Mesure progressive neurologique invalidité dans un modèle murin de la sclérose en plaques

L’objectif global de cette procédure est d’évaluer l’atteinte neurologique progressive chez les souris atteintes de maladies démyélinisantes chroniques. Pour ce faire, nous proposons des recommandations de paramètres de test adaptés à l’étude de l’invalidité neurologique à long terme dans le modèle du virus de Theilers de la sclérose en plaques progressive, à l’aide du test Rotarod. Cette procédure fournit une base de référence pour évaluer la pertinence du modèle murin dans la démyélinisation progressive et son utilité pour tester des thérapies visant à traiter des affections neurologiques progressives telles que la sclérose en plaques.

L’avantage de ce test optimisé par rapport au système de notation visuel traditionnel est qu’il génère une variable objective pour quantifier l’effet à long terme des thérapies et des procédures expérimentales sur les fonctions motrices. Darlene Royce, technicienne du laboratoire de neuroimmunologie de Dartmouth, fera la démonstration de cette procédure. Afin d’évaluer l’équilibre, la coordination et le contrôle moteur de base, commencez le protocole d’adaptation cinq jours avant l’infection par TMEV en laissant d’abord les souris s’acclimater à la salle de test pendant au moins 30 minutes.

Pendant que les souris s’acclimatent, préréglez le Rotarod avec les paramètres d’entraînement DPI moins cinq. Ensuite, prenez une souris par la queue et placez-la sur la tige en faisant face à l’opérateur. Si la souris tombe ou saute, remettez-la dans sa voie sur le Rotarod jusqu’à ce que toutes les souris soient en position.

Après avoir chargé les quatre souris, appuyez sur le bouton Entrée pour démarrer l’expérience. Assurez-vous que les minuteries démarrent automatiquement et observez les rotations par minute affichées pour chaque voie. Ensuite, au fur et à mesure que chaque animal tombe de la tige, notez la vitesse de la tige au moment de la chute, ainsi que la durée pendant laquelle l’animal est resté sur la tige.

Une fois que toutes les souris sont tombées, utilisez un mouchoir pour retirer tout boli fécal et urine de la tige, car la présence d’urine et de matières fécales peut affecter la capacité des souris à saisir correctement la tige. Après un repos de trois minutes, donnez aux souris un deuxième, puis un troisième essai au cours duquel le temps maximum par essai unique est de 240 secondes. Administrer un total de trois essais au cours de chaque journée de test.

Enfin, remettez les souris dans leur cage d’origine. Les jours moins quatre, moins trois, moins deux et moins un PI, préréglez le Rotarod avec les paramètres de protocole d’entraînement appropriés et répétez l’expérience du Rotarod. Commencez par déplacer les cages contenant des souris SJL femelles de quatre à six semaines du rack vers un espace de travail confortable.

Utilisez des poinçons d’oreille pour marquer les souris afin de permettre une évaluation individuelle de la maladie clinique et histologique. Ensuite, prélevez 30 microlitres de stock infectant le TMEV dans du PBS dans une aiguille de seringue à insuline de calibre 29. Préparez l’appareil à gaz d’anesthésie en vous assurant de la présence de quantités adéquates d’oxygène et d’isoflurane pendant toute la durée de la procédure.

Placez l’animal dans la chambre d’induction et scellez le dessus. Après quelques minutes, retirez l’animal de la chambre et testez la souris en pinçant le coussinet du pied pour assurer une anesthésie adéquate. Ensuite, nettoyez le site d’injection avec de l’alcool isopropylique à 70 % et injectez les 30 microlitres de stock infectant TMEV dans l’hémisphère cérébral droit par injection à main levée.

Enfin, remettez la souris dans sa cage de maintien une fois qu’elle est complètement alerte et mobile. Le septième jour après l’infection, préréglez le Rotarod avec les paramètres expérimentaux appropriés et répétez l’exercice d’entraînement complet avec les paramètres de protocole expérimental appropriés. Après le troisième essai de chaque jour, pesez chaque souris et notez le poids corporel sur la fiche technique.

Testez les souris deux fois par semaine pendant les six semaines suivantes de la même manière. Après six semaines, testez les souris une fois par semaine avec le même protocole expérimental pendant une moyenne de 150 jours expérimentaux. Ensuite, analysez les données brutes et exprimez-les sous forme d’indice fonctionnel neurologique, ou NFI.

Pour déterminer la valeur NFI individuelle, calculez le seuil de performance de base de chaque souris comme la moyenne de toutes les durées d’exécution de 15 à 45 jours après l’infection. Afin de permettre l’évaluation des performances motrices à la suite d’une démyélinisation progressive et d’exclure tout déficit contributif dû à une encéphalite précoce. Ensuite, calculez la valeur NFI comme la moyenne des trois temps d’exécution moyens les plus récents divisée par le seuil de performance de référence de la souris.

Enfin, calculez un IFN ajusté en divisant la valeur NFI par la valeur NFI moyenne obtenue par le groupe placebo traité ce jour-là. Cette figure montre que les souris infectées par le TMEV présentent des déficits neurologiques significativement accrus au fil du temps par rapport aux souris témoins. L’infection chronique par deux souches différentes de TMEV a affecté négativement le temps de fonctionnement des souris.

Les deux groupes de souris infectées par TMEV avaient des valeurs NFI significativement inférieures à celles des souris factices. De plus, il n’y avait pas de différence entre la progression de l’invalidité chez les souris infectées par la souche BeAn et celles infectées par la souche DA à tous les points temporels. Suivant cette procédure, les méthodes traditionnelles de notation visuelle, comme le test du réflexe de redressement, peuvent être effectuées afin d’évaluer rapidement la santé générale des souris.

Après sa mise au point, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la sclérose en plaques et des maladies neurodégénératives pour tester l’efficacité des thérapies et d’autres interventions visant à retarder l’invalidité progressive. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’évaluer l’invalidité progressive à long terme chez la souris. Cette procédure est non seulement utile pour détecter l’invalidité neurologique progressive dans le modèle du virus Theiler, mais aussi pour découvrir des déficiences dans d’autres modèles murins de maladies neurodégénératives.