Name: Infection expérimentale avec Listeria monocytogenes En tant que modèle pour létude de lhôte Réponses Interféron-y (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Apprenez à infecter des souris C57BL/6J avec Listeria monocytogenes pour étudier les réponses interféron-γ des cellules NK, NKT et lymphocytes T. Ce protocole simple mesure la charge bactérienne et la survie.

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L’élaboration de ce protocole a été soutenue par une subvention de fonctionnement des IRSC (MOP97807) pour le SED.

<ol><li>Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune responses to Listeria monocytogenes.</a> Nat Rev Immunol. 4 (10), 812-823 (2004).</li>
<li>Ranson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+V+alpha+14%2B+NKT+cells+participate+in+the+early+response+to+enteric+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Invariant V alpha 14+ NKT cells participate in the early response to enteric Listeria monocytogenes infection.</a> J Immunol. 175 (2), 1137-1144 (2005).</li>
<li>Bancroft, G. J., Schreiber, R. D., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+immunity%3A+a+T-cell-independent+pathway+of+macrophage+activation%2C+defined+in+the+scid+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Natural immunity: a T-cell-independent pathway of macrophage activation, defined in the scid mouse.</a> Immunol Rev. 124, 5-24 (1991).</li>
<li>Soudja, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory-T-cell-derived+interferon-gamma+instructs+potent+innate+cell+activation+for+protective+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Memory-T-cell-derived interferon-gamma instructs potent innate cell activation for protective immunity.</a> Immunity. 40 (6), 974-988 (2014).</li>
<li>Schoenborn, J. R., Wilson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+interferon-gamma+during+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.</a> Adv Immunol. 96, 41-101 (2007).</li>
<li>Filipe-Santos, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inborn+errors+of+IL-12%2F23-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%3A+molecular%2C+cellular%2C+and+clinical+features%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inborn errors of IL-12/23- and IFN-gamma-mediated immunity: molecular, cellular, and clinical features.</a> Semin Immunol. 18 (6), 347-361 (2006).</li>
<li>Flynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+essential+role+for+interferon+gamma+in+resistance+to+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">An essential role for interferon gamma in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection.</a> J Exp Med. 178 (6), 2249-2254 (1993).</li>
<li>Cooper, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disseminated+tuberculosis+in+interferon+gamma+gene-disrupted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Disseminated tuberculosis in interferon gamma gene-disrupted mice.</a> J Exp Med. 178 (6), 2243-2247 (1993).</li>
<li>Dalton, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+of+immune+cell+function+in+mice+with+disrupted+interferon-gamma+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes.</a> Science. 259 (5102), 1739-1742 (1993).</li>
<li>Harty, J. T., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+immunity+to+Listeria+monocytogenes+in+the+absence+of+IFN+gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific immunity to Listeria monocytogenes in the absence of IFN gamma.</a> Immunity. 3 (1), 109-117 (1995).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+mice+that+lack+the+interferon-gamma+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Immune response in mice that lack the interferon-gamma receptor.</a> Science. 259 (5102), 1742-1745 (1993).</li>
<li>Wang, Z. E., Reiner, S. L., Zheng, S., Dalton, D. K., Locksley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+effector+cells+default+to+the+Th2+pathway+in+interferon+gamma-deficient+mice+infected+with+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD4+ effector cells default to the Th2 pathway in interferon gamma-deficient mice infected with Leishmania major.</a> J Exp Med. 179 (4), 1367-1371 (1994).</li>
<li>Hess, J., Ladel, C., Miko, D., Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhimurium+aroA-+infection+in+gene-targeted+immunodeficient+mice%3A+major+role+of+CD4%2B+TCR-alpha+beta+cells+and+IFN-gamma+in+bacterial+clearance+independent+of+intracellular+location%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhimurium aroA- infection in gene-targeted immunodeficient mice: major role of CD4+ TCR-alpha beta cells and IFN-gamma in bacterial clearance independent of intracellular location.</a> J Immunol. 156 (9), 3321-3326 (1996).</li>
<li>Ikeda, H., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+IFN+gamma+in+protection+against+tumor+development+and+cancer+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">The roles of IFN gamma in protection against tumor development and cancer immunoediting.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 13 (2), 95-109 (2002).</li>
<li>Hodge, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+AU-rich+element+removal+promotes+chronic+IFN-gamma+expression+and+autoimmunity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma AU-rich element removal promotes chronic IFN-gamma expression and autoimmunity in mice.</a> J Autoimmun. 53, 33-45 (2014).</li>
<li>Seery, J. P., Carroll, J. M., Cattell, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinuclear+autoantibodies+and+lupus+nephritis+in+transgenic+mice+expressing+interferon+gamma+in+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Antinuclear autoantibodies and lupus nephritis in transgenic mice expressing interferon gamma in the epidermis.</a> J Exp Med. 186 (9), 1451-1459 (1997).</li>
<li>Peng, S. L., Moslehi, J., Craft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+interferon-gamma+and+interleukin-4+in+murine+lupus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Roles of interferon-gamma and interleukin-4 in murine lupus.</a> J Clin Invest. 99 (8), 1936-1946 (1997).</li>
<li>Savinov, A. Y., Wong, F. S., Chervonsky, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+affects+homing+of+diabetogenic+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma affects homing of diabetogenic T cells.</a> J Immunol. 167 (11), 6637-6643 (2001).</li>
<li>Miller, C. H., Maher, S. G., Young, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Use+of+Interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical Use of Interferon-gamma.</a> Ann N Y Acad Sci. 1182, 69-79 (2009).</li>
<li>Paget, C., Chow, M. T., Duret, H., Mattarollo, S. R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gammadelta+T+cells+in+alpha-galactosylceramide-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of gammadelta T cells in alpha-galactosylceramide-mediated immunity.</a> J Immunol. 188 (8), 3928-3939 (2012).</li>
<li>Leonard, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+single-dose+interleukin-12+exposure+on+interleukin-12-associated+toxicity+and+interferon-gamma+production%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Effects of single-dose interleukin-12 exposure on interleukin-12-associated toxicity and interferon-gamma production.</a> Blood. 90 (7), 2541-2548 (1997).</li>
<li>Zenewicz, L. A., Shen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%3A+a+short+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune responses to Listeria monocytogenes: a short overview.</a> Microbes Infect. 9 (10), 1208-1215 (2007).</li>
<li>Viegas, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+production+by+CD27%28%2B%29+NK+cells+exacerbates+Listeria+monocytogenes+infection+in+mice+by+inhibiting+granulocyte+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma production by CD27(+) NK cells exacerbates Listeria monocytogenes infection in mice by inhibiting granulocyte mobilization.</a> Eur J Immunol. 43 (10), 2626-2637 (2013).</li>
<li>Selvanantham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+and+Nod2+enhance+TLR-mediated+invariant+NKT+cell+activation+during+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nod1 and Nod2 enhance TLR-mediated invariant NKT cell activation during bacterial infection.</a> J Immunol. 191 (11), 5646-5654 (2013).</li>
<li>Becavin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+widely+used+Listeria+monocytogenes+strains+EGD%2C+10403S%2C+and+EGD-e+highlights+genomic+variations+underlying+differences+in+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity.</a> MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).</li>
<li>Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unit+9B.2+Listeria+monocytogenes%3A+cultivation+and+laboratory+maintenance%2C+Chapter+31B%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unit 9B.2 Listeria monocytogenes: cultivation and laboratory maintenance, Chapter 31B.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2013).</li>
<li>Conour, L. A., Murray, K. A., Brown, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+animals+for+research--issues+to+consider+for+rodents+and+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Preparation of animals for research--issues to consider for rodents and rabbits.</a> ILAR J. 47 (4), 283-293 (2006).</li>
<li>Obernier, J. A., Baldwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+an+appropriate+period+of+acclimatization+following+transportation+of+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals.</a> ILAR J. 47 (4), 364-369 (2006).</li>
<li>BD LSR II User's Guide. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf">http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf</a> (2007).</li>
<li>Flowjo Tutorial. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://www.flowjo.com/tutorials">http://www.flowjo.com/tutorials</a> (2016).</li>
<li>Zhang, M. A., Ahn, J. J., Zhao, F. L., Selvanantham, T., Mallevaey, T., Stock, N., Correa, L., Clark, R., Spaner, D., Dunn, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonizing+peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+%28PPARalpha%29+activity+enhances+Th1+immunity+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antagonizing peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) activity enhances Th1 immunity in male mice.</a> J. Immunol. , (2015).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric+estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Amer+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Nonparametric estimation from incomplete observations.</a> J Amer Stat Assoc. 53, 457-481 (1958).</li>
<li>Brown, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+CD28-mediated+signals+in+T+helper+subset+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Limited role of CD28-mediated signals in T helper subset differentiation.</a> J Exp Med. 184 (3), 803-810 (1996).</li>
<li>Czuprynski, C. J., Brown, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+difference+in+anti-Listeria+resistance+of+C57BL%2F6+and+A%2FJ+mice+is+not+eliminated+by+active+immunization+or+by+transfer+of+Listeria-immune+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The relative difference in anti-Listeria resistance of C57BL/6 and A/J mice is not eliminated by active immunization or by transfer of Listeria-immune T cells.</a> Immunology. 58 (3), 437-443 (1986).</li>
<li>Busch, D. H., Vijh, S., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+infection+with+Listeria+monocytogenes%2C++Chapter+19%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Animal model for infection with Listeria monocytogenes, Chapter 19.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li>
<li>Mekada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+differences+among+C57BL%2F6+substrains%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58 (2), 141-149 (2009).</li>
<li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+microbiota+direct+the+differentiation+of+IL-17-producing+T-helper+cells+in+the+mucosa+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Specific microbiota direct the differentiation of IL-17-producing T-helper cells in the mucosa of the small intestine.</a> Cell Host Microbe. 4 (4), 337-349 (2008).</li>
<li>Bou Ghanem, N. E., Myers-Morales, T., Jones, G. S., D'Orazio, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+mice+via+ingestion+of+contaminated+food%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Oral transmission of Listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food.</a> J Vis Exp. (75), e50381(2013).</li>
<li>Lecuit, M., Dramsi, S., Gottardi, C., Fedor-Chaiken, M., Gumbiner, B., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+in+E-cadherin+responsible+for+host+specificity+towards+the+human+pathogen+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes.</a> Embo J. 18 (14), 3956-3963 (1999).</li>
<li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129 (5), 891-902 (2007).</li>
<li>Brunt, L. M., Portnoy, D. A., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presentation+of+Listeria+monocytogenes+to+CD8%2B+T+cells+requires+secretion+of+hemolysin+and+intracellular+bacterial+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Presentation of Listeria monocytogenes to CD8+ T cells requires secretion of hemolysin and intracellular bacterial growth.</a> J Immunol. 145 (11), 3540-3546 (1990).</li>
<li>Muraille, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+in+vivo+dendritic+cell+activation+by+live+versus+killed+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distinct in vivo dendritic cell activation by live versus killed Listeria monocytogenes.</a> Eur J Immunol. 35 (5), 1463-1471 (2005).</li>
<li>Datta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+with+irradiated+Listeria+induces+protective+T+cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Vaccination with irradiated Listeria induces protective T cell immunity.</a> Immunity. 25 (1), 143-152 (2006).</li>
<li>Geginat, G., Schenk, S., Skoberne, M., Goebel, W., Hof, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+of+direct+ex+vivo+epitope+mapping+identifies+dominant+and+subdominant+CD4+and+CD8+T+cell+epitopes+from+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel approach of direct ex vivo epitope mapping identifies dominant and subdominant CD4 and CD8 T cell epitopes from Listeria monocytogenes.</a> J Immunol. 166 (3), 1877-1884 (2001).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Listeria+monocytogenes+as+a+live+vaccine+vehicle+for+the+induction+of+protective+anti-viral+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recombinant Listeria monocytogenes as a live vaccine vehicle for the induction of protective anti-viral cell-mediated immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (9), 3987-3991 (1995).</li>
<li>Foulds, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+CD4+and+CD8+T+cells+are+intrinsically+different+in+their+proliferative+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: CD4 and CD8 T cells are intrinsically different in their proliferative responses.</a> J Immunol. 168 (4), 1528-1532 (2002).</li>
</ol>

Aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Nous décrivons ici un protocole sur la façon de procéder à une infection expérimentale de base avec la souche EGD de L. monocytogenes 25 C57BL / 6J mâles ou femelles. Ce protocole a été mis en place dans le but d&#39;étudier l&#39;effet d&#39;une nouvelle petite molécule IS001 sur la production d&#39; IFN-γ par les lymphocytes innées et adaptatives in vivo 31. En surveillant la clairance bactérienne et la survie post-infection, des idées ont été acquises sur la façon dont ces chan...

IFN-γ est une cytokine qui est essentielle pour la médiation de l&#39; immunité contre les agents pathogènes intracellulaires et pour contrôler la croissance des tumeurs 5. L&#39;importance de cette cytokine dans la résistance bactérienne est évidente dans l&#39;observation que les humains avec des mutations dans la voie de signalisation de l&#39; IFN-γ sont très sensibles à l&#39; infection par des mycobactéries et salmonella 6. De même, des souris déficientes en soit l&#39; IFN-γ ou les défauts d&#39;exposition du récepteur de l&#39; IFN-γ dans la résistance aux mycobactéries 7-9 et d&#39; autres agents pathogènes intracellulaires , y compris L. monocytogenes 10,11, 12 Leishmania major, Salmonella typhimurium 13 et 11 certains virus. En plus des agents pathogènes la lutte contre, l&#39; IFN-γ joue un rôle crucial dans l&#39; hôte de défense contre les tumeurs 14. Bien que la production accrue d&#39;IFN-γ est bénéfique dans le contexte d&#39;une infection ou d&#39;un cancer, la production prolongée de cette cytokine a été liée tle diabète o le développement de l&#39; auto - immunité systémique 15-17 et l&#39;accélération de type I dans le modèle de souris diabétique non obèse 18. Les principales sources d&#39;IFN-γ comprennent les cellules NK, les cellules NKT, les lymphocytes T yô, helper 1 (Th1) des cellules T et des lymphocytes T cytotoxiques (CTL) 5,19,20. IFN-γ améliore l&#39;immunité innée et adaptative par: (1) vers le haut de régulation complexe majeur d&#39;histocompatibilité (CMH) de classe I et à l&#39;expression II, (2) l&#39;augmentation de l&#39;expression des molécules co-stimulatrices sur les cellules présentatrices d&#39;antigène, (3) macrophage améliorant phagocytose et la production de cytokines pro-inflammatoires et microbicides facteurs (par exemple, l&#39; oxyde nitrique et les espèces réactives de l&#39; oxygène), (4) la promotion de la différenciation des cellules T CD4 + naïves en cellules effectrices Th1, (5) la promotion de la commutation de classe d&#39;anticorps à l&#39; immunoglobuline ( Ig) 2a et IgG3 (chez la souris), (6) l&#39;induction de la production de chimiokines pour recruter des cellules immunitaires aux sites d&#39;infection, et (7) le renforcement de cellules NK et réponses CTL 5,19. Compte tenu de l&#39;importance capitale de l&#39; IFN-γ dans la réponse de l&#39; hôte aux agents pathogènes et les tumeurs, l&#39; IFN-γ recombinant a été testé en tant que traitement de diverses infections et de tumeurs malignes (passé en revue dans 19). Cependant, parce que l&#39; administration systémique de l&#39; IFN-γ ou la cytokine promotion Th1 interleukine-12 (IL-12) est associé à des effets secondaires et liée à la dose de toxicité 19,21, il y a intérêt à développer des stratégies alternatives pour augmenter la production d&#39;IFN-γ par les cellules immunitaires. Développement de nouveaux produits biologiques et de petites molécules nécessite des outils de dépistage in vivo pour tester si ces agents augmentent la production d&#39; IFN-γ au cours d&#39; une réponse immunitaire et si cela se traduit par des effets biologiques significatifs tels que l&#39; augmentation de la survie des animaux. L&#39; infection expérimentale de souris avec la bactérie L. monocytogenes gram-positives a été un modèle instrumental pourdéchiffrer le rôle de l&#39; IFN-γ dans l&#39; hôte une immunité contre les agents pathogènes intracellulaires 1,22. L&#39;infection des souris avec l&#39;agent pathogène par voie intraveineuse ou intrapéritonéale (ip) conduit à la diffusion rapide des bactéries à la rate et le foie, où ils deviennent internalisés par les macrophages résidents et les hépatocytes avec des charges bactériennes de pointe dans la rate qui se produisent entre 3 et 4 jours post infection 1,3,22. La production d&#39;IFN-γ par les cellules NK est importante pour l&#39; activation des macrophages et une résistance précoce contre le pathogène 3; mais à des doses infectieuses élevées, la production d&#39;IFN-γ peut également être préjudiciable à la clairance de l&#39; agent pathogène 23. Les cellules NKT sont également une source d&#39;IFN-γ dans la rate et le foie pendant le contrôle précoce des agents pathogènes 2,24 et cette production a été montré pour amplifier la production d&#39; IFN-γ par d&#39; autres types cellulaires , notamment les cellules NK 2. D&#39;autre part, plus tard, agissant lymphocytes T adaptatifs, des cellules T CD8 + en particulier, sont importants pour la médiation de la clairance de l&#39;agent pathogène et de fournir une protection contre la réinfection 1,4,22. Ce modèle d&#39;infection a été attrayante pour les chercheurs pour un certain nombre de raisons (examiné en 1). Tout d&#39;abord, l&#39;infection par l&#39;agent pathogène est hautement reproductible et induit une forte réponse immunitaire Th1 et cellulaire. Deuxièmement, lors de l&#39;infection sublétale, la charge bactérienne est concentrée dans le foie et la rate où il peut être facilement mesurée. Troisièmement, l&#39;agent pathogène peut être manipulé en toute sécurité sous le niveau de biosécurité 2 (NSB2) conditions. En quatrième lieu, l&#39;organisme et la réponse immunitaire qu&#39;il engendre ont été largement caractérisées. Enfin, une variété de souches mutantes ou génétiquement modifiés ont été développés qui sont disponibles pour l&#39;utilisation. Décrit ici est un protocole de base pour l&#39; inoculation de souris C57BL / 6J avec la souche EGD de L. monocytogenes 25 et pour mesurer l&#39; IFN - γ reponses par NK, NKT et les lymphocytes adaptatifs post-infection. On décrit également la façon de mesurer la charge bactérienne dans la rate et le foie après l&#39; infection sublétale et de réaliser des études de survie après l&#39; infection avec une DL 50 dose modifiée de l&#39;agent pathogène. Enfin, les données représentatives sont présentées de la manière dont ce protocole peut être utilisé pour cribler les effets de nouveaux traitements sur les réponses IFN-y et la survie de la souris de l&#39; infection par L. monocytogenes.

<table><tbody><tr><td>Bouillon de perfusion Cerveau-Cœur, Modifié</td><td>BD</td><td>299070</td><td>toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td>toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>Chlorure</td></tr><tr><td>d’ammonium (NH3Cl)</td><td></td><td></td><td>toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>KHCO3</td><td></td><td></td><td>toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Na2EDTA</td><td></td><td></td>, <td>toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>22400089</td><td>toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Sérum de Bovin Fœtal&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>12483</td><td>Avant utilisation, inactivation thermique à 56 &deg ; C pour 30 min</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030</td><td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Acides aminés non essentiels</td><td>Gibco</td><td>11140</td><td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Inhibiteur de transport des protéines GolgiStop (contenant du monensin)</td><td>BD</td><td>554724</td><td>Utilisation 4 &mu ; l dans 6 ml culture cellulaire</td></tr><tr><td>16 % Paraformaldehye</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>15710</td><td>Diluer à 4 % PFA dans ddH2O ou 1x PBS</td></tr><tr><td>10x Tampon Perm/Wash</td><td>BD</td><td>554723</td><td>Diluer 1x dans ddH2O</td></tr><tr><td>Fc block, Anti-souris CD16/CD32 Purified</td><td>eBioscience</td><td>14-0161</td><td>Dilué 1:50</td></tr><tr><td>Viabilité fixable Dye eFluor 506</td><td>eBioscience</td><td>65-0866</td><td>Diluer 1:1 000 (nous avons également utilisé des colorants de viabilité provenant de sondes moléculaires)</td></tr><tr><td>anti-souris CD4-PE-Cy5 (GK1.5)</td><td>eBioscience</td><td>15-0041</td><td>Le fabricant recommande une certaine taille de test ; cependant, celle-ci doit être titrée avant utilisation.</td></tr><tr><td>anti-souris CD8-FITC (53-6.7)</td><td>eBioscience</td><td>11-0081</td><td>Le fabricant recommande une certaine taille de test, mais celle-ci doit être titrée avant utilisation.</td></tr><tr><td>PBS57/mCD1d tetramer-APC</td><td>NIH Tetramer Core Facility</td><td>N/A</td><td>Obtenu en cadeau de l’installation</td></tr><tr><td>anti-Mouse TCR&beta ;-PE-Cy7 (H56-597)</td><td>eBioscience</td><td>25-5961</td><td>Le fabricant recommande une certaine taille de test, mais celle-ci doit être titrée avant utilisation.</td></tr><tr><td>anti-souris NKp46-APC-eFluor780 (29A1.4)</td><td>eBioscience</td><td>47-3351</td><td>Le fabricant recommande une certaine taille de test, mais celle-ci doit être titrée avant utilisation.</td></tr><tr><td>anti-souris CD45 PE-Cyanine7 (30-F11)</td><td>eBioscience</td><td>25-0451</td><td>Le fabricant recommande une certaine taille de test, mais celle-ci doit être titrée avant utilisation.</td></tr><tr><td>anti-Mouse IFN gamma-PE (XMG1.2)</td><td>eBioscience</td><td>12-7311</td><td>Le fabricant recommande une certaine taille de test, mais celle-ci doit être titrée avant utilisation.</td></tr><tr><td>OneComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-1111</td><td>Utiliser une goutte par coloration</td></tr><tr><td>Souris IFN gamma ELISA kit</td><td>eBioscience</td><td>88-7314</td><td>Utilisé pour mesurer l’interféron gamma dans le surnageant de culture</td></tr><tr><td>Tubes ventilés de 50 ml pour la culture</td><td></td><td></td><td>Utilisé pour la culture des bactéries, toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Tubes</td><td></td><td></td> de microcentrifugation de 1,5 ml <td>toute marque doit être appropriée</td></tr><tr>boîtes <td></td><td></td><td>de Pétri bactériennes</td><td>Toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>2 ml Cyrovials</td><td></td><td></td><td>Toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>Spectromètre</td><td></td><td></td> UV <td>Toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>Aiguilles</td><td></td><td></td> de sécurité <td>Toute marque devrait être appropriée</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson laboratories</td><td>Stock # 000664</td><td>Commandez pour arrivée à 7 semaines</td></tr><tr><td>Eau de Javel</td><td></td><td></td><td>Pour la décontamination</td></tr><tr><td>70 % Éthanol</td><td></td><td></td><td>Pour la décontamination</td></tr><tr><td>Perles</td><td></td><td></td> de verre <td>toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Rotor de centrifugeuse</td><td></td><td></td><td>, seaux, couvercles de seau.</td></tr><tr><td>Microcentrifugeuse</td><td></td><td></td><td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Glycérol</td><td></td><td></td> stérile <td>N’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Pointes de</td><td></td><td></td> pipette <td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Pipette</td><td></td><td></td><td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Instruments</td><td></td><td></td> chirurgicaux <td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>70 microns crépines n’importe</td><td></td><td></td><td>quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Seringue de 3 ml n’importe</td><td></td><td></td><td>quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Pistolet</td><td></td><td></td> pipette <td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Unités</td><td></td><td></td> de filtration <td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td></td><td></td><td>Diluer 1 à 9 dans ddH2O, toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Hémocytomètre</td><td></td><td></td><td>n’importe quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr>Plaques <td></td><td></td><td>à fond rond n’importe</td><td>quelle marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Tubes FACs</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>BD LSR II</td><td>BD</td><td></td><td>Tout cytomètre en flux pouvant être utilisé pour l’acquisition s’il dispose d’une configuration laser appropriée et d’un ensemble de filtres pour discriminer les fluorochormes</td></tr><tr><td>Flowjo logiciel</td><td>Treestar</td><td></td><td>Utilisé pour l’analyse des données. D’autres types de logiciels d’analyse de données seront également appropriés</td></tr><tr><td>: pipette multicanaux (0 - 300 & micro ; l)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Utilisé pour laver les cellules et ajouter des anticorps lors de la coloration par cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Acide</td><td></td><td></td> acétique <td>Utilisé pour laver les billes de verre, toute marque doit être appropriée</td></tr><tr><td>Microbanque Système de préservation bactérienne</td><td>Pro-lab Diagnostics</td><td></td><td>Utilisé comme alternative aux stocks de glycérol pour le stockage à long terme des bactéries</td></tr></tbody></table>

infection expérimentale avec<em&gt; listeria monocytogenes</em&gt; en tant que modèle pour l&#39;étude de l&#39;hôte réponses interféron-y

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. monocytogenes est une bactérie Gram-positif qui est une cause de maladies d&#39; origine alimentaire chez les humains. L&#39;infection expérimentale de souris avec cet agent pathogène a été très informatif sur le rôle des cellules du système immunitaire innée et adaptative et des cytokines spécifiques de l&#39;immunité de l&#39;hôte contre les pathogènes intracellulaires. La production d&#39;IFN-γ par des cellules innées lors de l&#39; infection par L. monocytogenes sublétale est importante pour l&#39; activation des macrophages et le contrôle précoce de l&#39;agent pathogène 1-3. En outre, la production d&#39; IFN-γ par les lymphocytes mémoire adaptative est importante pour amorcer l&#39;activation des cellules innée à 4 réinfection. Le L. monocytogenes modèle d&#39;infection sert ainsi un excellent outil pour examiner si de nouvelles thérapies qui sont conçus pour augmenter la production d&#39; IFN-γ ont un impact sur les réponses de l&#39; IFN-γ in vivo et ont des effets biologiques productifs tels que l&#39; augmentation de la clairance bactérienne ou l&#39; amélioration de la survie de la souris deinfection. Décrite ici est un protocole de base pour la façon de mener les infections intra - péritonéales de souris C57BL / 6J avec la souche EGD de L. monocytogenes et de mesurer la production d&#39; IFN-γ par les cellules NK, les cellules NKT et les lymphocytes adaptatifs par cytométrie en flux. En outre, les procédures sont décrites: (1) croître et de préparer les bactéries pour l&#39;inoculation (2), mesurer la charge bactérienne dans la rate et le foie, et (3) mesure la survie des animaux de points d&#39;extrémité. Des données représentatives sont également fournis pour illustrer la façon dont ce modèle d&#39;infection peut être utilisée pour tester l&#39;effet d&#39;agents spécifiques sur les réponses d&#39; IFN-y pour L. monocytogenes et la survie des souris de cette infection.

La figure 3 présente un certain écoulement typique cytométrie coloration de l&#39; IFN-γ dans les cellules NK et NKT spléniques à 24 h post-infection avec 10 5 CFU de l&#39;agent pathogène. Cette figure illustre également la stratégie de déclenchement pour le panneau de coloration décrit dans le tableau 2. La figure 4 montre une partie des données représentatives qui ont été obtenus dans une expérience où les souris mâles ont ...

Ce protocole décrit comment inoculer des souris C57BL / 6J avec la souche EGD de Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) et de mesurer l&#39; interféron-γ (IFN-γ) Réponses par tueuses naturelles (NK), T (NKT) des cellules tueuses naturelles, et adaptative des lymphocytes T post-infection. Ce protocole décrit également la façon de mener des études de survie chez les souris après l&#39; infection avec une DL 50 dose modifiée de l&#39;agent pathogène.

Infection expérimentale avec<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; En tant que modèle pour l&#39;étude de l&#39;hôte Réponses Interféron-y

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

Les objectifs généraux de ce protocole sont de cultiver et d'infecter des souris C57 BlackSix avec la souche EGG de Listeria monocytogenes, puis de mesurer la charge bactérienne, les réponses en interféron gamma, ainsi que la survie et la réponse à l'infection induite par cet agent pathogène. Ce protocole peut aider les chercheurs à dépister des agents ou des gènes ayant un impact sur les réponses en interféron gamma et sur la survie des animaux après une infection bactérienne. Le principal avantage de cette technique réside dans sa relative simplicité de mise en œuvre en laboratoire.Même pour ceux qui ont peu d'expérience dans la culture de bactéries. La procédure sera également démontrée par Jennifer Ahn, étudiante diplômée de mon laboratoire. Commencez par plonger la pointe stérile d'une pipette dans un stock de glycérol décongelé à température ambiante de la souche L. monocytogenes EGG.Et étalez immédiatement la pointe en allant et venant sur une section d'une boîte contenant du bouillon infusion cerveau-cœur ou milieu BHI. Il s'agit de l'étalage primaire. Tournez la boîte de 90 degrés et tirez une nouvelle pointe de pipette à travers le premier étalage, en répartissant la souche sur le quart suivant de la boîte.Ceci est la stries secondaire. Ensuite, tournez et étalez la stries secondaire dans un troisième quart de la boîte pour former la stries tertiaire. Maintenant, retournez la boîte à l’envers à 37 degrés Celsius pour une incubation nocturne.Des colonies uniques et uniformes doivent être visibles dans la dernière série de stries entre 16 et 24 heures. Lorsque les colonies apparaissent, distribuez 10 millilitres de bouillon BHI stérile dans un tube stérile de 50 millilitres à ventilation et utilisez une pointe de pipette stérile pour transférer une colonie de L. monocytogenes depuis la boîte dans le bouillon. Incubez le bouillon inoculé toute la nuit dans un incubateur agité orbital à 37 degrés celsius et 225 tours par minute, jusqu’à ce que l’OD600 atteigne un. Pour la préparation de l'inoculum expérimental de L. monocytogenes, dans une cabine de sécurité biologique, inoculer un tube de milieu BHI avec 100 microlitres de la culture de nuit. Après une autre incubation à 37 degrés Celsius, sous agitation jusqu'à l'obtention de la DO600 souhaitée, transférer le contenu de la culture dans un tube de centrifugation stérile pour centrifugation. Utiliser une aspiration reliée à un flacon-trappe contenant de l'eau de Javel pour éliminer le surnageant.Lavez le culot deux fois avec du PBS en utilisant les mêmes conditions de centrifugation. Après le deuxième lavage, resuspendez les bactéries dans du PBS et diluez à la concentration appropriée. Pour administrer l'UFC d'intérêt à chaque souris dans un volume de 200 microlitres.Ensuite, mélangez soigneusement la suspension à l’aide d’une pipette stérile afin de garantir une répartition homogène des bactéries. Puis, aspirez 200 microlitres d’inoculum dans une seringue de un millilitre à sécurité intégrée, équipée d’une aiguille de 25 gauge. Maintenant, saisissez un souris par la peau lâche au niveau des épaules à l’aide de la main moins dominante.Et injectez les 200 microlitres entiers de l'inoculum dans le quadrant inférieur de l'abdomen, juste latéralement par rapport à la ligne médiane pour éviter la vessie, en utilisant une aiguille et une seringue neuves pour chaque animal. Pour mesurer la charge bactérienne maximale de l'infection, au troisième jour suivant l'infection, immobilisez les membres d'un animal expérimental en position dorsale sur une planche de dissection. Et désinfectez la peau avec de l'éthanol à 70 pour cent.À l’aide de ciseaux robustes stériles, pratiquer une incision allant de la poitrine jusqu’à l’aine. Ensuite, pratiquer une incision partant de l’aine vers chaque genou et du milieu de la poitrine vers chaque coude. Émousser, disséquer et rabattre la peau, puis la fixer en position ouverte à l’aide d’aiguilles de calibre 25.Effectuez une désinfection de la couche musculaire avec de l'éthanol à 70 pour cent. Ensuite, à l'aide de ciseaux fins stériles, pratiquez une incision médiane dans la paroi péritonéale. Utilisez une pince pour saisir l'apophyse xiphoïde.Pratiquer des incisions dans la paroi péritonéale en partant du processus xiphoïde et en se déplaçant latéralement de chaque côté. Suivre la cage thoracique jusqu’à juste en dessous du diaphragme. Cela permettra de découvrir le foie.Ensuite, utilisez des ciseaux stériles pour prélever un morceau d’environ 100 milligrammes dans un lobe. Placez le tissu dans un tube microcentrifuge de 1,5 millilitre préalablement pesé, contenant 0,2 à 0,3 grammes de billes de verre stériles lavées à l’acide de 1,5 à 2 millimètres. Utilisez la pince pour écarter doucement les organes situés du côté gauche de la cavité péritonéale afin de visualiser la rate.Utilisez la pince pour saisir délicatement la rate, en coupant les tissus conjonctifs environnants afin de libérer l'organe de la cavité péritonéale. Placez la rate dans un tube différent de celui du foie, puis transférez les tissus au laboratoire dans un récipient étanche contenant de la glace. Agitez les tubes en utilisant un homogénéisateur à billes pendant trois minutes à une fréquence de 30 hertz.Ensuite, préparer une série de dilutions décimales des homogénats dans du PBS contenant 0,1 pour cent de triton X-100. Puis, utiliser un répandeur stérile pour étaler 100 microlitres de chaque homogénat dilué sur une boîte de gélose BHI. Transférer ensuite les boîtes dans un incubateur à 37 degrés Celsius pour une incubation nocturne.Gardez les plaques contenant jusqu'à 300 colonies par plaque. Comptez les colonies sur chaque plaque. Pour mesurer le CD4 dans les réponses d'interféron gamma des cellules T CT8, prélèvez les splènes de souris infectées par deux dixièmes à la puissance quatre UFC du pathogène, comme vient d'être démontré.Transformer les spléens en une suspension unique de globules rouges vivants. Resuspendre le culot à une concentration de quatre fois dix puissance six cellules par millilitre dans un milieu RPMI complet contenant du sérum de veau fœtal (FCS). Ensuite, semer un millilitre de cellules par puits dans une plaque de 24 puits avec un volume équivalent de Listeria monocytogenes décongelé et inactivé par la chaleur, puis placer les cultures au froid dans un incubateur à 37 degrés Celsius.Après 20 heures, ajouter 0,66 microlitre par millilitre d'inhibiteur du transport protéique dans les puits. Remettre ensuite la plaque dans l'incubateur. Quatre heures plus tard, dans une cabine de sécurité biologique, prélever 500 microlitres de surnageant de culture et congeler les échantillons à moins 80 degrés celsius en vue d'une mesure ultérieure de l'interféron gamma par ELISA.Ensuite, transférez les cellules dans un seul tube stérile de 15 millilitres, en lavant les puits avec du PBS et en regroupant le lavage avec les cellules recueillies pour la coloration et l'analyse par cytométrie en flux. Le pic de charge bactérienne survient dans la rate deux à trois jours après l'infection. Et il est fortement réduit par l'ajout d'un antagoniste du PPAR Alpha avant l'infection.Sept jours après l'infection, la restimulation des cellules T spléniques CD4 positives et CD8 positives ex vivo avec un agent pathogène tué par la chaleur induit une réponse positive en interféron gamma provenant des cellules CD4 positives et CD8 positives, comme détecté par cytométrie en flux. Le traitement par l'antagoniste du PPAR alpha avant l'infection renforce les réponses en interféron gamma des cellules CD4 et CD8. De plus, le traitement par l'antagoniste du PPAR alpha augmente la survie après infection avec la dose LD50 de l'agent pathogène, illustrant ainsi l'utilité de ce modèle pour étudier l'impact de nouveaux médicaments modulant les réponses en interféron gamma sur la survie animale après infection.Une fois maîtrisées, toutes les procédures décrites dans ce protocole peuvent produire les données souhaitées en quelques semaines, à condition d'être correctement réalisées. La technique peut être adaptée davantage en infectant des souris avec des souches de Listeria monocytogenes exprimant des antigènes modèles et en utilisant des tétramères de classe I et II du CMH spécifiques pour ces antigènes. Cela permettra de mesurer l'expansion des lymphocytes T après l'infection.Après son développement, cette technique est devenue un modèle instrumental pour décrypter le rôle de l'interféron gamma dans l'immunité de l'hôte contre les agents pathogènes intracellulaires. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de cultiver et d'infecter des souris C57 blacksix avec Listeria monocytogenes, ainsi que de mesurer la charge bactérienne et les réponses en interféron gamma suite à l'infection.N'oubliez pas que le travail avec *Listeria monocytogenes* peut présenter un danger pour les personnes immunodéprimées, telles que les femmes enceintes, les très jeunes enfants ou les personnes âgées. Par conséquent, l'agent pathogène ne doit être manipulé que par des individus immunocompétents dans des conditions de niveau de sécurité biologique 2.

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Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Listeria monocytogenes est un organisme modèle pour étudier les réponses immunitaires et une susceptibilité génétique à des bactéries intracellulaires chez les souris. Cette méthode permet de mesurer la charge bactérienne et de générer une seule cellule de suspensions de foie et de rate de souris pour l'analyse de FACS pour déterminer les changements dans les cellules immunitaires dues à l'infection par Listeria.

Mesure de la charge bactérienne et les réponses immunitaires chez des souris infectées avec des Listeria monocytogenes</em

Source : Seman, B. G., et al. Un modèle d’imagerie néonatale de septicémie bactérienne à Gram négatif. J. Vis. Exp. (2020)La vidéo présente un modèle murin néonatal pour étudier l’infection systémique à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées. Les nouveau-nés sont injectés avec des suspensions bactériennes à forte ou faible dose et sont renvoyés à leur mère pour des soins postnataux. Les bactéries encapsulées échappent à la détection immunitaire précoce, se propagent systémiquement et...

Modéliser l’infection chez les souris néonatales à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées

Source : Radulovic, K., et al. Injections de lipopolysaccharides dans des souris pour imiter l’entrée de produits d’origine microbienne après une rupture de la barrière intestinale. J. Vis. Exp. (2018)Cette vidéo présente une procédure étape par étape pour injecter des lipopolysaccharides (LPS) intrapéritonéalement chez des souris afin d’induire une inflammation systémique.

Injection intrapéritonéale de lipopolysaccharides bactériens chez la souris pour étudier les réponses immunitaires systémiques

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

In Vitro Stimulation of Mouse Splenocytes with Heat-Killed Listeria monocytogenes

Cette vidéo présente une méthode d’imagerie permettant de visualiser in situ la sécrétion d’interféron-gamma (IFN-γ) dans la rate de souris. Suite à une infection bactérienne et à l’induction de l’accumulation d’IFN-γ à l’intérieur des lymphocytes T et des cellules tueuses naturelles, la rate est prélevée sur la souris. Lors de l’obtention de coupes de tissus, une immunocoloration est effectuée pour visualiser l’IFN-γ à l’intérieur des cellules.

Dosage pour l’identification de la sécrétion d’interféron gamma dans les organes lymphoïdes murins

Cette vidéo démontre la quantification de la charge bactérienne infectieuse du cerveau de souris perfusé infecté par Listeria monocytogenes.

Évaluation de la colonisation bactérienne dans le cerveau d’une souris à la suite d’une infection à Listeria monocytogenes

Cet article décrit une nouvelle méthode pour infection orale de souris à...

La transmission orale de<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Chez la souris par l&#39;ingestion d&#39;aliments contaminés

Listeria monocytogenes est une bactérie pathogène à Gram positif fréquemment utilisé comme un modèle important pour l'étude du parasitisme intracellulaire. Imagerie fin L. monocytogenes stades d'infection dans le contexte de petits écrans ARN interférant permet l'étude globale des voies cellulaires nécessaires à l'infection bactérienne de cellules hôtes cibles.

Imagerie RICL sécrétion d&#39;enquêter sur l&#39;infection cellulaire par le pathogène bactérien<em&gt; Listeria monocytogenes</em

Nous décrivons les deux tests in vitro et in vivo de l’infection qui peuvent être utilisés pour analyser les activités des facteurs de l’hôte-codage.

À l’aide d’un bactérie pathogène à sonde pour réponses cellulaires et organismique au niveau de l’hôte

Ici, nous décrivons une méthode simple de formation image confocale pour visualiser la localisation in situ des cellules sécrétant le gamma d'interféron de cytokine dans les organes lymphoïdes secondaires murines. Ce protocole peut être étendu pour la visualisation d'autres cytokines dans divers tissus.

Imagerie de la production gamma d'interféron in situ dans la rate de souris suite à l'infection à Listeria monocytogenes

Apprenez à infecter des souris C57BL/6J avec Listeria monocytogenes pour étudier les réponses interféron-γ des cellules NK, NKT et lymphocytes T. Ce protocole simple mesure la charge bactérienne et la survie.

Infection expérimentale avec

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