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Immunology and Infection
Fluorescence-tri cellulaire activé pour la purification de cellules dendritiques plasmacytoïdes d...
Fluorescence-tri cellulaire activé pour la purification de cellules dendritiques plasmacytoïdes d...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescence-tri cellulaire activé pour la purification de cellules dendritiques plasmacytoïdes de la moelle osseuse de souris

Full Text
13,057 Views
08:01 min
November 4, 2016

DOI: 10.3791/54641-v

Xiaofeng Liao1, Melissa Makris2, Xin M. Luo1

1Department of Biomedical Sciences and Pathobiology, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine,Virginia Polytechnic Institute and State University, 2Flow Cytometry Laboratory, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine,Virginia Polytechnic Institute and State University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for isolating plasmacytoid dendritic cells (pDC) from the bone marrow of lupus-prone mice using fluorescence-activated cell sorting. The method aims to achieve high purity for subsequent functional studies of pDC.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Cell Biology
  • Autoimmunity

Background

  • Plasmacytoid dendritic cells are crucial for immune responses.
  • They produce interferon alpha, especially during lupus progression.
  • High purity isolation is essential for accurate functional analysis.
  • Fluorescence-activated cell sorting offers advantages over traditional methods.

Purpose of Study

  • To isolate pDC from lupus-prone mice.
  • To study the functional characteristics of pDC.
  • To enhance understanding of immune cell behavior in lupus.

Methods Used

  • Harvesting bone marrow from lupus-prone mice.
  • Using fluorescence-activated cell sorting for isolation.
  • Preparing complete medium for cell processing.
  • Cracking bones to release cells for sorting.

Main Results

  • Successful isolation of pDC with high purity.
  • Enhanced understanding of pDC function in lupus.
  • Demonstrated advantages of fluorescence-activated cell sorting.
  • Provided a reliable protocol for future studies.

Conclusions

  • The protocol effectively isolates pDC for functional studies.
  • Findings contribute to the understanding of lupus pathology.
  • Future research can build on this methodology.

Frequently Asked Questions

What are plasmacytoid dendritic cells?
Plasmacytoid dendritic cells are a type of immune cell that produces interferon alpha and plays a role in antiviral responses and autoimmunity.
Why is high purity important in cell isolation?
High purity ensures that the isolated cells are representative of the specific population being studied, which is crucial for accurate functional analysis.
What is the advantage of fluorescence-activated cell sorting?
Fluorescence-activated cell sorting allows for the enrichment of target cell populations with higher purity compared to magnetic bead sorting methods.
How does lupus affect plasmacytoid dendritic cells?
In lupus, plasmacytoid dendritic cells can become dysregulated, leading to excessive production of interferon alpha, which contributes to the disease pathology.
What is the significance of studying pDC in lupus?
Studying pDC in lupus helps to understand their role in disease progression and may lead to new therapeutic strategies.

Nous rapportons un protocole utilisant les cellules activées par fluorescence de tri pour isoler les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) avec une grande pureté à partir de la moelle osseuse de souris lupus sujettes à des études fonctionnelles de pDC.

L’objectif global de cette expérience est d’isoler des cellules dendritiques plasmacytoïdes, ou PDC, d’une grande pureté dans la moelle osseuse de souris sujettes au lupus pour l’étude de leur fonction. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés liées aux caractéristiques d’une population de cellules immunitaires particulière, telles que la production d’interféron alpha PDC au cours de la phase tardive du développement du lupus. Le principal avantage de cette technique est qu’une à plusieurs populations cibles peuvent être enrichies à une pureté supérieure à celle du tri par billes magnétiques.

Après la récolte, transférez les os des membres postérieurs et quatre millilitres de milieu complet dans un mortier. Ajoutez six millilitres de milieu complet frais pour porter le volume total à 10 millilitres. Et cassez doucement les os avec un pilon.

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Immunologie numéro 117 FACS souris la moelle osseuse les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) IFNa le lupus

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