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DOI: 10.3791/54522-v
Kristin Bösch*1,2, Lamprinos Frantzeskakis*1, Miroslav Vraneš3, Jörg Kämper3, Kerstin Schipper1,2, Vera Göhre1,2,4
1Institute for Microbiology,Heinrich-Heine University Düsseldorf, 2Bioeconomy Science Center (BioSC), 3Department of Genetics, Institute of Applied Biosciences,Karlsruhe Institute of Technology, 4Cluster of Excellence in Plant Sciences (CEPLAS),Heinrich-Heine University Düsseldorf
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol describes a gene replacement strategy for genetically manipulating the smut fungus Ustilago maydis. It allows for the generation of deletion mutants to study infection phenotypes and can be adapted for various genetic modifications.
Nous décrivons une stratégie de remplacement de gène robuste pour manipuler génétiquement le champignon Ustilago maydis. Ce protocole explique comment générer des mutants de deletion pour enquêter sur les phénotypes d'infection. Elle peut être étendue à modifier les gènes de manière quelconque, par exemple en ajoutant une séquence codant pour une étiquette de protéine fluorescente.
L’objectif global de ce protocole est de modifier génétiquement le champignon du charbon, ustilago maydis. Cette méthode de génération de souches permet la caractérisation fonctionnelle des gènes de diverses manières. Par exemple, nous pouvons supprimer les gènes, nous pouvons échanger le promotus ou nous pouvons générer des constructions de fusion.
Le principal avantage de cette méthode est que nous pouvons vérifier précisément la modification, de sorte que tout phénotype peut être directement lié au changement du gène d’intérêt. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car il est essentiel de savoir quand arrêter la réaction de protoplasturation pour une transformation réussie. En préparation, refroidissez deux tubes à fond rond d’un millilitre à moins 20 degrés Celsius.
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