Name: Préparation et caractérisation des lipophile doxorubicine micelles Pro-drogue (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Découvrez la préparation et la caractérisation de micelles contenant un prodrug lipophile de doxorubicine. Cette méthode améliore le chargement et la stabilité du médicament pour une ciblage tumoral optimisé.

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Ce travail a été soutenu par les subventions suivantes : subvention NIH-SC3, subvention NSF-PREM, bourse de recherche de la faculté de l’Université Hampton. Nous tenons à remercier Mme Michele A. Cochran du Virginia Institute of Marine Science (VIMS) pour l’utilisation de l’analyseur de taille de particules. Nous tenons également à remercier Mme Corinne R. Ramaley pour la révision du manuscrit.

1. Synthèse de la DOX-PA <ol><li> Peser 390 mg de doxorubicine et 243 mg d&#39;hydrazide d&#39;acide palmitique, et les transférer dans un ballon à fond rond. </li><li> Ajouter 150 ml de methanol anhydre dans le flacon avec une seringue en verre. Ajouter 39 ul d&#39;acide trifluoroacétique (TFA) avec une pipette. L&#39;utilisation d&#39;un agitateur magnétique, agiter le mélange de réaction pendant 18 heures à la température ambiante dans l&#39;obscurité. REMARQUE: Les quantités de matériaux de réaction peuvent être mis à l&#39; échelle vers le haut ou vers le bas pour obtenir des quantités différentes de DOX-PA. Le rapport des réactifs doit être maintenue dans les mêmes proportions. Les réactions en utilisant des quantités DOX dans l&#39;intervalle de 78 mg à 1 170 mg peut être effectuée dans un laboratoire de chimie régulière. </li><li> La purification de la DOX-PA en utilisant une colonne de gel de silice. 17 <ol><li> Retirer le solvant du mélange réactionnel avec un évaporateur rotatif. Ajouter 3 g de gel de silice après que le volume du mélange est réduit à environ 20 ml. Poursuivre l&#39;évaporation rotative pour donner des poudres sèches et permettre til l&#39;adsorption des produits sur le gel de silice. Maintenir l&#39;échantillon sous vide pendant 30 minutes supplémentaires après que les poudres sèches sont formées. </li><li> Empaqueter 50 g de gel de silice dans une colonne en utilisant du dichlorométhane comme solvant. Ajouter avec précaution l&#39;échantillon de gel de silice contenant le produit adsorbé à la colonne. </li><li> Éluer la colonne avec un mélange de dichlorométhane et de methanol, tout en augmentant progressivement le pourcentage de methanol, ce qui augmente la polarité du solvant (tableau 1). </li><li> Collecter des fractions d&#39;éluant dans des tubes à essai (25 ml / tube) et suivre les progrès par chromatographie sur couche mince (CCM). </li><li> Combinez toutes les fractions contenant pur DOX-PA et éliminer le solvant en utilisant un évaporateur rotatif jusqu&#39;à la poudre sèche est formée. En outre sécher le produit sous vide O / N. </li></ol></li><li> Analyse des DOX-PA par CCM. <ol><li> Coupez un 4 cm section de la plaque TLC x 8 cm. solutions d&#39;échantillons ponctuels de 0,5 cm à partir du bas de la plaque de TLC en utilisant des capillaires de détachage sont réunisHanol comme solvant. </li><li> Placer la plaque de CCM dans une chambre de développement contenant un mélange de dichlorométhane et de méthanol (3/1, v / v). La profondeur du solvant doit être un peu moins de 0,5 cm. </li><li> Retirer la plaque de la chambre de développement lorsque le front de solvant atteint le sommet de la plaque. Marquer l&#39;emplacement du front du solvant avec un crayon et laisser sécher la plaque. Placer la plaque de CCM dans une chambre de coloration contenant de la vapeur d&#39;iode saturée dans le but de visualiser les échantillons. </li></ol></li><li> Analyse de la DOX-PA avec 1 H-résonance magnétique nucléaire de spectroscopie (RMN-1H). 18 <ol><li> Dissoudre 15 mg de DOX-PA dans 1 ml de sulfoxyde de méthyle-d6 (DMSO) et transférer l&#39;échantillon dans un tube RMN. </li><li> Insérer le tube RMN dans l&#39;aimant de l&#39;instrument RMN. Mesurer le spectre de proton, avec du DMSO comme solvant. Retirer le tube RMN de l&#39;aimant. Analyser le résultat RMN 18. </li></ol></li></ol> 2. Préparation de DOX-PA micelles par la méthode du film de dispersion <ol><li> Dissoudre DSPE-PEG (40 mg) et de la DOX-PA (4 mg) avec 2 ml de methanol dans un flacon de 10 ml en verre. </li><li> Retirer le solvant organique sous vide en utilisant un évaporateur rotatif jusqu&#39;à un mince film se forme dans le flacon. REMARQUE: Vous pouvez également évaporer les solvants organiques sous gaz inerte (par exemple, l&#39; argon ou de l&#39; azote gazeux) pour former un film et de garder le flacon dans un dessiccateur sous vide pour éliminer davantage de solvant résiduel. </li><li> Transfert 2 ml de sérum physiologique tamponnée au phosphate de Dulbecco (pH 7,4, DPBS) dans le flacon de verre. </li><li> Placer le flacon dans un bain à ultrasons pendant 3 minutes à température ambiante pour générer des micelles. NOTE: Puissance ultrasonique varie selon les différents modèles de bains à ultrasons. Sélectionnez une unité qui peut générer assez de puissance à ultrasons pour disperser le film polymère / médicament mince. La puissance de sortie du bain à ultrasons utilisé dans ce protocole est de 110 W. </li><li> Gardez micelles à 4 ° C pour le stockage à court terme et -20 ° C pour longtempsstockage -terme. NOTE: Alternativement, les micelles peuvent aussi être lyophilisé et reconstitué avec de l&#39;eau avant utilisation. Normalement, il ne cryoprotecteur ou lyoprotecteur est nécessaire pour cette formulation. </li></ol> 3. Caractérisation de DOX-PA micelles <ol><li> Détermination de la concentration de DOX-PA dans les micelles et l&#39; efficacité de la drogue encapsulation <ol><li> Dissoudre DOX-PA synthétisé dans les étapes précédentes dans du DMSO pour préparer des solutions de DOX-PA de cinq concentrations différentes: 1 ug / ml, 5 pg / ml, 20 pg / ml, 50 pg / ml et 100 pg / ml. Mesurer l&#39;absorption de la solution de DOX-PA avec un spectromètre UV-VIS à 490 nm. Générer une courbe standard basé sur les concentrations de médicament DOX-PA et leur absorption correspondant à 490 nm. </li><li> Diluer 25 ul d&#39;une micelle de médicament chargé avec 500 ul de DMSO. Mesurer l&#39;absorption à 490 nm avec un spectromètre UV-VIS. Calculer les concentrations de médicament avec la courbe standard générée en 3.1.1. </li><li> Calculer l&#39;efficacité d&#39;encapsulation en utilisant l&#39;équation suivante: L&#39;encapsulation des médicaments Rendement (%) = (quantité de drogue dans les micelles) / (quantité de médicament ajoutée) x 100% </li></ol></li><li> Caractérisation de la taille des particules par diffusion de lumière dynamique (DLS) , <ol><li> Diluer micelles avec du DPBS (pH 7,4) à une concentration finale de DSPE-PEG de 1 mg / ml. Analyser un échantillon de 2 ml avec un analyseur de taille de particules pour obtenir la taille et indice de polydispersité de la moyenne Z (PDI). </li></ol></li><li> L&#39; évaluation in vitro de l&#39; activité anti - cancéreuse REMARQUE: Utiliser une technique stérile appropriée et fonctionner à l&#39;intérieur d&#39;une enceinte de sécurité biologique. <ol><li> Éliminer le milieu de culture cellulaire à partir d&#39; un flacon de culture cellulaire (par exemple, T25) contenant des cellules DU-145 du cancer de la prostate humain et rincer les cellules avec 2 ml de DPBS (pH 7,4). </li><li> Aspirer DPBS, ajouter 1 ml de solution de trypsine (0,25%), et incuber pendant 2 minutes à 37 ° C pour détacher les cellules. </li><li> Ajouter 10 ml de milieu de culture cellulaire (RPMI 1640 + 10% de sérum bovin fœtal + 1% d&#39;antibiotique-antimycotique), lorsque la plupart des cellules sont détachées du flacon. Transfert des cellules dans un tube centrifuge de 15 ml et centrifuger les cellules à 1000 g pendant 5 min. </li><li> Remettre en suspension le culot de cellules avec 5 ml de milieu de culture cellulaire et de prélever un échantillon pour le comptage du nombre de cellules avec un hémocytomètre. Diluer les cellules avec un milieu de culture de cellules à une densité de 50.000 cellules / ml. Ajouter la suspension de cellules diluée dans une plaque de culture cellulaire à 96 puits (100 pl / puits). Incuber les cellules dans un incubateur de culture cellulaire (37 ° C, 5% CO2) pendant 18 heures pour permettre la fixation des cellules. </li><li> Diluer DOX diméthylsulfoxyde (DMSO), la solution et la solution de DOX-PA DMSO avec un milieu de culture cellulaire pour obtenir une concentration finale de médicament de 0,1 pM, 0,5 pM, 2 pM, 5 pM et 10 pM, respectivement. Maintenir la concentration finale de DMSO dans tous les échantillons ci-dessus à 0,5%. Diluer micellaire DOX-PA avec un milieu de culture cellulaire pour obtenir finale du médicament concentrations de 0,1 pM, 0,5 pM, 2 pM, 5 pM et 10 pM, respectivement. Utiliser le milieu de culture cellulaire en blanc un contrôle. </li><li> Retirer la plaque de culture cellulaire à 96 puits de l&#39;incubateur et remplacer le milieu de culture cellulaire avec 100 ul de milieu contenant différents agents de traitement préparées dans l&#39;étape 3.3.5 (n = 4 pour chaque groupe). Incuber les cellules dans l&#39;incubateur de culture cellulaire (37 ° C, 5% CO 2) pendant un temps supplémentaire de 72 heures. </li><li> Aspirer le milieu et ajouter 100 ul de milieu contenant 0,5 mg / ml d&#39;acide 3- (4,5-diméthyl-thiazol-2-yl) -2,5-diphényl tétrazolium (MTT). </li><li> Incuber les cellules dans l&#39;incubateur de culture cellulaire pendant encore 2 heures. Retirez délicatement le moyen et ajouter 100 pi de DMSO pour dissoudre les cristaux de formazan. </li><li> Mesurer l&#39;absorbance au spectrophotomètre pour microplaques à une longueur d&#39;onde de 570 nm et une longueur d&#39;onde de 670 nm de référence. </li><li> Calculer la viabilité cellulaire en utilisant l&#39;équation suivante: <strong&gt; Viabilité de cellule (%) = (A Test / Un contrôle) × 100% REMARQUE: Comparer la viabilité cellulaire entre les différents groupes en utilisant une analyse de variance (Anova) test statistique. Calculer la CI50 sur la base de la viabilité cellulaire par rapport à des données de concentration de médicament. </li></ol></li></ol>

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans ce travail, nous décrivons une méthode film dispersion simple, rapide pour la préparation de micelles. Cette méthode utilise les propriétés d&#39; auto-assemblage d&#39;un polymère amphiphile (par exemple, DSPE-PEG) pour former des micelles structuré noyau-enveloppe dans un environnement aqueux. Cette méthode de préparation micellaire présente plusieurs avantages. 1. Il comprend un processus de formulation simple, ce qui évite l&#39;utilisation de mesures de réduction de taille complexes (telles que l&#39;...

La chimiothérapie est couramment utilisé pour traiter diverses formes de cancers. La plupart, sinon la totalité, des médicaments de chimiothérapie ont des effets secondaires toxiques qui peuvent varier selon les conditions mineures administrable, tels que la nausée et de diarrhée, à des conditions plus menaçant la vie. Parce que la plupart des médicaments anticancéreux sont toxiques, l&#39;exposition non sélective de ces médicaments à des tissus normaux provoque inévitablement la toxicité. Par conséquent, il y a un grand besoin d&#39;une approche thérapeutique qui peut sélectivement délivrer des médicaments dans les cellules cancéreuses. Un autre défi à l&#39;administration de médicaments anticancéreux est leur solubilité dans l&#39;eau pauvre. Habituellement, des agents de solubilisation sont nécessaires pour formuler ces médicaments peu solubles. Cependant, la plupart des agents solubilisants, tels que le diméthylsulfoxyde (DMSO), le Cremophor EL, et le polysorbate 80 (Tween 80) peut provoquer une toxicité hépatique et rénale, une hémolyse, des réactions d&#39;hypersensibilité aiguë et des neuropathies périphériques. 1 Par conséquent, les formulations sûres et biocompatibles sont nécessaires pour l&#39;utilisation clinique des pauvresmédicaments anticancéreux ly solubles. Nanocarriers sont prometteurs systèmes de délivrance de médicaments pour relever les défis ci-dessus. Ces nanocarriers comprennent des liposomes, 2 nanoparticules, 3 micelles, 4-7 conjugués polymère-médicament, 8 et des matériaux inorganiques. 9 Plusieurs produits de la nanomédecine (par exemple, Doxil, Abraxane, et Genexol) ont été approuvés par les organismes de réglementation pour traiter les patients atteints de cancer. dix Les micelles polymériques sont prometteurs transporteurs de délivrance de médicaments à l&#39; échelle nanométrique, qui ont été utilisés avec succès pour l&#39;administration de médicaments anticancéreux. 4-7,11,12 micelles polymères typiques sont préparés à partir de polymères amphiphiles à travers un processus d&#39; auto-assemblage. Les micelles polymères structurés à noyau-enveloppe comprennent une enveloppe hydrophile et un noyau hydrophobe. La coquille hydrophile peut stériquement stabiliser micelles et prolonger leur circulation dans le flux sanguin. Le noyau hydrophobe peut effectivement encapsuler d hydrophobetapis. En raison de la petite taille de micelles (typiquement inférieure à 200 nm) et des propriétés de longue circulation, les micelles polymères sont censés atteindre le ciblage tumoral grâce à une meilleure perméabilité et de rétention (EPR) effets (tumeur passive ciblage). la stabilité de chargement de la drogue est critique pour la capacité de ciblage tumoral de micelles. Pour parvenir à un ciblage optimal des tumeurs, les micelles doivent avoir une fuite minimale de médicament avant d&#39;atteindre le site de la tumeur, mais libérer rapidement le médicament après être entré dans les cellules cancéreuses. En outre, la stabilité de la formulation est également une condition essentielle pour le développement de produits, parce que la stabilité de la formulation détermine la faisabilité du développement des produits, ainsi que la durée de vie des produits développés. Récemment, beaucoup d&#39;efforts ont été faits pour améliorer le chargement de la drogue dans les transporteurs de livraison. L&#39;approche pro-médicament lipophile est une stratégie qui a été explorée pour améliorer la charge de médicament dans des nanoparticules lipidiques et émulsions. 13,14 Le conjugation de lipides avec des médicaments peut améliorer de manière significative leur lipophilie et améliorer le chargement et la rétention dans les composants lipophiles de nanocarriers. Ici, nous décrivons un protocole pour la préparation de la doxorubicine lipophile pro-drogue micelles chargées. Tout d&#39;abord, la procédure de synthèse pour la doxorubicine pro-médicament lipophile est décrit. Puis, un protocole pour générer des micelles avec un procédé de film de dispersion est introduite. Cette méthode a été utilisée avec succès dans les études précédentes. 5 DSPE-PEG a été choisi en tant que matériau de support pour préparer des micelles parce qu&#39;il a été utilisé avec succès pour la livraison micelle de médicaments. 15,16 Enfin, nous décrivons plusieurs essais in vitro utilisées pour caractériser micellaire Les formulations et d&#39;évaluer l&#39;activité anti-cancéreuse.

<table><tbody><tr><td>DSPE-PEG2K</td><td>Cordenpharm</td><td>LP-R4-039</td><td>>95 %</td></tr><tr><td>Doxorubicine</td><td>LC Laboratories</td><td>D-4000</td><td>>99 %</td></tr><tr><td>Hydrazide d’acide palmitique</td><td>TCI AMERICA&nbsp ; &nbsp ;</td><td>P000425G</td><td>>98,0 %</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>ACROS Organics</td><td>610981000</td> chlorure de méthylène <td>anhydre</td></tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>PÊCHEUR ;</td><td>D151-4</td><td>99,90 %</td></tr><tr><td>Méthylsulfoxyde-d6</td><td>ACROS Organics</td><td>AC320760075</td><td>solvant RMN</td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique&nbsp ;</td><td>ACROS Organics</td><td>AC293811000</td><td>99,50</td></tr> %<tr><td>Gel de silice</td><td>FISHER&nbsp ;</td><td>L-7446</td><td>230-400 maille</td></tr><tr><td>Baker Flex Plaques TLC</td><td>FISHER&nbsp ;</td><td></td><td></td>NC9990129</tr><tr><td>DPBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>DU 145&nbsp ; Cellules cancéreuses de la prostate</td><td>ATCC</td><td>HTB-81</td><td></td></tr><tr><td>MTT</td><td>ACROS Organics</td><td>158990050</td><td>98 %</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>MEDIATECH INC&nbsp ;</td><td>10041CV</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotique-Antimycosique&nbsp ;</td><td>TECHNOLOGIES DE LA VIE&nbsp ;</td><td>15240062</td><td>100x solution mère</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>LIFE TECHNOLOGIES&nbsp ;</td><td></td><td></td>10437077</tr><tr><td>Spectroscopie par résonance magnétique nucléaire</td><td>Varian, Inc</td><td></td><td>300 RMN&nbsp ;</td></tr><tr><td>B&uuml ; chi R-3 Rotavapor</td><td>Buchi</td><td>1103022V1&nbsp ;</td><td>Évaporateur rotatif</td></tr><tr><td>Bain à ultrasons</td><td>BRANSON ULTRASONICS CORPORATION&nbsp ;</td><td></td><td></td>CPX952318R</tr><tr><td>spectromètre UV-VIS Biomate 3</td><td>Thermo Spectronic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano ZS90&nbsp ;</td><td>Malvern Instruments Analyse</td><td></td><td>de la taille des particules</td></tr><tr><td>Spectrophotomètre de microplaques&nbsp ;</td><td>Rio-Rad</td><td>Benchmark Plus&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur de culture cellulaire</td><td>Napco</td><td>CO2 6000</td><td></td></tr><tr><td>Enceinte de sécurité biologique</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SigmaPlot&nbsp ;</td><td>Systat Software, Inc.</td><td></td><td>Logiciel analytique</td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire à 96 puits</td><td>Becton Dickinson</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine&nbsp ; 0,25</td> %<td>Corning Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

préparation et caractérisation des lipophile doxorubicine micelles pro-drogue

Preparation and Characterization of Lipophilic Doxorubicin Pro-drug Micelles

Les micelles ont été utilisées avec succès pour l’administration de médicaments anticancéreux. Les polymères amphiphiles forment des micelles structurées cœur-coquille dans un environnement aqueux par auto-assemblage. Le noyau hydrophobe des micelles fonctionne comme un réservoir de médicament et encapsule les médicaments hydrophobes. La coquille hydrophile empêche l’agrégation des micelles et prolonge également leur circulation systémique in vivo. Dans ce protocole, nous décrivons une méthode de synthèse d’un pro-médicament lipophile de doxorubicine, l’acide doxorubicine-palmitique (DOX-PA), qui augmentera la charge du médicament dans les micelles. Un agent de liaison hydrazone sensible au pH a été utilisé pour conjuguer la doxorubicine avec le lipide, ce qui facilite la libération de doxorubicine libre à l’intérieur des cellules cancéreuses. Le DOX-PA synthétisé a été purifié à l’aide d’une colonne de gel de silice en utilisant du dichlorométhane/méthanol comme éluant. Le DOX-PA purifié a été analysé par chromatographie sur couche mince (CCM) et spectroscopie par résonance magnétique nucléaire 1H (RMN 1H). Une méthode de dispersion de film a été utilisée pour préparer des micelles DSPE-PEG chargées de DOX-PA. De plus, plusieurs méthodes de caractérisation des formulations micellaires sont décrites, notamment la détermination de la concentration et de l’efficacité d’encapsulation de DOX-PA, la mesure de la taille et de la distribution des particules et l’évaluation des activités anticancéreuses in vitro. Ce protocole fournit des informations utiles concernant la préparation et la caractérisation des micelles chargées de médicaments et facilitera ainsi la recherche et le développement de nouveaux nanomédicaments anticancéreux à base de micelles.

La figure 1 montre le schéma de synthèse de la DOX-PA. DOX-PA a été synthétisé par la conjugaison de l&#39;acide palmitique avec de la doxorubicine à travers une liaison hydrazone sensible au pH. Un léger excès de l&#39;hydrazide de l&#39;acide palmitique a été utilisé pour faciliter l&#39;achèvement de la réaction. Cette méthode de réaction a une efficacité très élevée et seulement une petite quantité de doxorubicine restant après une réaction de 18 h (Figure 2)...

Un protocole pour la préparation et la caractérisation de la doxorubicine lipophile pro-médicament chargé 1,2-distéaroyl sn - glycéro-3-phosphoethanolamine- N - [amino (polyéthylène glycol) -2000] (DSPE-PEG) micelles est décrite.

Préparation et caractérisation des lipophile doxorubicine micelles Pro-drogue

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous ...

L'objectif général de ce protocole est de décrire les procédures permettant de préparer et de caractériser des formulations de micelles chargées en un pro-médicament lipophile de la doxorubicine. Cette méthode offre une approche simple et fiable pour la formulation de micelles. La synthèse d'un pro-médicament lipophile de la doxorubicine peut améliorer la charge en médicament et la stabilité, répondant ainsi à un défi important dans le développement de formulations micellaires.La formulation en micelles peut améliorer le ciblage médicamenteux vers les tumeurs et, par conséquent, réduire la toxicité des traitements anticancéreux. En plus de l'application décrite dans ce projet, cette technique peut également être utilisée pour préparer la nanomédecine à partir d'agents. Pour synthétiser le prodrug lipophile de doxorubicine DOX-PA, peser 390 milligrammes de doxorubicine et 243 milligrammes d'hydrazide d'acide palmitique, puis les transférer dans un ballon à fond rond.Ajouter 150 millilitres de méthanol anhydre dans le flacon à l’aide d’une seringue en verre. Puis ajouter 39 microlitres d’acide trifluoroacétique, ou TFA, à l’aide d’une pipette. À l’aide d’un agitateur magnétique, agiter le mélange réactionnel pendant 18 heures à température ambiante et à l’abri de la lumière.Pour purifier le DOX-PA à l'aide d'une colonne de gel de silice, éliminez d'abord le solvant du mélange réactionnel à l'aide d'un évaporateur rotatif. Ajoutez trois grammes de gel de silice une fois le volume du mélange réduit à environ 20 millilitres. Poursuivez l'évaporation sous vide rotatif afin d'obtenir des poudres sèches et permettre l'adsorption des produits sur le gel de silice.Conserver l'échantillon sous vide pendant encore 30 minutes après la formation des poudres sèches. Introduire 50 grammes de gel de silice dans une colonne en utilisant le dichlorométhane comme solvant. Ajouter soigneusement l'échantillon de gel de silice contenant le produit absorbé sur la colonne.Éluerez la colonne avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol en augmentant progressivement le pourcentage de méthanol, augmentant ainsi la polarité du solvant. Recueillerez les fractions d'éluat dans des tubes à essai par 25 millilitres par tube, et suivrez l'avancement par chromatographie sur couche mince, ou CCM. Combinerez toutes les fractions contenant le DOX-PA pur et éliminerez le solvant à l'aide d'un évaporateur rotatif jusqu'à l'obtention d'une poudre sèche.Sécher davantage le produit sous vide pendant une nuit. Pour préparer les micelles, dissoudre 40 milligrammes de DSPE-PEG et quatre milligrammes de DOX-PA avec deux millilitres de méthanol dans un flacon en verre de 10 millilitres. Éliminer le solvant organique sous vide à l’aide d’un évaporateur rotatif, jusqu’à formation d’un film mince dans le flacon.Ensuite, transférez deux millilitres de solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco, pH 7,4, dans un flacon en verre. Sélectionnez un bain ultrasonique capable de générer une puissance ultrasonique suffisante pour disperser le film mince de polymère médicamenteux. La puissance de sortie du bain ultrasonique utilisé dans ce protocole est de 110 watts.Placer le flacon dans un bain ultrasonique pendant trois minutes à température ambiante afin de générer des micelles. Conserver les micelles à quatre degrés Celsius pour une conservation à court terme, et à moins 20 degrés Celsius pour une conservation à long terme. Une fois les micelles préparées, effectuer diverses caractérisations afin de déterminer la concentration du médicament dans les micelles, la taille des particules et les activités anticancéreuses in vitro.Pour déterminer la concentration en DOX-PA et l'efficacité d'encapsulation du médicament, diluez 25 microlitres de micelles chargées en médicament avec 500 microlitres de DMSO. Mesurez l'absorption à 490 nanomètres à l'aide d'un spectromètre UV-VIS, puis calculez les concentrations en médicament et l'efficacité d'encapsulation comme décrit dans le protocole du texte. Pour évaluer l'activité anticancéreuse in vitro, ajoutez les suspensions cellulaires diluées dans une plaque de culture cellulaire de 96 puits à raison de 100 microlitres par puits.Incuber les cellules dans un incubateur de culture cellulaire pendant 18 heures afin de permettre l'attachement cellulaire. Ensuite, diluer une solution de DOX dans le DMSO et une solution de DOX-PA dans le DMSO avec le milieu de culture cellulaire pour obtenir des concentrations finales du médicament. Maintenir la concentration finale de DMSO dans tous les échantillons à 0,5 %. Puis, diluer les micelles de DOX-PA avec le milieu de culture cellulaire pour obtenir des concentrations finales du médicament.Utilisez le milieu de culture cellulaire sans ajout comme témoin. Retirez la plaque de culture cellulaire à 96 puits de l'incubateur et remplacez le milieu de culture par 100 microlitres de milieu contenant différents agents de traitement. Incubez les cellules dans l'incubateur de culture cellulaire pendant 72 heures supplémentaires.Ensuite, aspirez le milieu et ajoutez 100 microlitres de milieu contenant 0,5 milligramme par millilitre de MTT. Incubez les cellules dans l’incubateur de culture cellulaire pendant deux heures supplémentaires. Retirez soigneusement le milieu et ajoutez 100 microlitres de DMSO pour dissoudre les cristaux de formazan.Mesurez l'absorbance à l'aide du spectrophotomètre microplaque à une longueur d'onde de 570 nanomètres et une longueur d'onde de référence de 670 nanomètres. Enfin, calculez la viabilité cellulaire comme décrit dans le protocole écrit. Le schéma de synthèse du DOX-PA est indiqué ici.L'acide palmitique est conjugué à la doxorubicine par un lien hydrazone sensible au pH. La structure du DOX-PA a été confirmée par un spectre de RMN du proton. Des pics caractéristiques de la RMN provenant à la fois de la doxorubicine et de l'acide palmitique sont observés.Les lettres indiquent les pics et leur fragment correspondant dans la structure. Les micelles DSPE-PEG vierges, sans médicament, apparaissent sous forme de liquide transparent, tandis que les micelles DSPE-PEG chargées en DOX-PA apparaissent sous forme de liquide rouge, en raison de la présence de DOX-PA dans les micelles. La taille moyenne des particules pour les micelles DSPE-PEG vierges est d'environ 17,0 nanomètres.Le chargement de DOX-PA a légèrement augmenté la taille des particules micellaires, avec une taille moyenne de particule d'environ 25,7 nanomètres pour les micelles de DOX-PA DSPE-PEG. Une réduction dépendante de la concentration a été observée sur la viabilité cellulaire après traitement des cellules DU145 par de la doxorubicine libre, du DOX-PA libre ou des micelles de DOX-PA. Bien que la doxorubicine libre soit plus efficace que le DOX-PA libre ou les micelles de DOX-PA à de faibles concentrations, les groupes de DOX-PA ont montré une réduction plus importante de la viabilité cellulaire que la doxorubicine libre à des concentrations plus élevées.De plus, il ne semble pas y avoir de différence significative entre les micelles de DOX-PA et celles de DOX-PA aux concentrations plus élevées et plus faibles. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment préparer les formulations micellaires selon la méthode de dispersion de film. Il est important de se rappeler que la méthode décrite peut être utilisée pour préparer des micelles contenant différents médicaments et matériaux de transport.La conception du matériau vecteur est essentielle pour améliorer les performances de la formulation. Après cette procédure, la formulation micellaire peut être davantage évaluée in vivo à l'aide de modèles tumoraux animaux afin de tester son activité anticancéreuse.

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L’objectif de ce protocole est de décrire la préparation et la caractérisation de médicaments physiquement piégés et peu solubles dans l’eau dans des systèmes micellaires d’administration de médicaments composés de copolymères séquencés amphiphiles.

Préparation et caractérisation de la personne et de multi-drogue Loaded Physiquement piégé micelles polymériques

Nous rapportons une application intelligente des nanotubes de carbone pour la stabilisation cinétique des particules lipidiques qui contiennent des nanostructures auto-assemblées dans leurs noyaux. La préparation de particules lipidiques nécessite des concentrations plutôt faibles de nanotubes de carbone, ce qui permet leur utilisation dans des applications biomédicales telles que l’administration de médicaments.

Préparation Facile d&#39;intérieur auto-assemblées particules lipides stabilisés par des nanotubes de carbone

Les principales étapes de polymérisation anionique vivante de l' éther glycidylique de phényle (PheGE) sur méthoxy-polyéthylène glycol (mPEG b -PPheGE) sont décrits. Les micelles de copolymère séquence résultant (SMCA) ont été chargés de doxorubicine 14% (% en poids) et une libération prolongée du médicament pendant 4 jours dans des conditions physiologiquement pertinentes ont été obtenus.

Anionique Polymérisation d&#39;un copolymère amphiphile pour la préparation du copolymère bloc micelles Stabilisé par π-tc Interactions Stacking

Pour administrer des médicaments anticancéreux aux sites tumoraux avec une spécificité élevée et des effets secondaires réduits, de nouvelles méthodes basées sur les nanoparticules sont nécessaires. Ici, nous décrivons des micelles réticulées de disulfure qui peuvent être facilement préparées par oxydation médiée par le peroxyde d’hydrogène et sont capables de se dissocier efficacement dans un environnement tumoral réducteur pour libérer des charges utiles.

Une approche efficace et Facile pour la production de micelles réversible Disulfure réticulés

Un cristal liquide nanoparticule (LCNP) nanocarrier est exploitée en tant que véhicule pour la libération contrôlée d'une cargaison hydrophobe à la membrane plasmique de cellules vivantes.

Targeted Plasma Membrane Livraison d&#39;un Hydrophobe Cargo encapsulé dans un cristal liquide Nanoparticules Transporteur

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Extraction de l’échantillon et une quantification par chromatographie en phase simultanée de doxorubicine et mitomycine C après combinaison de médicaments en nanoparticules à des souris de tumeur-roulement

Cette étude décrit l'hydratation classique utilisant la méthode mince de film de lipide pour la préparation de nanoliposome suivie de la caractérisation de nanoparticules. Une protéine 47 kDa-hydrophile et globulaire, la tarine, est avec succès encapsulée comme stratégie pour améliorer la stabilité, éviter le dégagement rapide, et favoriser la libération contrôlée. La méthode peut être adaptée à l'encapsulation des molécules hydrophobes.

Préparation et caractérisation des nanoliposomes pour le piégeage des protéines globulaires hydrophiles bioactives

Le protocole présente les paramètres optimisés pour la préparation des liposomes thermosensibles à l’aide du dispositif microfluidique micromélangeur d’os de hareng décalé. Cela permet également la co-encapsulation de la doxorubicine et de l’indocyanine vert dans les liposomes et la libération photothermique déclenchée de doxorubicine pour la libération contrôlée / déclenchée de médicaments.

Production microfluidique de liposomes sensibles à la température contenant des lysolipides

Dans ce protocole, les nanoparticules d’or modifiées AS1411-g-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine sont synthétisées via des réactions d’amide en trois étapes. Ensuite, la doxorubicine est chargée et administrée pour cibler les cellules cancéreuses pour le traitement du cancer.

Synthèse de nanoparticules d’or modifiées Aptamer-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine pour l’administration ciblée de médicaments

Découvrez la préparation et la caractérisation de micelles contenant un prodrug lipophile de doxorubicine. Cette méthode améliore le chargement et la stabilité du médicament pour une ciblage tumoral optimisé.

Préparation et caractérisation des lipophile doxorubicine micelles Pro-drogue

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