1,75 ml. Bien mélanger et laisser l&#39;échantillon reposer pendant 5 min à température ambiante. Effectuer une analyse HPLC comme décrit dans la section 2 pour déterminer le rendement de l&#39;étiquetage. </li><li> Exécuter les procédures d&#39;étiquetage avec des quantités de ligand entre 0,1 pg et 0,7 pg par pas de 0,1 pg. Effectuer des expériences en triple pour chaque concentration de ligand. Calculer le rendement moyen et l&#39;écart type. </li></ol> 4. Stabilité in vitro <ol><li> p généralrocédure et préparations <ol><li> Dissoudre un comprimé de tampon phosphate salin (PBS) dans 200 ml d&#39;eau déminéralisée pour préparer une solution mère de PBS avec une concentration de phosphate de 10 mM. </li><li> Effectuer l&#39; étiquetage des 22-29 MBq 68 Ga avec 0,5 pi de EOB-DTPA solution mère, comme décrit dans la section 2. En fonction du volume des 68 Ga éluat, ajuster la quantité de tampon, tel que décrit dans la section 3. Retirer les échantillons de solution d&#39;étiquetage contenant 6-12 MBq de traceur pour effectuer des mesures de stabilité. </li><li> Effectuer une analyse par CCM de radio sur gel de silice 80 mm des plaques d&#39;aluminium revêtues en utilisant du citrate de sodium 0,1 M comme éluant aqueux et d&#39; analyser les plaques avec un scanner de radioactivité CCM. 30 Déterminer les intensités des signaux TLC comme aire sous la courbe. Calculer le RCP du traceur comme suit: RCP = Une Ga-EOB-DTPA / (A Ga-free + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-colloïdal) ∙ 100% Une Ga-EOB-DTPA: aire sous la courbe de 68 Ga [EOB-DTPA] Une Ga-libre: aire sous la courbe de droits 68 Ga Une Ga-colloïdal: aire sous la courbe de 68 Ga colloïdales </li><li> Calculer RCP t / RCP 0 pour chaque point de temps. Tracer la RCP ainsi normalisée par rapport à la différence de temps depuis le point de départ t = 0 min. RCP t = RCP de 68 Ga [EOB-DTPA] au moment t. RCP 0 = RCP de 68 Ga [EOB-DTPA] à t = 0 min. </li></ol></li><li> La stabilité dans une solution saline tamponnée au phosphate (A) <ol><li> Pour 65 pi de solution d&#39;étiquetage ajouter 150 pi de PBS solution mère et 60 pi de solution d&#39;hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. Bien mélanger. </li><li> Retirer une aliquote de 1-5 pi pour effectuer une analyse TLC ( «point de départ»). stocker immédiatement la solution dans un incubateur à 37 ° C et retirer aliquotes pour effectuer une analyse TLC à représenterative points de temps de plus de 3 heures. </li></ol></li><li> Stabilité à l&#39; excès de apo -transferrin dans du PBS (B) <ol><li> Pour 120 pi de solution d&#39;étiquetage ajouter 50 pi de PBS solution mère et 430 pi de solution d&#39;hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. Ajouter 40 ul d&#39;une solution d&#39;apo -transferrin (25 mg / ml). Bien mélanger. </li><li> Retirer une aliquote de 1-5 pi pour effectuer une analyse TLC ( «point de départ»). stocker immédiatement la solution dans un incubateur à 37 ° C et retirer aliquotes pour effectuer une analyse TLC à des moments représentatifs de plus de 3 heures. </li></ol></li><li> Stabilité dans le sérum humain (C) <ol><li> 500 pi de sérum humain, ajouter 25 pi de solution de marquage et de 45 ul d&#39;une solution d&#39;hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. Bien mélanger. </li><li> Retirer une aliquote de 1-5 pi pour effectuer une analyse TLC ( «point de départ»). stocker immédiatement la solution dans un incubator à 37 ° C et retirer aliquotes d&#39;effectuer une analyse TLC à des moments représentatifs de plus de 3 heures. </li></ol></li></ol> 5. Détermination du coefficient de distribution LogD <ol><li> Exécuter les procédures d&#39;étiquetage décrites à la section 2. 50 pi de solution d&#39;étiquetage ajouter 20 pi de PBS solution mère et 170 pi de solution d&#39;hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. </li><li> Retirer 200 pi de cette solution et le mettre dans un V-flacon en plastique. Ajouter 200 pi de octanol. Fermez le flacon et vortex pendant 2 min. Ensuite, centrifuger l&#39;échantillon à 1 600 g pendant 5 min. </li><li> Retirer triplicats de 40 ul de la phase n octanol et la phase aqueuse chacun et les mettre dans V-flacons séparés. Veillez à ne pas mélanger les couches. </li><li> Mesurer l&#39;activité de chaque échantillon dans un compteur gamma à puits pendant 30 sec. Pour chaque échantillon , répéter immédiatement la mesure deux fois et calculer la moyenne de celle - ci l&#39; activité Ᾱ t </sub&gt; en coups par minute (cpm). Énumérer les Ᾱ ainsi gagné t, W1, Ᾱ t, W2 et Ᾱ t, W3 (activités dans les échantillons aqueux) et Ᾱ t, O1, Ᾱ t, O2, Ᾱ t, O3 (activités en octanol) ainsi que le respectif temps t de leur détermination. </li><li> Définir le point de la mesure du dernier échantillon t 0 fois. Déterminer et la liste en min At en calculant t = tt 0. Effectuer la correction de désintégration de Ᾱ t, en utilisant la formule suivante: Ᾱ 0 = Ᾱ t · 2 (At / 68 min). </li><li> Calculer Ᾱ 0, W comme la moyenne des Ᾱ 0, W1, Ᾱ 0, 0 Ᾱ W2 et W3 ainsi que Ᾱ 0, O comme la moyenne des Ᾱ 0, O1, Ᾱ 0, O2 et Ᾱ 0, O3. Calculer logD en utilisant la formule suivante: logD = log [(Ᾱ <sub&gt; 0, O · 40 ug) / (0 Ᾱ, W · 33 ug)]. </li><li> Effectuer toute l&#39;expérience en triple et calculer la moyenne logD ainsi que son écart-type. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

EOB-DTPA est accessible par une synthèse multi-étape 33 , mais peut tout aussi bien être isolé disponibles agents de contraste contenant de l&#39; acide gadoxetic. A cet effet, le Gd (III), l&#39;ion central peut être précipité avec un excès d&#39;acide oxalique. Après élimination de Gd (III), l&#39;oxalate et l&#39;acide oxalique le ligand peut être isolé par précipitation dans l&#39;eau froide à un pH de 1,5. Toutefois, afin d&#39;améliorer la Chromatographie du filtrat sur une colonne de rendement peut êtr...

L&#39; acide Gadoxetic, un nom commun pour le complexe Gd (III) du ligand EOB-DTPA 1, est un agent de contraste fréquemment utilisé dans l&#39; imagerie hépatobiliaire par résonance magnétique (IRM). 2,3 En raison de son absorption spécifique par les hépatocytes du foie et un pourcentage élevé de l&#39; excrétion hépatobiliaire elle permet la localisation des lésions focales et des tumeurs hépatiques. 2-5 Cependant, certaines limites de la technique IRM (par exemple, la toxicité des agents de contraste, applicabilité limitée chez les patients souffrant de claustrophobie ou de métal implants) appel à un outil de diagnostic alternatif . La tomographie par émission de positons (TEP) est une méthode d&#39;imagerie moléculaire, dans lequel une petite quantité d&#39;une substance radioactive (traceur) est administré, sur lequel sa distribution dans le corps est enregistré par un scanner TEP. 6 Le PET est un procédé dynamique qui permet une grande la résolution spatiale et temporelle des images ainsi que la quantification des résultats, sans avoir àtraiter les effets secondaires des agents de contraste IRM. La valeur informative de l&#39;information métabolique obtenu peut être encore accrue par combinaison avec des données anatomiques reçues des méthodes d&#39;imagerie supplémentaires, comme le plus souvent réalisé par imagerie hybride à la tomodensitométrie (CT) dans les scanners TEP / CT. La structure chimique d&#39;un traceur approprié pour le PET doit comprendre un isotope radioactif servant émetteur de positrons. Les positrons ont une durée de vie courte, car ils annihilent presque immédiatement avec les électrons des coquilles d&#39;atomes de tissu environnant. Par annihilation deux photons gamma 511 keV avec sens inverse de circulation sont émis, qui sont enregistrés par le scanner PET. 7,8 Pour former un traceur, nucléides PET peuvent être liés de manière covalente à une molécule, comme cela est le cas dans 2-désoxy- 2- [18 F] fluoroglucose (FDG), le traceur de TEP les plus largement utilisés. 7 Toutefois, un nucléide peut également former des liaisons de coordination à un ou plusieurs des ligands (par exemple ,[68 Ga] -DOTATOC 9,10) ou être appliquée sous forme de sels minéraux dissous (par exemple, [18 F] fluorure de sodium 11). Au total, la structure du traceur est cruciale car elle détermine son comportement biodistribution, le métabolisme et l&#39;excrétion. Un nucléide PET approprié devrait combiner des caractéristiques favorables comme l&#39;énergie de positons pratique et la disponibilité ainsi qu&#39;une demi-vie adéquate pour l&#39;enquête prévue. 68 Ga nucléide est devenue une force essentielle dans le domaine du PET au cours des deux dernières décennies. 12,13 Ceci est principalement dû à sa disponibilité à travers un système de générateur, ce qui permet l&#39; étiquetage sur place indépendamment dans le voisinage d&#39;un cyclotron. Dans un générateur, la mère nucléide 68 Ge est absorbée sur une colonne à partir de laquelle la fille nucléide 68 Ga est élue et ensuite marqué à un chélateur approprié. 6,14 Depuis le 68 Ga nucléide existe en tant que trivalent cation comme Gd (III) 10,13, chélateurs EOB-DTPA avec 68 Ga à la place donnerait un complexe avec la même charge globale négative que l&#39; acide gadoxetic. Par conséquent, que 68 Ga traceur peut combiner une spécificité similaire du foie caractéristique avec l&#39;aptitude à l&#39; imagerie TEP. Bien que l&#39; acide gadoxetic est acheté et administré sous forme de sel disodique, dans le contexte suivant nous allons nous référer à lui comme D.ieu [EOB-DTPA] et au complexe Ga non radioactif (III) comme Ga [EOB-DTPA], ou 68 Ga [ EOB-DTPA] dans le cas du composant radiomarqué pour des raisons de commodité. Pour évaluer leur applicabilité comme traceurs pour le PET, les complexes métalliques radioactifs doivent être examinées en détail dans in vitro, in vivo ou ex vivo des expériences en premier. Pour déterminer l&#39;aptitude à un problème médical respectif, diverses caractéristiques de traçage comme le comportement de biodistribution et le profil de jeu, la stabilité, la spécificité d&#39;organe et cellule ou tissue absorption doivent être étudiées. En raison de leur caractère non invasif, des déterminations in vitro sont souvent effectuées avant les expériences in vivo. Il est généralement admis que DTPA et ses dérivés sont des qualités limitées comme chélateurs pour 68 Ga en raison de ces complexes dépourvus d&#39; inertie cinétique, ce qui entraîne une décomposition rapide comparable lorsqu&#39;il est administré in vivo. 14-20 Ceci est principalement causé par apo- transferrine agissant en tant que concurrent pour 68 Ga dans le plasma. Néanmoins, nous avons étudié ce nouveau traceur concernant son application possible dans l&#39; imagerie hépatobiliaire, dans lequel des informations de diagnostic peut être fourni en quelques minutes après l&#39;injection 3,4,21-23, ce qui ne nécessite pas nécessairement la stabilité du traceur à long terme. A cet effet , nous avons isolé EOB-DTPA à partir d&#39; acide gadoxetic et initialement réalisé la complexation avec Ga naturel (III), qui existe en tant que mélange de deux isotopes stables, 69 Ga et 71 </sup&gt; Ga. Le complexe ainsi obtenu a servi en tant que norme non radioactif pour la chélation suivante de 68 Ga. Nous avons utilisé des méthodes établies et évalué simultanément leur aptitude à déterminer l&#39;efficacité de 68 Galabeling de EOB-DTPA et d&#39;enquêter sur la lipophilie de la nouvelle 68 Ga traceur et sa stabilité dans différents médias.

<table><tbody><tr><td>primovist</td><td></td> <td>Bayer-0,25 M</td><td></td></tr> <tr><td>chlorure de gallium(III)</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td></td><td></td>450898</tr><tr><td>eau (désionisée)</td><td>-</td><td>-</td><td>équipement de déionisation de l’eau du robinet par Auma-Tec GmbH</td></tr><tr><td>acide chlorhydrique 12 M</td><td>VWR</td><td>20252.29</td><td></td></tr><tr><td>hydroxyde de sodium</td><td>Polskie Odczynniki Chemiczne S.A.</td><td></td><td></td>810925429</tr><tr><td>l’acide oxalique</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>75688</td><td></td></tr><tr><td>acétate d’éthyle</td><td>Brenntag GmbH</td><td>10010447</td><td></td></tr><tr><td>gel de silice</td><td>Merck KGaA</td><td>1.10832.9025</td><td>Geduran Si 60 0.063-0.2&nbsp ; mm</td></tr><tr><td>TLC gel de silice 60 F254</td><td>Merck KGaA</td><td>1.16834.0001</td><td></td></tr><tr><td>méthanol</td><td>VWR</td><td>20903.55</td><td></td></tr><tr><td>éthanol</td><td>Brenntag GmbH</td><td>10018366</td><td></td></tr><tr><td>eiethylether</td><td>VWR</td><td>23807.468</td><td>stocké sur des plaques KOH</td></tr><tr><td>solution d’ammoniac (25 %)</td><td>VWR</td><td>1133.1</td><td></td></tr><tr><td>électrode de pH</td><td>VWR</td><td>662-1657</td><td></td></tr><tr><td>unité d’agitation et de chauffage</td><td>Heidolph</td><td>505-20000-00</td><td></td></tr><tr><td>pompe</td><td>Ilmvac GmbH</td><td>322002</td><td></td></tr><tr><td>spectromètre RMN</td> de <td></td><td></td>conception <td></td> personnalisée Bruker Coorporation-Ultra Shield 400</tr><tr><td></td><td></td><td></td> spectromètre de masse Thermo Fisher Scientific Inc.<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>analyseur élémentaire</td><td>Hekatech GmbH Analysentechnik-EuroVector</td><td></td> <td>EA 3000 CHNS</td></tr><tr><td>eau deutérée D2O</td><td>euriso-top</td><td>D214</td><td>99.90 % D</td></tr><tr><td colspan="4">Matériel/Equipement requis pour les procédures d’étiquetage</td></tr><tr><td>68Ge/68Ga générateur</td><td>ITG Isotope Technologies Garching GmbH</td><td>A150</td><td></td></tr><tr><td>système de pompe et de distribution</td><td>Scintomics</td><td></td> <td>GmbH-Variosystem</td></tr><tr><td>acide chlorhydrique 30 % (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00318.1000</td><td></td></tr><tr><td>eau (ultrapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.01262.1000</td><td></td></tr><tr><td>chlorure de sodium (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06406.0500</td><td></td></tr><tr><td>acétate de sodium (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06264.0050</td><td></td></tr><tr><td>acide acétique glacial (suprapur)</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00066.0250</td><td></td></tr><tr><td>citrate de sodium dihydraté</td><td>VEB Laborchemie Apolda</td><td>10782</td><td>>98.5 %</td></tr><tr><td>PS-H+ Cartouche (S)</td><td>Macherey-Nagel</td><td>731867</td><td>Chromafix</td></tr><tr><td>apo-Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>T2036</td><td></td></tr><tr><td>Tampon PBS (comprimés)</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>79382</td><td></td></tr><tr><td>sérum humain</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>H4522</td><td>à partir de flacons de plasma AB mâles humains</td></tr><tr><td>, colonnes, etc.</td><td></td>électrode <td>de pH de conception</td><td></td>personnalisée</tr><tr><td></td><td>Knick Elektronische Messger&auml ; te GmbH & Co. KG</td><td>765-Set</td><td></td></tr><tr><td>pompe binaire (HPLC)</td><td>Hewlett-Packard</td><td>G1312A (HP 1100)</td><td></td></tr><tr><td>Détecteur UV-Vis (HPLC)</td><td>Hewlett-Packard</td><td>G1315A (HP 1100)</td><td></td></tr><tr><td>détecteur radioactif (HPLC)</td><td>EGRC Berthold</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC C-18-PFP colonne</td><td>Advanced Chromatography Technologies Ltd.</td><td>ACE-1110-1503/A100528</td><td></td></tr><tr><td>Flacons en verre HPLC GTG</td><td>Glastechnik Graefenroda GmbH</td><td>8004-HP-H/i3&micro ;</td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Eppendorf-flacons</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>en plastique</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>6542.007</td><td></td></tr><tr><td>flacons en plastique</td><td>Greiner Bio-One International GmbH</td><td>717201</td><td></td></tr><tr><td>activimètre</td><td>MED Nuklear-Medizintechnik Dresden</td><td></td> <td>GmbH-Isomed 2010</td></tr><tr><td>pince à épiler</td><td></td> incubateur <td>sur mesure</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Heraeus Instruments GmbH</td><td>51008815</td><td></td></tr><tr><td>mélangeur vortex</td><td></td> Fisons-Whirlimixer <td></td><td></td></tr><tr><td>centrifugeuse</td><td>Heraeus Instruments GmbH</td><td>75003360</td><td></td></tr><tr><td>compteur de puits gamma</td><td>MED Nuklear-Medizintechnik Dresden</td> <td>GmbH-Isomed</td> <td>2100</td></tr><tr><td>eau pour la chromatographie</td><td>Merck KGaA</td><td>1.15333.2500</td><td></td></tr><tr><td>acétonitrile pour la chromatographie</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00030.2500</td><td></td></tr><tr><td>acide trifluoroacétique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>91707</td><td></td></tr><tr><td>Scanner de radioactivité TLC</td><td>Raytest Isotopenmessger&auml ; te GmbH</td><td>B00003875</td><td>équipé d’un détecteur de plastique bêta</td></tr></tbody></table>

enquêtes sur le complexe ga (iii) de eob-dtpa et son<sup&gt; 68</sup&gt; ga radiomarqué analogique

Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

Nous démontrons une méthode pour l&#39;isolement de EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris- (carboxyméthyl) -4- (éthoxybenzyl) d&#39;acide -undecanedioic) de son Gd (III) et les protocoles de la préparation de sa non-radioactive, à savoir, Ga naturel (III), ainsi que radioactifs 68 complexes Ga roman. Le ligand, ainsi que la Ga (III) ont été caractérisés par résonance magnétique (RMN) , spectroscopie nucléaire, spectrométrie de masse et analyse élémentaire. 68 Ga a été obtenue par un procédé d&#39;élution à partir d&#39; un étalon / 68 Ga générateur 68 Ge. Des expériences visant à évaluer l&#39;efficacité 68 Ga-étiquetage des EOB-DTPA à pH 3,8-4,0 ont été réalisées. Établi des techniques d&#39;analyse de radio CCM (chromatographie sur couche mince) et HPLC radio (chromatographie en phase liquide à haute performance) ont été utilisés pour déterminer la pureté radiochimique du traceur. Comme une première enquête sur le caractère lipophile de 68 Ga Traceurs le n- octanol / distributio d&#39;eaun coefficient de 68 espèces Ga présentes dans une solution à pH 7,4 a été déterminée par un procédé d&#39;extraction. mesures in vitro de la stabilité du traceur dans divers milieux à pH physiologique ont été effectuées, révélant des taux de décomposition.

Le ligand EOB-DTPA et du Ga non radioactif (III) ont été analysés par 1 H et 13 C {1 H} spectroscopie RMN, spectrométrie de masse et analyse élémentaire. Les résultats figurant au tableau 1 et représentés sur les figures 1-6 vérifier la pureté des substances. Elution du générateur Ga 68 Ge / 68 a abouti à des solutions de 400-600 ...

Une procédure pour l&#39;isolement de EOB-DTPA et complexation ultérieure avec Ga naturel (III) et 68 Ga est présenté ici, ainsi que d&#39; une analyse approfondie de tous les composés et les enquêtes sur l&#39; efficacité de l&#39; étiquetage, de la stabilité in vitro et l&#39;octanol / eau coefficient du complexe radiomarqué de distribution.

Enquêtes sur le complexe Ga (III) de EOB-DTPA et son<sup&gt; 68</sup&gt; Ga radiomarqué analogique

We demonstrate a method for the isolation of EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris(carboxymethyl)-4-(ethoxybenzyl)-undecanedioic acid) from its Gd(III) ...

L'objectif général de cette procédure est d'évaluer un nouveau complexe radioactif au gallium-68 pour l'imagerie moléculaire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la chimie des traceurs au gallium-68, telles que les conditions de marquage, la stabilité du traceur et sa lipophilie. La technique de marquage radioactif est simple et permet une détermination rapide des résultats tout en nécessitant uniquement des quantités minimales de matériel.Pour commencer cette procédure, ajoutez trois millilitres de solution injectable de gadoxétate à 0,25 molaire dans un ballon. Ajoutez ensuite 500 milligrammes d'acide oxalique à la solution de gadoxétate sous agitation. Après une heure d'agitation, filtrez la suspension à travers un fritté sous pression réduite.Laver le résidu trois fois avec trois millilitres d'eau. Ensuite, rassembler les filtrats aqueux dans un bécher et placer une électrode de pH dans la solution. Ajouter de l'acide chlorhydrique 12 M au filtrat jusqu'à ce que le pH soit d'environ 0,1.Après avoir éliminé le solvant sous vide, laver soigneusement le résidu avec de l'acétate d'éthyle chaud pour éliminer l'excès d'acide oxalique. Ensuite, sécher le résidu sous vide. Une fois le résidu sec, le redissoudre dans deux millilitres d'eau déionisée, puis refroidir la solution dans un bain de glace.Sans retirer le bain de glace, ajouter de l'hydroxyde de sodium 0,5 molaire goutte à goutte jusqu'à l'observation d'un solide incolore et collant. Ensuite, retirer l'eau à l'aide d'une pipette. Pour préparer une solution mère de trichlorure de gallium à 0,11 molaire, dissoudre 1,94 gramme du solide dans 100 millilitres d'eau.Ensuite, dissoudre 80 milligrammes de DTPA-EOB dans 10 millilitres d'eau. Si nécessaire, chauffer la solution pour obtenir une dissolution complète. Ajouter 1,4 millilitre de la solution mère de trichlorure de gallium à la solution de DTPA-EOB et placer une électrode de pH dans le bécher.Ensuite, ajoutez goutte à goutte une solution aqueuse d'ammoniaque diluée jusqu'à ce que le pH de la solution soit d'environ 4,1. Après élimination du solvant sous vide, placez le résidu dans un ballon muni d'une tête en acier dotée d'un col central et d'un col latéral parallèle. Équipez le col central d'un doigt réfrigérant et le col latéral d'une sortie vers une pompe à vide.Chauffer le résidu sous pression réduite. Retirer périodiquement le chlorure d'ammonium sublimé du ballon à l’aide d’un chiffon légèrement humide. Préconditionner une cartouche PSH plus en la rinçant lentement avec 1 millilitre d’acide chlorhydrique 1 molaire, puis avec 5 millilitres d’eau.Ensuite, éluer la colonne de silice du générateur avec quatre millilitres d'acide chlorhydrique 0,05 molaire et charger l'éluate de gallium-68 dans la cartouche PSH plus. Rincer la cartouche avec cinq millilitres d'eau. Après séchage à l'air, éluer le gallium-68 de la cartouche avec un millilitre de chlorure de sodium acide à cinq molaire.Ajoutez maintenant 50 microlitres de l’éluat de gallium-68 et 50 microlitres d’une solution mère d’EOB-DTPA à 19 micromolaire préparée précédemment dans un flacon. Ajoutez 300 microlitres de tampon pour élever le pH à 4,0. Agitez brièvement et incubez la solution à température ambiante pendant cinq minutes.Transférez un aliquot de cinq à 20 microlitres de la solution dans un flacon HPLC. Ensuite, effectuez une analyse radio-HPLC sur une colonne en phase inverse C18. Pour effectuer les mesures de stabilité in vitro, prélèvez des échantillons de la solution de marquage contenant de six à 12 mégabecquerels de traceur.Réaliser une analyse par CCM radiomarquée sur des plaques d'aluminium recouvertes de gel de silice de 80 millimètres en utilisant une solution aqueuse de citrate de sodium 0,1 molaire comme éluant. Analyser les plaques à l'aide d'un scanner de radioactivité pour CCM. Pour déterminer la stabilité dans la solution saline tamponnée au phosphate, ajouter 150 microlitres de solution mère de PBS 10 millimolaire et 60 microlitres de soude 0,1 molaire à 65 microlitres de solution de marquage.Mélangez soigneusement la solution. Ensuite, transférez un aliquot de un à cinq microlitres de la solution sur une plaque de silice pour une analyse par CCM. Conservez immédiatement la solution dans une étuve à 37 degrés Celsius.Prélèver des aliquotes pour effectuer une analyse par CCM à des intervalles de temps représentatifs sur une période de trois heures. Pour déterminer la stabilité face à un excès d'apotransferrine, ajouter 50 microlitres d'une solution mère de PBS à 10 millimolaire et 430 microlitres d'hydroxyde de sodium à 0,1 molaire à 120 microlitres de la solution de marquage. Ajouter 40 microlitres d'une solution d'apotransferrine à 25 milligrammes par millilitre et mélanger soigneusement la solution.Ensuite, transférez un aliquot de un à cinq microlitres de la solution sur une plaque de silice pour l'analyse par CCM. Conservez immédiatement la solution dans une étuve à 37 degrés Celsius. Prélevez des aliquots pour effectuer l'analyse par CCM à des points temporels représentatifs sur une période de trois heures.Pour déterminer la stabilité dans le sérum humain, ajouter 45 microlitres de soude 0,1 molaire et 500 microlitres de sérum humain à 25 microlitres de solution de marquage. Après avoir soigneusement mélangé la solution, transférer un aliquot de un à cinq microlitres sur une plaque de silice pour une analyse par CCM. Conserver immédiatement la solution dans une étuve à 37 degrés Celsius.Prélèver des aliquotes pour effectuer une analyse par CCM à des points temporels représentatifs sur une période de trois heures. Pour la détermination du coefficient de distribution, ajouter 20 microlitres de solution mère de PBS à 10 millimolaire et 170 microlitres de soude à 0,1 molaire à 50 microlitres de solution de marquage. Transférer 200 microlitres de la solution dans un flacon en plastique en forme de V et ajouter 200 microlitres de n-octanol.Fermez le flacon et vortexez pendant deux minutes, puis centrifugez l'échantillon à 1600 ×g pendant cinq minutes. Après la centrifugation, prélève en triplicat 40 microlitres de la phase n-octanol et de la phase aqueuse, et placez-les dans des flacons en plastique en forme de V séparés. Enfin, mesurez l'activité de chaque échantillon dans un compteur gamma à puits pendant 30 secondes.Le composé EOB-DTPA ligandé et le complexe de gallium trois non radioactif ont été analysés par spectroscopie RMN du proton et du carbone, spectrométrie de masse et analyse élémentaire. La procédure de marquage conduit à la formation du traceur souhaité, le gallium-68 EOB-DTPA, identifié par un pic en radio-HPLC présentant un temps de rétention de 2,8 minutes. La comparaison avec le temps de rétention de l'étalon froid à 220 nanomètres confirme un marquage réussi.L'efficacité de marquage au gallium-68 de l'EOB-DTPA a été étudiée en déterminant le rendement de marquage en fonction de la concentration en ligand par HPLC. Un chromatogramme représentatif d'une plaque de CCM analysée à l'aide d'un scanneur de radioactivité pour CCM est présenté ici. Afin d'étudier la stabilité du traceur, la pureté radiochimique en fonction du temps a été déterminée par CCM.Le pourcentage standardisé de traceur intact est représenté en fonction du temps ici. Les valeurs d'activité et le calcul ultérieur du coefficient de distribution sont indiqués ici. Après cette procédure, d'autres méthodes, telles que des expériences in vitro, peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires, comme la biodistribution et la dynamique de captation.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension des techniques utilisées pour évaluer et analyser les traceurs au gallium-68 en imagerie moléculaire. N’oubliez pas que le travail avec des substances radioactives peut être nocif. Il ne doit être effectué que par du personnel formé.Des précautions de sécurité, telles que l'utilisation de protections en plomb et de pinces, doivent toujours être prises lors de l'exécution de cette procédure.

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