Name: Méthodes pour lisolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Apprenez l'isolement de myocytes du nœud sinoatrial de souris adultes pour des études électrophysiologiques et d'imagerie. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes de rythme cardiaque et les courants ioniques.

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Nous remercions le Dr Christian Rickert pour la lecture critique du manuscrit. Ce travail a été soutenu par une subvention du National Heart Lung and Blood Institute (R01-HL088427) à CP. EJS a été soutenu par 5T32-AG000279 du National Institute on Aging. Le contenu relève de la seule responsabilité des auteurs et ne représente pas nécessairement les opinions officielles des National Institutes of Health.

<ol><li>Irisawa, H., Noma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pacemaker+currents+in+mammalian+nodal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Pacemaker currents in mammalian nodal cells.</a> J Mol Cell Cardiol. 16 (9), 777-781 (1984).</li>
<li>DiFrancesco, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pacemaker+mechanisms+in+cardiac+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pacemaker mechanisms in cardiac tissue.</a> Annu Rev Physiol. 55, 455-472 (1993).</li>
<li>Mangoni, M., Nargeot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genesis+and+regulation+of+the+heart+automaticity%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Genesis and regulation of the heart automaticity.</a> Physiol Rev. 88 (3), 919-982 (2008).</li>
<li>Lakatta, E. G., DiFrancesco, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+keeps+us+ticking%3A+a+funny+current%2C+a+calcium+clock%2C+or+both%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">What keeps us ticking: a funny current, a calcium clock, or both.</a> J Mol Cell Cardiol. 47 (2), 157-170 (2009).</li>
<li>Liao, Z., Lockhead, D., Larson, E., Proenza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation+and+modulation+of+hyperpolarization-activated+HCN4+channels+by+protein+kinase+A+in+the+mouse+sinoatrial+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Physiol%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation and modulation of hyperpolarization-activated HCN4 channels by protein kinase A in the mouse sinoatrial node.</a> J Gen Physiol. 136 (3), 247-258 (2010).</li>
<li>Liao, Z., St Clair, J. R., Larson, E. D., Proenza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myristoylated+peptides+potentiate+the+funny+current+%28I%28f%29%29+in+sinoatrial+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Channels%22%5BJournal%5D)">Myristoylated peptides potentiate the funny current (I(f)) in sinoatrial myocytes.</a> Channels. 5 (2), 115-119 (2011).</li>
<li>Larson, E. D., Clair, J. R. S., Sumner, W. A., Bannister, R. A., Proenza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depressed+pacemaker+activity+of+sinoatrial+node+myocytes+contributes+to+the+age-dependent+decline+in+maximum+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Depressed pacemaker activity of sinoatrial node myocytes contributes to the age-dependent decline in maximum heart rate.</a> Proc Nat Acad Sci. 110 (44), 18011-18016 (2013).</li>
<li>St. Clair, J. R., Liao, Z., Larson, E. D., Proenza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA-independent+activation+of+I%28f%29+by+cAMP+in+mouse+sinoatrial+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Channels%22%5BJournal%5D)">PKA-independent activation of I(f) by cAMP in mouse sinoatrial myocytes.</a> Channels. 7 (4), 318-321 (2013).</li>
<li>St. Clair, J. R., Sharpe, E. J., Proenza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+and+adenoviral+infection+of+sinoatrial+node+myocytes+from+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Culture and adenoviral infection of sinoatrial node myocytes from adult mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2015).</li>
<li>Clark, R. B., Mangoni, M. E., Lueger, A., Couette, B., Nargeot, J., Giles, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapidly+activating+delayed+rectifier+K%2B+current+regulates+pacemaker+activity+in+adult+mouse+sinoatrial+node+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">A rapidly activating delayed rectifier K+ current regulates pacemaker activity in adult mouse sinoatrial node cells.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 286 (5), H1757-H1766 (2004).</li>
<li>Mangoni, M., Nargeot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+the+hyperpolarization-activated+current+%28I%28f%29%29+in+isolated+mouse+sino-atrial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Properties of the hyperpolarization-activated current (I(f)) in isolated mouse sino-atrial cells.</a> Cardiovasc Res. 52 (1), 51-64 (2001).</li>
<li>Cho, H. S., Takano, M., Noma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrophysiological+properties+of+spontaneously+beating+pacemaker+cells+isolated+from+mouse+sinoatrial+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The electrophysiological properties of spontaneously beating pacemaker cells isolated from mouse sinoatrial node.</a> J Physiol. 550 (Pt 1), 169-180 (2003).</li>
<li>Rose, R. A., Lomax, A. E., Kondo, C. S., Anand-Srivastava, M. B., Giles, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+C-type+natriuretic+peptide+on+ionic+currents+in+mouse+sinoatrial+node%3A+a+role+for+the+NPR-C+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of C-type natriuretic peptide on ionic currents in mouse sinoatrial node: a role for the NPR-C receptor.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 286 (5), H1970-H1977 (2004).</li>
<li>Rose, R. A., Kabir, M. G., Backx, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+Heart+Rate+and+Sinoatrial+Node+Function+in+Mice+Lacking+the+cAMP+Regulator+Phosphoinositide+3-Kinase-%5Cgamma%5C%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Altered Heart Rate and Sinoatrial Node Function in Mice Lacking the cAMP Regulator Phosphoinositide 3-Kinase-\gamma\.</a> Circ Res. 101 (12), 1274-1282 (2007).</li>
<li>Hua, R., Adamczyk, A., Robbins, C., Ray, G., Rose, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+constitutive+phosphodiesterase+activity+in+mouse+sinoatrial+node+and+atrial+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of constitutive phosphodiesterase activity in mouse sinoatrial node and atrial myocardium.</a> PloS ONE. 7 (10), e47652(2012).</li>
<li>Groenke, S., Larson, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+atrial-specific+knockout+of+sodium-calcium+exchange+eliminates+sinoatrial+node+pacemaker+activity%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Complete atrial-specific knockout of sodium-calcium exchange eliminates sinoatrial node pacemaker activity.</a> PloS ONE. 8 (11), e81633(2013).</li>
<li>Torrente, A. G., Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burst+pacemaker+activity+of+the+sinoatrial+node+in+sodium-calcium+exchanger+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Burst pacemaker activity of the sinoatrial node in sodium-calcium exchanger knockout mice.</a> Proc Nat Acad Sci USA. 112 (31), 9769-9774 (2015).</li>
<li>Denyer, J. C., Brown, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+sino-atrial+node+cells%3A+isolation+and+electrophysiological+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rabbit sino-atrial node cells: isolation and electrophysiological properties.</a> J Physiol. 428 (1), 405-424 (1990).</li>
<li>Thum, T., Borlak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butanedione+monoxime+increases+the+viability+and+yield+of+adult+cardiomyocytes+in+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Butanedione monoxime increases the viability and yield of adult cardiomyocytes in primary cultures.</a> Cardiovasc Toxicol. 1 (1), 61-72 (2001).</li>
<li>Borlak, J., Zwadlo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myosin+ATPase+inhibitor+2%2C3-butanedione+monoxime+dictates+transcriptional+activation+of+ion+channels+and+Ca%282%2B%29-handling+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Molec+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The myosin ATPase inhibitor 2,3-butanedione monoxime dictates transcriptional activation of ion channels and Ca(2+)-handling proteins.</a> Molec Pharmacol. 66 (3), 708-717 (2004).</li>
</ol>

Cet article présente des protocoles détaillés pour l&#39;isolement et la culture de complètement différenciées myocytes nœud sinusal de souris adultes. Le protocole d&#39;isolement produit fiable SAMs de souris spontanément actifs appropriés soit pour l&#39;analyse électrophysiologique immédiate ou la culture subséquente. Des protocoles similaires ont été rapportés par de nombreux autres groupes (par exemple, voir les références 11,12,10,13-17). Cependant, notre protocole pour le maintien de la souris adulte ...

myocytes pacemakers dans le nœud sinusal du cœur (myocytes sinoatrial, &quot;GSB&quot;) génèrent, potentiels spontanés rythmiques d&#39;action (PA) qui se propagent à travers le myocarde pour initier chaque battement de cœur. Des expériences utilisant SAMs aiguë isolées de nombreuses espèces ont été essentiels pour l&#39;élucidation des mécanismes qui contribuent à la génération de l&#39;activité pacemaker. SAMs sont cardiomyocytes hautement spécialisées qui diffèrent sensiblement de leurs homologues de l&#39;auriculaire et ventriculaire myocardique en termes de morphologie, la fonction et l&#39;expression des protéines. La marque de points d&#39; accès spontanés dans GSB est une dépolarisation spontanée pendant la diastole qui conduit le potentiel de membrane au seuil pour déclencher le prochain point d&#39; accès de 1,2. Ce «potentiel de stimulateur&quot; dépend de l&#39;activité coordonnée de nombreux courants différents de la membrane , y compris la «drôle de courant&quot; (I f), T et de type L courants de calcium et le sodium-calcium échangeur current (I NCX), qui est entraîné par Ca la libération du réticulum sarcoplasmique 3,4. Alors que la souris aiguë isolée SAMs sont une préparation expérimentale essentielle pour l&#39;étude de pacemaker, l&#39;isolement des SAMs de souris peut être une méthode difficile à adopter, car l&#39;anatomie indistincte et la petite taille du SAN souris nécessite une microdissection nuancée et enzymatique combiné et mécanique dissociation des cellules nécessite une optimisation minutieuse. Nous fournissons ici une vidéo de démonstration détaillée d&#39;un protocole qui a été utilisé avec succès pour isoler SAMs de souris adultes pour les enregistrements de patch clamp 5-8. À notre connaissance, il n&#39;y a pas une telle démonstration visuelle disponible à partir de toute autre source. En outre, une nouvelle méthode est mise en évidence dans laquelle isolé GSB de souris adultes peuvent être maintenues in vitro pendant plusieurs jours, ce qui permet l&#39;introduction de protéines codées génétiquementmolécules reporters ou ARNi via une infection adénovirale 9.

<table><tbody><tr><td>Kit Sylgruard/Élastomère</td><td>Dow Corning</td><td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Borosilicate 9" Pipettes pasteur</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>Petits tubes de culture à fond rond</td><td>Fisher Scientific</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>Grands tubes de culture à fond rond</td><td>Corning</td><td>14-959-11B</td><td></td></tr><tr><td>Elastase</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS002279</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM</td><td>Roche</td><td>5401119001</td><td>Solution de dissociation tissulaire</td></tr><tr><td>Héparine</td><td>SAGENT Pharmaceuticals&nbsp ;</td><td>NDC 25021-400-10</td><td></td></tr><tr><td>Laminin de souris</td><td>Corning</td><td>CB-354232</td><td></td></tr><tr><td>12 mm lamelles rondes en verre Fisher</td><td>&nbsp ;</td><td>12-545-80</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture à 24 puits</td><td>Fisher</td><td>08-772-1</td><td></td></tr><tr><td>Ad-mCherry</td><td>Vector Biolabs</td><td>1767</td><td></td></tr><tr><td>Ad-eGFP</td><td>Vector Biolabs</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>Pipette de transfert jetable en plastique</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro-ciseaux</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-467-496</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #4 Pince</td><td>Roboz Instruments</td><td>RS-4904</td><td></td></tr><tr><td>Pince à tissus</td><td>Roboz Instruments</td><td>RS-8164</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à iris de dissection</td><td>WPI, Inc.</td><td></td><td></td>501264</tr><tr><td>Broches de dissection</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>71376</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>60128</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>60353</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>54457</td><td></td></tr><tr><td>glucose</td><td>Sigma</td><td>G0350500</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>taurine</td><td>Sigma</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>K-glutamate</td><td>Sigma</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>K-aspartate</td><td>Sigma</td><td>A6558</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>créatine</td><td>Sigma</td><td>C0780</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Mg-ATP</td><td>Sigma</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>Amphotéricine-B</td><td>Fisher Scientific</td><td>1397-89-3</td><td></td></tr><tr><td>Isoprotérénol</td><td>Calbiochem</td><td>420355</td><td></td></tr><tr><td>Media199</td><td>Sigma</td><td>M4530</td><td></td></tr><tr><td>2,3-butanedione monoxime (BDM)</td><td>Sigma</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Sigma</td><td>SH30071</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A5611</td><td></td></tr><tr><td>Insuline&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>I3146</td><td></td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma</td><td>I3146</td><td></td></tr><tr><td>Selenium</td><td>Sigma</td><td>I3146</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline</td><td>GE Healthcare</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td></td></tr></tbody></table>

méthodes pour l&#39;isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial node myocytes de souris adultes

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

myocytes nœud sinusal (GSB) agissent comme les stimulateurs cardiaques naturelles du cœur, initiant chaque battement de coeur en générant des potentiels d&#39;action spontanés (AP). Ces points d&#39;accès du stimulateur reflètent l&#39;activité coordonnée de nombreux courants membranaires et intracellulaires vélo de calcium. Cependant, les mécanismes précis qui animent l&#39;activité pacemaker spontanée dans SAMs demeurent insaisissables. Pleinement SAMs isolées sont une préparation essentielle pour les expériences de disséquer la base moléculaire de pacemaker cardiaque. Cependant, l&#39;anatomie indistincte, microdissection complexe, et les conditions de digestion enzymatique tatillonnes ont empêché l&#39;utilisation généralisée de aiguë isolée GSB. En outre, les méthodes ne sont pas disponibles jusqu&#39;à récemment pour permettre la culture à long terme de SAMs pour les études d&#39;expression de protéines. Ici, nous fournissons un protocole et vidéo de démonstration étape par étape pour l&#39;isolement des SAMs de souris adultes. Un procédé est également démontrée pour le maintien de la souris adulte GSB in vitro et pour expressisur des protéines exogènes par une infection adénovirale. Pleinement isolées et cultivées SAMs préparées par ces procédés sont appropriés pour une variété d&#39;études électrophysiologiques et d&#39;imagerie.

Les protocoles décrits ici ont été précédemment employés pour isoler GSB spontanément actifs de souris adultes qui sont appropriés pour une variété de brassage de différentes études de blocage 5-8. En outre, les protocoles permettent de SAMs isolés qui peuvent être maintenues en culture pendant jusqu&#39;à une semaine. Transfert de gène dans les cellules en culture peut être réalisée par l&#39; intermédiaire d&#39;une infection adénovirale 9. Les résultats présentés...

Les méthodes sont mises en évidence pour l&#39;isolement des myocytes nœud sino-auriculaire (SAMS) provenant de souris adulte pour les études électrophysiologiques de patch-clamp ou d&#39;imagerie. Les cellules isolées peuvent être utilisés directement ou peuvent être maintenues en culture pour permettre l&#39;expression de protéines d&#39;intérêt, comme rapporteurs codés génétiquement.

Méthodes pour l&#39;isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler des myocytes du nœud sinusal spontanément actifs chez la souris pour des expériences électrophysiologiques ou d'imagerie à court ou moyen terme. Les myocytes isolés du nœud sinusal sont importants pour l'étude des mécanismes de marquage cardiaque, en particulier l'analyse de courants ioniques spécifiques ou du timing de la libération intracellulaire de calcium. Toutefois, relativement peu de laboratoires utilisent des myocytes du nœud sinusal isolés chez la souris, en partie parce qu'il est très difficile d'apprendre cette procédure uniquement à partir de méthodes écrites.Après avoir préparé toutes les solutions nécessaires à l'isolement, ôter le pelage de la poitrine de l'animal à l’aide de ciseaux. Ensuite, sectionner la cage thoracique à l’aide de pinces à tissus externes et de ciseaux de dissection afin d’exposer la cavité thoracique. Rincer la cavité thoracique avec deux millilitres de Tyrode complet réchauffé contenant de l’héparine.Sous un microscope stéréoscopique, retirer soigneusement les poumons et le thymus à l’aide de ciseaux internes et de pinces de dissection. Tout en tenant délicatement l’apex du cœur, couper soigne

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Cette vidéo montre la procédure d’isolement d’un nœud sino-auriculaire ou d’un SAN du cœur de la souris. Le SAN abrite les cellules sino-auriculaires qui initient le rythme cardiaque en générant des potentiels d’action spontanés.

Isolement du nœud sino-auriculaire à partir d’un modèle murin : une procédure pour récolter le nœud SA du cœur murin

Nous décrivons ici l'isolement de cardiomyoctyes de souris adultes en utilisant un système de perfusion de Langendorff. Les cellules résultantes sont des ions Ca2 + à tolérance de repos électriquement et peuvent être cultivées et transfectées avec l'adénovirus ou de lentivirus de manipuler l'expression génique. Leur fonctionnalité peut également être analysé en utilisant le système MMSYS et techniques de patch-clamp.

Isolement, culture et caractérisation fonctionnelle des adultes Cardiomyoctyes souris

Nous décrivons une méthode fiable pour l'isolement des cardiomyocytes de souris adultes. Ce protocole donne un résultat cohérent pour la culture des cardiomyocytes adultes fonctionnels à partir d'une variété de souris génétiquement modifiées.

Isolement et culture de cardiomyocytes adultes de souris pour Signalisation cellulaire et<em&gt; In vitro</em&gt; Hypertrophie cardiaque

Ce protocole décrit une méthode étape par étape pour l’isolement reproductible et la culture à long terme de cardiomyocytes de souris adultes avec un rendement, une pureté et une viabilité élevés.

L&#39;isolement, la culture et la transduction des adultes cardiomyocytes souris

Ce protocole est utilisé pour isoler les cardiomyocytes auriculaires simples du cœur adulte de souris en utilisant une approche de digestion de morceau. Cette approche est utilisée pour isoler les myocytes auriculaires de droite ou de gauche qui peuvent être utilisés pour caractériser l'électrophysiologie du myocyte auriculaire dans les études de patch-clamp.

Isolement des myocytes auriculaires des souris adultes

Ici, nous présentons un protocole pour l’isolement, la transfection, et la culture à long terme de la souris adulte et les cardiomyocytes de rat.

Isolation, transfection et culture à long terme des cardiomyocytes adultes de souris et de rats

Une méthode est décrite pour l’isolement simultané des myocytes et des non-myocytes des atria et des ventricules d’un coeur adulte simple de souris. Ce protocole a comme résultat des rendements cohérents des myocytes cardiaques et des non-myocytes fortement viables et détaille les conditions optimales de culture cellule-spécifique pour le phénotypage et l’analyse in vitro.

Isolement et culture simultanés des myocytes auriculaires, des myocytes ventriculaires et des non-myocytes provenant d’un cœur de souris adulte

Nous avons développé une méthode simple pour isoler les cellules individuelles de coeur de souris de haute qualité par la technique antegrade de perfusion. Cette méthode est sans Langendorff et utile pour isoler les myocytes ventriculaires et auriculaires ou les cellules interstitielles, telles que les fibroblastes cardiaques ou les progéniteurs.

Procédé de perfusion antegrade pour l’isolement de cardiomyocytes de souris

Les modèles murins permettent d’étudier les mécanismes clés de l’arythmogenèse. À cette fin, des cardiomyocytes de haute qualité sont nécessaires pour effectuer des mesures patch-clamp. Ici, une méthode pour isoler les myocytes auriculaires et ventriculaires murins via une perfusion de Langendorff à base d’enzymes rétrogrades, qui permet des mesures simultanées des transitoires de calcium et du courant de calcium de type L, est décrite.

Isolement de myocytes auriculaires et ventriculaires murins de haute qualité pour des mesures simultanées des transitoires Ca2+ et du courant calcique de type L

Le protocole présenté ici fournit une approche étape par étape pour l’isolement des macrophages cardiaques résidents de la région du ganglion sino-auriculaire (SAN) et du nœud auriculo-ventriculaire (AVN) du cœur de souris.

Isolement et culture de macrophages cardiaques résidents du nœud sino-auriculaire murin et auriculo-ventriculaire

Ce protocole décrit les modifications de la méthode de Langendorff, y compris la profondeur de la canulation de l’aorte pour l’isolement simultané des myocytes auriculaires et ventriculaires de souris adultes.

Modifications de la méthode de Langendorff pour l’isolement simultané des myocytes auriculaires et ventriculaires de souris adultes

Apprenez l'isolement de myocytes du nœud sinoatrial de souris adultes pour des études électrophysiologiques et d'imagerie. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes de rythme cardiaque et les courants ioniques.

Méthodes pour l'isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes

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