Name: Symmetric Bihemispheric Postmortem cerveau de coupe pour étudier en santé et états pathologiques du cerveau chez les humains (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Apprenez la technique de coupe cérébrale bi-hémisphérique symétrique pour étudier les maladies neurologiques humaines. Cette méthode permet d'évaluer la sévérité et la distribution hémisphérique des pathologies cérébrales.

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Nous remercions les milliers de donneurs de cerveau, de patients, de familles et de neuroscientifiques du monde entier qui, au cours des deux derniers siècles et grâce à leurs dons généreux et à leurs efforts intellectuels, ont contribué à découvrir le fonctionnement du cerveau humain, à comprendre les maladies cérébrales dévastatrices et à développer des traitements à ces sujets. Nous remercions tout particulièrement Mme Cecilia V. Feltis pour l’édition et la révision de ce manuscrit.

Les procédures impliquant des tissus humains post-mortem ont été examinés par le comité d&#39;examen institutionnel et exemptés en vertu de 45 CFR (Code of Federal Regulations). NOTE: Le protocole décrit une procédure de coupe du cerveau bihemispheric symétrique pour l&#39;évaluation du cerveau post-mortem finalisé pour les études neuropathologiques chez les humains. Des descriptions détaillées des appareils, instruments, matériaux et fournitures nécessaires pour effectuer la coupe du cerveau humain seront exclus. Matériaux et fournitures pour dissections du cerveau sont sélectionnés à la discrétion du chercheur unique et sont basés sur les outils d&#39;autopsie autorisés ou approuvés à chaque institution de recherche. L&#39;ensemble minimal d&#39;outils et le matériel requis pour cette procédure est décrite dans le tableau Matériel / Equipement. Procédures et précautions pour les maladies du cerveau transmissibles suspects, tels que la MCJ humaine coupe spécifiques, sont en dehors des objectifs de ce manuscrit et sont disponibles à partir d&#39; autres sources 7. 1. Symmetric Bihémisphérique coupe du cerveau Remarque: Assurez -vous que le cerveau a reçu la fixation du tissu nécessaire ( en utilisant, par exemple, neutre tamponnée au formol à 10%) pendant une période de deux à trois semaines, selon le periagonal, métaboliques ( par exemple, le pH) et le tissu de conservation ( à savoir, température) conditions. Cependant, pour des études de corrélation imagerie-pathologie, une période de fixation plus longue (&gt; 5,4 semaines) a été suggérée 8. <ol><li> Placer le cerveau sur une surface plane faisant face à l&#39;enquêteur, avec les pôles frontales dirigées dans le sens opposé par rapport à l&#39;enquêteur. </li><li> Placez le cerveau de telle manière à permettre une visualisation claire et complète de toutes les circonvolutions corticales et sulci du cerveau entier (figure 1a). </li><li> Premier coup d&#39; oeil pour les anomalies méningées, asymétries hémisphériques macroscopiques (indicateurs possibles de focale, lobaire, ou des phénomènes hémisphériques généralisées d&#39;atrophie), des lésions macroscopiques tissutal (ie, toumors ou hernies), des malformations congénitales, des anomalies des vaisseaux, et d&#39;autres anomalies possibles ou des présentations inhabituelles de la surface cérébrale. REMARQUE: Pour des descriptions détaillées sur la façon d&#39;évaluer un cerveau humain, voir disponibles dans le commerce manuels de neuropathologie et manuels d&#39; autopsie 9,10. </li></ol> 2. Protocole de séquence <ol><li> Face à poteaux frontaux loin de l&#39;enquêteur, avec les aspects superficiels de l&#39;hémisphère (télencéphale) face à l&#39;enquêteur. Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter possibles macro-anomalies et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale (figure 1a - c). </li><li> Mark pré et gyri corticales postcentral à l&#39;encre ou des aiguilles de couleur avant de couper le cerveau (figure 1b </strong&gt;). NOTE: Cette procédure facilite une reconnaissance plus immédiate du moteur et corticales primaires somatosensoriel après la coupe. </li><li> Tournez le cerveau de 180 degrés tout en gardant la même direction (ie, les pôles frontales opposées à l&#39;enquêteur). Inspectez soigneusement la base du cerveau. Portez une attention particulière aux conditions des systèmes vasculaires cérébraux ( par exemple, les artères basilaires et vertébrales et le cercle de Willis) et les nerfs crâniens à leurs niveaux de sortie / d&#39;entrée du tronc cérébral. Gérer les ampoules et les voies olfactives avec un soin particulier pour éviter la lacération tissutal, en raison de leur extrême fragilité. <ol><li> Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter possibles macro-anomalies et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer l&#39;intégralité des surfaces corticales et du tronc cérébral. </li&gt; </ol></li><li> Face à la base du cerveau et en utilisant un scalpel, couper la transversale du tronc cérébral au niveau de la partie supérieure du pont (aussi près que possible à la base du cerveau). Inspectez soigneusement la SN (ie, pâleur) 11 et d&#39; autres structures voisines 12. Prenez note, en utilisant éventuellement un dispositif d&#39;enregistrement audio, de toute apparence inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal 13. </li><li> Encore une fois tourner le cerveau de 180 degrés et, à l&#39;aide d&#39;un couteau bien aiguisé, séparer les deux hémisphères en coupant le corps calleux centralement à travers la fente longitudinale médiane et suivant une direction fronto-occipital. Inspectez chaque côté de chaque hémisphère pour d&#39; éventuelles anomalies (par exemple, des agrandissements ventriculaires, malformations, adoucissement des tissus, tumeurs, etc.) 13. Voir la figure 2a. <ol><li> Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter macro-anomalies possibles etpour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale. Prenez note de toute caractéristique inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal. </li></ol></li><li> Placez les deux hémisphères plat, couchés sur leurs aspects médiaux, avec les lobes frontaux opposé à l&#39;enquêteur, comme le montre la figure 2b. Placez-les de manière à ce que leurs centres touchent (également en cas d&#39;asymétrie hémisphérique marquée). </li><li> Avec un couteau bien aiguisé, couper manuellement à travers les deux hémisphères cérébraux, en commençant par les pôles frontaux et le déplacement vers les pôles occipitaux sur toute la longueur des hémisphères. Obtenir deux séries de 1 cm d&#39;épaisseur des blocs de tissu cérébral (environ 18 plaques pour chaque hémisphère). </li><li> Placer les plaques cérébrales dans un (sens fronto-occipitales) la séquence anatomiquement organisée sur une surface plane séparée. Utilisez un surfa blancCE avec une règle imprimée sur elle pour un meilleur contraste lorsque vous photographiez. Afficher les deux séries de plaques cérébrales d&#39;une manière anatomique symétrique (direction fronto-occipitale), en veillant à ce que leurs surfaces coronales sont visibles pour l&#39; inspection directe des yeux et de la photographie numérique (Figure 3a). Utiliser des surfaces de coupe avec des grilles millimétriques imprimées des deux côtés pour localiser les structures cérébrales, tailles et anomalies possibles d&#39;une manière plus précise. <ol><li> Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter possibles macro-anomalies et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale. Prendre des notes (éventuellement en utilisant un dispositif d&#39;enregistrement audio), d&#39;un aspect inhabituel du cerveau par rapport à un cerveau normal. </li></ol></li><li> L&#39;utilisation d&#39;un scalpel, disséquer manuellement des blocs rectangulaires plus petits deles tissus du cerveau pour chaque région cérébrale établie. Suivez le système de collecte de la région cérébrale proposée décrite dans le tableau 1. <ol><li> Mettez chaque bloc de tissu dans histocassettes étiquetés séparément. NOTE: Chaque bloc de tissu cérébral doit être coupé pour adapter, autant que possible, le volume maximal de histocassette standard (30 x 20 x 4 mm 3). </li><li> Etiqueter les histocassettes en utilisant un code de-identification pour chaque cas et en utilisant des identifiants neuroanatomiques spécifiques (ne pas utiliser des lettres ou des nombres aléatoires pour différents cerveaux, mais plutôt, utiliser toujours la même régionale noms anatomiques ou les numéros correspondants, comme indiqué dans le tableau 1). Créer des codes de-identifier, par exemple, en générant des nombres aléatoires ou semi-aléatoires pour chaque cas (c. -à- BRC 130, où B reste du cerveau, R reste pour Ressource, C reste pour le centre et 130 est une adhésion progressive ou AD160001, où AD signifie «l&#39;étude de la maladie d&#39;Alzheimer,&quot; 16 est leannée où l&#39;autopsie a été réalisée (2016) et 0001 un numéro d&#39;accès de l&#39;échantillon progressif). REMARQUE: Cette étape est très utile pour les futurs chercheurs; garder une légende, et spécifiez l&#39;hémisphère (L = hémisphère gauche, R = hémisphère droit). Utilisez deux couleurs différentes de histocassettes, l&#39;établissement d&#39;une couleur spécifique pour chaque hémisphère. </li><li> Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter macroanomalies possibles et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale. Prenez note de toute caractéristique inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal. </li></ol></li><li> Prenez des photos numériques (autant que nécessaire ou souhaité) de l&#39;ensemble du cerveau de coupe et les histocassettes associés. </li><li> Punch (par exemple, par Accu-punch) de petits morceaux de tissu pour l&#39; extraction de l&#39; ADN et des analyses génétiques. Utilisationun coup de poing de 2 - 5 mm de diamètre. NOTE: Pour sa teneur élevée en matière génomique, le cervelet est le choix préféré; cependant, toute autre région est très bien. </li><li> Réimmerger tous histocassettes contenant des blocs de tissu cérébral dans le même type de solution de fixation (par exemple 10% de formol tamponné neutre) comme précédemment utilisée jusqu&#39;à l&#39;étape suivante de traitement des tissus. </li><li> Suivez les procédures standard pour le traitement des tissus fixés au formol 14 humain. </li></ol> 3. Une approche spéciale: Alternating Congelés et fixe coupe Symmetric Bihemispheric NOTE: Le protocole de coupe du cerveau bihemispheric symétrique décrit dans la section 2 offre la possibilité de découper des dalles de tissus de cerveaux frais, non fixées (si disponible) de la même manière systématique et symétrique. <ol><li> Placer l&#39;ensemble du cerveau frais à l&#39;envers (de préférence sur une surface en matière plastique en forme de bol hémisphérique) pendant 8 à 10 minutes dans un congélateur à -80 ° C pour durcir le tissu cérébral without provoquer des dommages biochimiques et pour faciliter la coupe manuelle. </li><li> Avec un couteau bien aiguisé, couper les deux hémisphères dans une autre et de manière consécutive, en suivant le protocole de coupe du cerveau décrit dans la section 2, mais geler et fixer tous les autres dalle (des deux hémisphères et le long d&#39;une direction anatomique fronto-occipitale). <ol><li> À ce stade, ne pas essayer de couper chaque région cérébrale, comme décrit dans le tableau 1. Couper des régions spécifiques du cerveau frais seulement si nécessaire pour l&#39; ARN immédiat ou l&#39; extraction des protéines ( par exemple, pour des études génomiques ou protéomiques) 15. </li></ol></li><li> Après la coupe, geler immédiatement, l&#39;étiquette et le numéro de chaque tissu frais. Prenez des photos numériques de la série de la dalle entière; emballer chaque dalle dans un sac en plastique unique; recueillir les dalles en un cerveau uniquement récipient séparé,; et stocker le récipient dans un congélateur à -80 ° C dédié. NOTE: Le congélateur doit être dédié aux tissus du cerveau humain seulement. Seulement plus tard, va chanterLe régions du cerveau congelé être coupées selon les besoins pour chaque expérience spécifique. </li><li> Immerger tout autre dalle de tissu choisi pour la fixation (10% de formaline tamponnée neutre ou une autre fixatif) dans des sacs séparés contenant un volume suffisant de fixatif (3/1 volume du rapport A / tissu bloc fixatif). Étiquetez chaque sac par consécutivement les numérotant suivant une séquence fronto-occipital. Sceller chaque sac, prendre des photos numériques, et les stocker dans un récipient en plastique. </li><li> Ouvrez les sacs contenant fixateur-après 2 semaines de fixation du tissu et couper chaque région cérébrale comme décrit dans le tableau 1. </li></ol> 4. Histostain et immunohistochimie NOTE: L&#39;ensemble des régions cérébrales cut basée sur le schéma proposé (tableau 1) sont suffisantes pour satisfaire à des critères pathologiques basés sur le consensus la plupart, sinon tous, actuellement établi pour AD 16, PD 17, la démence à corps de Lewy (DCL) 18, La démence frontotemporale (DFT / MND) <sup&gt; 19, Progressive Suprabulbar Paralysie (PSP) 20, l&#39; atrophie multisystématisée (MSA) 21, encéphalopathie traumatique chronique (CTE) 22, etc. <ol><li> Pour chaque région du cerveau et pour les deux hémisphères, effectuer l&#39;ensemble minimal de histostains suivant: hématoxyline et de l&#39;éosine (H &amp; E), le violet de crésyl (CV, si des études quantitatives morphométriques sont prévues, par exemple), et coloration à l&#39;argent (si des analyses &quot;exploratoires&quot; sont nécessaire). </li><li> Pour chaque région du cerveau et pour les deux hémisphères, effectuer l&#39;ensemble minimal de protocoles d&#39;immunohistochimie suivants: ß - amyloïde (β A),-Tau phosphorylée (pTau), phosphorylée α-synucléine (pα-syn), et phosphorylée-TDP43 (pTDP43) , tel que décrit 14. NOTE: Le nombre total de coupes de tissus afin d&#39;évaluer chaque cerveau à la suite de ce protocole est de 46 (si toutes les régions cérébrales des deux hémisphères sont disponibles). </li></ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à dévoiler.

Cette méthode de cerveau de coupe peut être adaptée aux besoins spécifiques de chaque laboratoire de neuropathologie (par exemple, en réduisant le nombre de régions cérébrales pour évaluer pour chaque hémisphère), tout en conservant la procédure de coupe symétrique bihemispheric comme l&#39;une de ses principales caractéristiques. Ce protocole proposé pourrait être utilisé pour des procédures de routine (centres neuropathologiques orientés vers la recherche) ou seulement lorsque cela est nécessaire (études spécifiques a...

Neuropathologistes ont le privilège scientifique, l&#39;honneur intellectuelle, et l&#39;obligation de diagnostic pour évaluer les cerveaux humains. Pendant de nombreuses décennies, les descriptions cliniques détaillées des maladies du cerveau et des efforts importants pour individualisent leurs corrélats neurohistologiques possibles dans le cerveau post-mortem humains ont été entreprises. Historiquement, ces efforts représentent la modalité la plus productive par lequel les sciences médicales et la neurologie, en particulier, ont progressé dans l&#39;ère moderne. Merci à neuropathologistes précédents éminents et leur dévouement, la détermination, la bourse, et étonnante capacité de discriminer entre les tissus cérébraux normaux et anormaux (en utilisant souvent des outils très rudimentaires), nous pouvons maintenant étudier et des maladies telles que la maladie d&#39;Alzheimer-Perusini cibles (injustement seulement appelé la maladie d&#39;Alzheimer maladie; APD / AD) 1, la maladie de Parkinson (PD) 2, la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) 3, la maladie de Lou Gehrig / sclérose latérale Sclerosis (ALS) 4, et Guam maladies 5, pour ne citer que quelques - uns. Des techniques avancées de neuroimagerie, tels que la haute définition tomodensitométrie (c. -à- scan en spirale multisection CT; angiographie CT) (c. -à- IRMf, diffusion-IRM, tractographie-IRM, etc.) tomographie par émission, l&#39; imagerie par résonance magnétique fonctionnelle et morphologique, Positron (TEP), l&#39;imagerie par ultrasons à base, et d&#39;autres, ont certainement modifié notre approche générale sur la façon de diagnostiquer et guérir les patients neurologiques et psychiatriques. Néanmoins, bien que les techniques de neuroimagerie sont capables de visualiser le cerveau d&#39;une personne de son vivant, ils ne proposent pas la possibilité, pour le moment se produire, d&#39;analyser directement les structures cellulaires et sous-cellulaires hautement complexes de cellules, telles que les neurones; ou de visualiser, d&#39;une marque, et de quantifier des types spécifiques de lésions intracellulaires; ou pour indiquer avec précision leur localisation neuroanatomique ou sous-régional à circuital et sousniveaux anatomiques Circuital. Par exemple, les techniques de neuroimagerie ne peuvent pas identifier ou localiser corps de Lewy (LB) dans les neurones pigmentées de la substantia nigra (SN), une caractéristique pathologique commune associée à PD, ou les dégénérescences neurofibrillaires (NFT) dans le cortex entorhinal, une caractéristique classique de la MA et d&#39;autres pathologies cérébrales. enquêtes neuropathologiques associées à la microscopie numérique de pointe sont encore unreplaceable des corrélations clinicopathologiques détaillées et, par conséquent, pour les diagnostics définitifs. En raison des propriétés particulières anatomo-fonctionnelle du cerveau humain, et en particulier à sa localisation anatomique (qui est, à l&#39; intérieur du crâne, un système de protection naturelle qui ne permet pas l&#39;examen direct de son contenu), l&#39;introduction de techniques in vivo de neuroimagerie ont les cliniciens et les chercheurs extraordinairement aidé à trouver des réponses initiales à quelques-uns des mystères de ce tissu complexe. Cependant, il n&#39;y a aucune preuve clinique ou neuroimagiméthodologie ng qui peut remplacer l&#39;occasion unique d&#39;analyser directement les tissus du cerveau lors d&#39;une autopsie. Seule la collecte organisée, la préservation et la catégorisation des cerveaux humains peut permettre de diriger des enquêtes et systématiques des cellules neuronales et non neuronales, leurs constituants subcellulaires, intracellulaire et des lésions pathologiques extracellulaires, et tout type d&#39;anomalie dans le cerveau pour confirmer, modifier ou redéfinir les diagnostics cliniques et de découvrir de nouvelles corrélations clinicopathologiques. Une des limitations apparentes concernant l&#39;évaluation du cerveau à l&#39;autopsie a été le fait que cette procédure est une méthode transversale. Il y aura toujours un délai entre un processus continu neuropathologique (manifeste ou non clinique) et la possibilité, le cas échéant, de le définir au niveau neurohistologique. Ceci est principalement dû à l&#39;incapacité du cerveau humain à se régénérer. Il est actuellement impossible d&#39;obtenir les tissus du cerveau in vivo sans créer de pedommages rmanent. Par conséquent, il est impossible d&#39;évaluer longitudinalement et sur le plan neuropathologique le même cerveau / personnes. Toutefois, les procédures cerveau bancaires normalisées et une prise de conscience accrue pour le don du cerveau auprès du grand public pourrait grandement contribuer à la résolution des problèmes de synchronisation cerveau autopsie par augmentation constante du nombre de cas pour recueillir et analyser. De cette manière, un nombre plus adéquat de cerveaux post-mortem ont pu être obtenus pour définir des motifs constants d&#39;origine pathologique et la progression de chaque type de lésion cérébrale associée à chaque maladie du cerveau humain. Cela nécessiterait le don et la collecte d&#39;autant de cerveaux que possible de patients touchés par un trouble neuropsychiatrique, ainsi que des sujets témoins en bonne santé à tous les âges. Une méthode possible pourrait être la collecte autant de cerveaux post mortem que possible des centres médicaux généraux et spécialisés comme une routine standard. La nécessité pour les dons du cerveau a été récemment exprimépar ceux qui étudient la démence et vieillissement normal 6. La même nécessité doit être exprimée par le champ neuropsychiatrique dans son ensemble. Pour ce qui précède et pour d&#39;autres raisons, une mise à jour des procédures de coupe du cerveau en cours est nécessaire. En outre, le cerveau des procédures de coupe doit être universellement standardisée entre les différents centres de recherche de neuropathologie à travers le monde, en prenant également en compte la possibilité d&#39;utiliser des techniques biotechnologiques actuelles et futures pour mieux enquêter et, espérons-le, de comprendre définitivement, les causes et les mécanismes des maladies du cerveau dans humains. Ici, principalement à des fins de recherche, nous décrivons une méthode symétrique pour le cerveau post-mortem de coupe chez les humains. Cette procédure propose la collecte de régions plus cérébral que fait normalement et des deux hémisphères cérébraux et cérébelleux. Une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique conviendra beaucoup mieux avec nos connaissances actuelles de l&#39;hommeneuroanatomie, neurochimie, et neurophysiologie. Cette méthode permet également la possibilité d&#39;analyser les caractéristiques uniques neuropathologique du cerveau humain, tels que la spécialisation hémisphérique et la latéralisation qui sont associés à des fonctions cognitives et non cognitives supérieures typiquement ou exclusivement présente dans notre espèce. Qu&#39;il y ait des relations pathogéniques spécifiques entre l&#39;hémisphère spécialisation / latéralisation et des types spécifiques de lésions cérébrales, ou si un événement pathogénique neuropsychiatrique particulière est d&#39;abord, prévalente, ou exclusivement associés à un hémisphère spécifique et la fonction ne sont pas actuellement connus. En décrivant cette procédure de coupe du cerveau symétrique, nous nous efforçons de proposer une méthode mise à jour de la dissection du cerveau humain qui pourrait aider à mieux comprendre les conditions normales et pathologiques dans un tissu hautement spécialisé, le cerveau. Cette méthode prend également en considération les aspects de l&#39;hémisphère morpho-fonctionnelles qui existent seulement chez les humains.

<table><tbody><tr><td>Copie du consentement éclairé signé permettant l’autopsie et le don de cerveau à des fins de recherche.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antécédents cliniques détaillés du sujet, y compris une description détaillée de tout symptôme et signe neurologique et psychiatrique.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Enregistrements vidéo médicaux ou non médicaux lorsqu’ils sont disponibles (particulièrement utiles dans le domaine des troubles du mouvement). Plus proche parent' consentement requis.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Échelles de neuroimagerie, de neurophysiologie, de neuropsychiatrie et d’évaluation ou clinicométriques.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Données génétiques et d’histoire familiale. Les rapports génétiques examinent si des maladies neurogénétiques ont été diagnostiquées.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Conteneur d’histologie</td><td>ELECTRONON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64233-24</td><td></td></tr><tr><td>Cassettes d’histologie</td><td>VWR</td><td>18000-142 (orange)</td><td></td></tr><tr><td>Cassettes d’histologie</td><td>VWR</td><td>18000-132 (marine)</td><td></td></tr><tr><td>Manches de couteaux et lames jetables</td><td>ELECTRONOLOGICAL MICROSCOPY SCIENCES</td><td>62560-04</td><td></td></tr><tr><td>Lames longues</td><td>MICROSCOPIE ELECTRIQUE SCIENCES</td><td>62561-20</td><td></td></tr><tr><td>Lames jetables Manches de couteau</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>72040-08</td><td></td></tr><tr><td>Lames de scalpel</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>72049-22</td><td></td></tr><tr><td>Accu-Punch 2 mm</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>69038-02&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Contenants en polystyrène &ndash ; </td><td>Stérile ELECTRONIUM MICROSCOPY</td><td>SCIENCES 64240-12</td><td></td></tr><tr><td>Carte de dissection</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>63307-30</td><td></td></tr><tr><td>Solution de formol, tamponnée neutre, 10 %</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>solution d’hématoxyline, Gill No. 2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS280&nbsp ; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y solution, aqueuse</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT1102128&nbsp ; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>anti-bêta-amyloïde</td><td>Covance, Princeton, NJ</td><td>SIG-39220</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-tau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MN1020</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-alpha-synucléine</td><td>Abcam</td><td>ab27766</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-phospho-TDP43</td><td>Cosmo Bio Co.</td><td>TIP-PTD-P02</td> Appareil photo numérique <td>1:2000</td></tr> Machine de scellage par impulsion <tr><td></td><td>à n’importe quelle</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tête&nbsp ;</td><td>Grainger</td><td>5ZZ35</td><td></td></tr></tbody></table>

symmetric bihemispheric postmortem cerveau de coupe pour étudier en santé et états pathologiques du cerveau chez les humains

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

Neuropathologistes, parfois, se sentent intimidés par la quantité de connaissances nécessaires pour produire des diagnostics définitifs des phénomènes neuropsychiatriques complexes décrits chez les patients pour lesquels une autopsie du cerveau a été demandée. Bien que les progrès des sciences biomédicales et neuroimagerie ont révolutionné le domaine neuropsychiatrique, ils ont également généré l&#39;idée trompeuse que les autopsies du cerveau ont seulement une valeur de confirmation. Cette idée fausse a créé une réduction drastique des taux d&#39;autopsie et, par conséquent, une possibilité réduite d&#39;effectuer des enquêtes neuropathologiques plus détaillées et approfondies, qui sont nécessaires pour comprendre de nombreux aspects normaux et pathologiques encore inconnus du cerveau humain. La méthode déductive traditionnelle de corrélation entre les phénomènes neuropsychiatriques observés et correspondant localisation / caractérisation de leurs corrélats neurohistologiques possibles continue d&#39;avoir une valeur indéniable. Dans le contexte de neuropsychimaladies triques, la méthode clinicopathologique traditionnelle est toujours la meilleure méthodologie possible (et souvent le seul disponible) pour relier les caractéristiques neuropsychiatriques uniques à leurs substrats neuropathologiques correspondants, puisqu&#39;il repose précisément sur l&#39;évaluation physique directe des tissus du cerveau. L&#39;évaluation des cerveaux post mortem est basée sur le cerveau des procédures qui varient entre les différents centres de neuropathologie de coupe. boutures de cerveau sont effectuées d&#39;une manière relativement extensive et systématique sur la base des diverses éventualités cliniques et universitaires présents dans chaque établissement. Une méthodologie de coupe du cerveau bi-hémisphérique plus anatomiquement inclusive et symétrique devrait au moins être utilisé à des fins de recherche en neuropathologie humaine pour étudier de manière cohérente, en profondeur, des conditions normales et pathologiques avec les particularités du cerveau humain (c. -à- spécialisation hémisphérique et latéralisation pour particulier les fonctions). Une telle méthode offrirait une colle plus complètection des cerveaux neuropathologique bien caractérisés disponibles pour les techniques de la biotechnologie et de neuroimagerie actuels et futurs. Nous décrivons une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique pour l&#39;étude des différences hémisphériques dans les pathologies du cerveau humain et pour une utilisation avec le courant, ainsi que les futures techniques biomoléculaire / neuroimagerie.

Protocole Longueur Le temps passé pour une procédure de coupe unique symétrique bihemispheric fixe du cerveau est estimé à 1 h (hors temps passé la mise en place de la table de dissection, des outils et surfaces de coupe; étiquetage;. Etc). Le temps nécessaire à une seule alternance bi-hémisphérique symétrique gelé et le cerveau fixe la procédure de coupe est estimée à 2 h. Il peut prendre au moins entre 4-6 semaines pou...

procédures de coupe du cerveau organisés sont nécessaires pour corréler les phénomènes neuropsychiatriques spécifiques avec des diagnostics neuropathologiques définitives. boutures de cerveau sont effectuées différemment selon diverses éventualités clinico-académique. Ce protocole décrit une procédure de coupe du cerveau bihemispheric symétrique pour étudier les différences hémisphériques dans les pathologies du cerveau humain et de maximiser les techniques biomoléculaire / neuroimagerie actuelles et futures.

Symmetric Bihemispheric Postmortem cerveau de coupe pour étudier en santé et états pathologiques du cerveau chez les humains

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

L'objectif général de cette procédure est de collecter et d'analyser systématiquement une série constante de régions cérébrales disséquées symétriquement à partir des deux hémisphères du cerveau humain afin d'évaluer la gravité, le stade clinico-pathologique et la répartition hémisphérique de diverses maladies cérébrales. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neuropathologie en fournissant une collection systématiquement organisée de données neuropathologiques qualitatives et quantitatives pour des corrélations détaillées entre clinique et anatomie pathologique, ainsi qu'entre imagerie et anatomie pathologique. Le principal avantage de cette technique réside dans l'obtention de données pertinentes relatives aux processus pathologiques eux-mêmes ainsi qu'à l'aspect histofonctionnel spécialisé de chaque hémisphère cérébral.Après avoir fixé le tissu cérébral humain post-mortem conformément au protocole décrit, placer le cerveau sur une surface plane, les pôles frontaux orientés à l'opposé de l'investigateur. Orienter le cerveau de manière à permettre une visualisation complète et claire de tous les gyri et sillons corticaux de l'ensemble du cerveau. Examiner le tissu à la recherche d'anomalies méningées, d'asymétries hémisphériques macroscopiques, d'altérations tissulaires macroscopiques, de malformations congénitales, d'anomalies vasculaires ou de toute autre anomalie ou aspect inhabituel de la surface cérébrale.Avec les pôles frontaux orientés vers l'extérieur par rapport à l'investigateur et les faces superficielles des hémisphères tournées vers l'investigateur, prendre autant de photographies numériques que nécessaire pour documenter d'éventuelles anomalies macroscopiques et tenir compte de considérations cliniques, neuronales, anatomiques et post-découpe éventuelles. Prendre les photographies numériques perpendiculairement au cerveau afin de capturer l'ensemble de la surface corticale. Ensuite, à l’aide d’encre ou d’aiguilles colorées, marquer les gyri corticaux pré- et post-centraux.Ensuite, les pôles frontaux étant toujours orientés vers l'extérieur, retournez le cerveau de 180 degrés, puis examinez attentivement la base du cerveau en portant une attention particulière aux systèmes cérébrovasculaires ainsi qu'aux nerfs crâniens au niveau des entrées et sorties de la tige cérébrale. Manipulez les bulbes et les tractus olfactifs avec une attention particulière afin d'éviter toute lacération tissulaire en raison de leur extrême fragilité. Prenez des photographies numériques perpendiculairement au cerveau afin de capturer l'ensemble des surfaces corticales et de la tige cérébrale.Face à la base du cerveau et à l’aide d’un scalpel, sectionner transversalement la tige cérébrale dans la partie supérieure du pont, le plus près possible de la base du cerveau. Examiner attentivement la substance noire pour détecter toute pâleur et inspecter les autres structures voisines. À l’aide d’un appareil d’enregistrement audio, noter toute apparence inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal.Ici, le bulbe et le tractus olfactif des hémisphères gauche puis droit sont en cours de dissection. Retournez le cerveau et, à l’aide d’un couteau bien aiguisé, suivez une direction fronto-occipitale pour séparer les deux hémisphères en sectionnant le corps calleux au niveau de la scissure longitudinale médiale. Examinez chaque face de chaque hémisphère afin de détecter d’éventuelles anomalies.Après avoir pris autant de photographies que nécessaire, y compris perpendiculairement au cerveau afin de capturer toute la surface corticale, placer les deux hémisphères à plat sur leurs faces médiales, les lobes frontaux tournés vers l’extérieur par rapport à l’expérimentateur et leurs centres en contact. À l’aide d’un couteau bien aiguisé, sectionner manuellement les deux hémisphères cérébraux en partant des pôles frontaux et en progressant vers les pôles occipitaux sur toute la longueur des hémisphères, afin d’obtenir deux séries de tranches de tissu cérébral d’un centimètre d’épaisseur. Disposer les tranches de cerveau en séquence anatomique organisée et symétrique sur une surface plane blanche munie d’une règle graduée pour la prise de vue.Veillez à ce que les surfaces coronales de la tranche soient visibles pour une inspection oculaire directe et une photographie numérique. Utilisez des surfaces de coupe munies de grilles millimétriques imprimées sur les deux côtés afin de localiser de manière plus précise les structures cérébrales, leurs dimensions et d'éventuelles anomalies. Lorsque les surfaces coronales sont visibles, prenez des photographies numériques perpendiculairement pour capturer l'ensemble de la surface corticale.Prenez des notes sur tout aspect inhabituel du cerveau par rapport à un cerveau normal. Ensuite, à l’aide d’un scalpel bien aiguisé, disséquez manuellement de petits blocs rectangulaires de tissu cérébral pour chaque région cérébrale établie. Suivez le schéma proposé de prélèvement des régions cérébrales décrit dans ce tableau.Créez les codes d'identification pour étiqueter les cassettes d'histologie en générant des nombres aléatoires ou semi-aléatoires pour chaque cas, où AD désigne l'étude sur la maladie d'Alzheimer, 16 l'année de l'autopsie et 0001 un numéro d'accession progressif du spécimen. Placez chaque fragment tissulaire dans des cassettes d'histologie séparées. Prenez autant de photographies numériques que décrit précédemment du cerveau entier coupé ainsi que des cassettes d'histologie associées.Après avoir pris une série complète de photographies, prélevez des fragments de tissu de deux à cinq millimètres pour l'extraction d'ADN et l'analyse génétique. Enfin, immergez tous les cassettes histologiques contenant les blocs de tissu cérébral dans le même type de solution fixative que précédemment utilisée, puis traitez le tissu conformément au protocole décrit dans le texte. Ce tableau décrit certaines données préliminaires semi-quantitatives obtenues à l’aide d’une procédure de découpe cérébrale bihémisphérique symétrique réalisée sur une série de cerveaux humains prélevés dans la banque de cerveaux.Les données préliminaires montrent que la plupart des cerveaux témoins provenant de sujets âgés étaient en réalité positifs pour les plaques amyloïdes βA et les enchevêtrements neurofibrillaires au tau, et que les niveaux de plaques amyloïdes βA insolubles étaient plus élevés dans le cortex entorhinal gauche et l'hippocampe par comparaison avec les mêmes régions cérébrales du côté droit. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en une heure pour les cerveaux fixés et en deux heures pour les cerveaux frais, à condition qu'elle soit correctement effectuée. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se souvenir de suivre le schéma de découpe proposé et de prélever chaque région cérébrale des deux hémisphères en se basant sur une connaissance anatomique humaine précise.Après avoir suivi cette procédure, d'autres méthodes telles que l'extraction d'ADN, d'ARN ou de protéines peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires, par exemple quelles sont les niveaux d'activation d'un gène spécifique dans une région cérébrale précise, dans un hémisphère donné, dans une maladie cérébrale spécifique. À chaque diffusion, cette technique ouvrira la voie aux chercheurs dans le domaine de la neuropathologie, de la pathologie clinique et de la corrélation entre imagerie et pathologie pour explorer les aspects pathologiques liés à l'hémisphère dans diverses maladies neuropsychiatriques. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de prélever des régions anatomiques spécifiques provenant des deux hémisphères du cerveau humain afin d'évaluer la gravité de la maladie, le stade pathologique de la maladie et la distribution hémisphérique de différents processus neuropathologiques.N'oubliez pas que travailler avec le cerveau humain revient à manipuler l'histoire d'une personne dotée de circuits neuroanatomiques complexes et potentiellement affectée par diverses maladies, et que les lames, scalpels et le formol doivent être manipulés avec une extrême précaution.

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Cette vidéo montre une technique de préparation de cultures de tranches flottantes à partir du cerveau humain adulte. De fines tranches sont générées à partir d’une section de cerveau à l’aide d’un vibratome. Ces tranches sont ensuite suspendues dans un milieu de culture complété par des facteurs de croissance pour maintenir la viabilité des tissus.

Préparation de cultures en tranches flottantes à partir d’un cerveau humain adulte

La vidéo montre une procédure étape par étape pour disséquer symétriquement un cerveau humain post-mortem fixe, en préparant des blocs de tissus plus petits pour une analyse plus approfondie.

Coupe bihémisphérique symétrique du cerveau humain post-mortem

Les cultures neuronales embryonnaires primaires dissociées de l’hippocampe sont utiles pour étudier les mécanismes de signalisation impliqués dans la mort des neurones. Le sexage des embryons avant l’isolement et la dissociation de l’hippocampe permet de préparer des cultures masculines et féminines distinctes, ce qui permet au chercheur d’identifier et d’étudier la signalisation cellulaire spécifique au sexe.

Cultures neuronales stratifiées selon le sexe pour étudier les voies de mort des cellules ischémiques

À l’aide d’IRM (humaines), d’un logiciel d’imagerie 3D et d’analyses immunohistologiques, nous documentons les modifications apportées aux ventricules latéraux du cerveau. La cartographie 3D longitudinale des changements de volume du ventricule latéral et la caractérisation des changements cellulaires périventriculaires qui se produisent dans le cerveau humain en raison du vieillissement ou d’une maladie sont ensuite modélisées chez la souris.

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Ici, nous présentons un protocole pour déterminer le nombre minimum d’images qui devaient être enregistrées et moyennées pour résoudre les structures sous-corticales et tester si les couches individuelles du LGN pouvaient être résolues en l’absence de bruit physiologique.

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Explorer l’espace lointain - découvrir l’anatomie des Structures périventriculaire de révéler les ventricules latéraux du cerveau humain

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Programme complet d'autopsie pour les personnes atteintes de sclérose en plaques

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Apprenez la technique de coupe cérébrale bi-hémisphérique symétrique pour étudier les maladies neurologiques humaines. Cette méthode permet d'évaluer la sévérité et la distribution hémisphérique des pathologies cérébrales.

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