Efficacité de protection et de la réponse immunitaire pulmonaire après l'administration sous-cutanée et intranasale BCG chez la souris

L’objectif général de cette procédure est d’étudier les réponses immunitaires dans les poumons après l’immunisation contre la tuberculose, y compris l’efficacité protectrice du vaccin contre une provocation intranasale et la réponse immunitaire pulmonaire locale induite par le vaccin. Cette méthodologie peut aider à répondre à nos questions clés sur le vaccin contre la tuberculose, y compris l’identification des réponses immunitaires pulmonaires défensives obtenues par les vaccins pulmonaires pour une protection immunitaire pulmonaire optimale. L’un des avantages de cette méthodologie est que la réponse immunitaire pulmonaire de son animal est évaluée individuellement en parallèle avec l’efficacité protectrice.

permettant d’identifier les paramètres immunitaires spécifiques qui sont en corrélation avec la protection. Pour l’administration sous-cutanée du vaccin BCG, remplissez d’abord une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 26 avec un millilitre de suspension du vaccin BCG, puis retirez les bulles d’air. Placez ensuite une souris anesthésiée en position couchée à l’intérieur d’une hotte à flux laminaire et inoculez par voie sous-cutanée à l’animal 100 microlitres de bactéries dans un flanc arrière.

Pour l’administration intranasale, chargez une micro-pipette avec 20 microlitres de suspension BCG et placez la souris anesthésiée en position couchée à l’intérieur de la capuche. Administrez l’inoculum goutte à goutte entre les deux narines jusqu’à ce que tout le volume de 20 microlitres ait été déposé, en laissant du temps entre les gouttes pour permettre à la souris d’inhaler la suspension. Ensuite, rechargez la micro-pipette avec 20 microlitres supplémentaires de bactéries et répétez l’administration.

Pour la provocation intranasale avec la souche H37Rv microbacterium tuberculosis, au moment expérimental approprié après la vaccination, inoculer aux animaux l’administration intranasale de 40 microlitres de la suspension bactérienne H37Rv, comme cela vient d’être démontré. Pour obtenir le lavage broncho-alvéolaire ou l’échantillon de balle, utilisez d’abord des pinces et des ciseaux stériles pour exposer la trachée. Faites ensuite une petite incision dans la trachée, en prenant soin de ne pas exciser complètement le tissu, et insérez une canule reliée à une seringue stérile de 1 ml, contenant 800 microlitres de PBS glacé.

Lorsque la canule est en place, remplissez soigneusement les poumons avec le PBS, puis tirez lentement sur le piston pour récupérer au moins 500 à 600 microlitres de liquide de lavage. Versez la balle dans un tube de 1,5 ml sur de la glace et confirmez que la suspension est incolore, ce qui indique l’absence de contamination sanguine. Conservez les échantillons sur de la glace jusqu’au traitement de la balle.

Pour déterminer la charge bactérienne et la réponse immunitaire dans les poumons, fixez la souris avec des aiguilles en position couchée sur une surface plane et désinfectée à l’intérieur de la hotte à flux laminaire, et faites une incision dans la peau supérieure au-dessus de la poitrine. Ensuite, décollez la peau pour exposer la région thoracique et ouvrez les poumons. Utilisez des ciseaux et des pinces stériles pour prélever les poumons et le cœur, et placez les organes sur une surface propre.

Ensuite, retirez le cœur, la trachée et le tissu conjonctif. Placez chaque poumon dans un tube différent de 1,5 mL avec 1 mL d’eau désionisée sur de la glace pour déterminer en aval la charge bactérienne et les réponses immunitaires cellulaires. Par rapport à la voie sous-cutanée, la voie intranasale de vaccination confère une efficacité protectrice beaucoup plus grande dans les poumons.

L’analyse d’un nombre représentatif de colonies du groupe vacciné BCG intranasal par PCR spécifique pour la région du génome RD9 démontre que toutes les colonies fournissent un fragment de paires de bases kilo-kilo correspondant à H37Rv. Le BCG intranasal déclenche une IL17 plus élevée et interfère avec la production de gamma dans les poumons, révélant une corrélation entre l’efficacité protectrice conférée par la vaccination intranasale par BCG et la réponse immunitaire induite par le vaccin dans les poumons avant la provocation avec une concentration plus élevée de la concentration totale et de la concentration d’IgA spécifiques du dérivé de la protéine purifiée H37Rv dans les échantillons de lavage observés chez les receveurs du vaccin intranasal. Une analyse plus poussée des cellules productrices de cytokines dans les poumons à la suite de la provocation tuberculeuse a révélé que si les cellules productrices d’interférences gamma ont été détectées dans tous les groupes infectés, les cellules CD4+ productrices d’IL17A n’ont été trouvées que dans le groupe BCG intranasal, démontrant une corrélation significative entre la présence d’IL17 et la réduction de la charge bactérienne pulmonaire.

À la suite de cette procédure, il est possible de comparer les réponses immunitaires pulmonaires locales lors de l’utilisation de vaccins antituberculeux biodiversifiés, ainsi que différentes voies d’administration et points temporels après la provocation. De plus, cette méthodologie peut être utilisée pour évaluer l’immunité dans le utilisé par la vaccination après provocation. Ce qui pourrait permettre d’identifier les réponses immunitaires en corrélation avec la protection.

Il est important de noter que le travail avec Mycobacterium Tuberculosis nécessite des installations de laboratoire exemptes de BCL, et les précautions appropriées doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.