Name: Une approche efficace et Facile pour la production de micelles réversible Disulfure réticulés (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Apprenez à synthétiser des micelles réticulées par ponts disulfure chargées en médicaments pour la libération ciblée dans les tumeurs. Cette méthode par oxydation au peroxyde d'hydrogène permet une production à grande échelle.

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Les auteurs remercient Mme Alisha Knudson pour l’aide rédactionnelle. Ils tiennent également à souligner le soutien financier du NIH/NCI (3R01CA115483, à K.S.L.), du DoD PRMRP Award (W81XWH-13-1-0490, à K.S.L.), du NIH/NCI (1R01CA199668, à Y.L.) et du NIH/NICHD (1R01HD086195, à Y.L.).

déclaration éthique: Femme souris nude athymiques (souche Nu / Nu), 6-8 semaines, ont été achetés et conservés dans des conditions exemptes d&#39;agents pathogènes selon les directives AAALAC et ont été autorisés à s&#39;acclimater pendant au moins 4 jours avant toute expérience. Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives institutionnelles et conformément au protocole n ° 07-13119 et n ° 09-15584, approuvé par l&#39;utilisation des animaux et le Comité consultatif d&#39;administration de soins à l&#39;Université de Californie, Davis. 1. Synthèse de TD PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 <ol><li> Dans un ballon à fond rond, dissoudre MeO-PEG 5K NH2 (2 g, 0,4 mmol) dans 10-20 ml de diméthylformamide anhydre (DMF) et de froid sur la glace. </li><li> Dans un récipient en verre, dissoudre 3 équiv. de 1-hydroxy-6-chloro-benzotriazole (HOBt), 3 équiv. de N, N &#39;-diisopropylcarbodiimide (DIC) et 3 équiv. de (Fmoc) 2 Lys-OH anhydre DMF (10-15 ml). Agiter pendant 15-20 min sur une plaque d&#39;agitation magnétique. </li><li> Ajouter le mélange dans le ballon de réaction contenant le MeO-PEG 5K -NH 2. Retirer le bain de glace et on agite le mélange réactionnel pendant une nuit à température ambiante. </li><li> Confirmer l&#39;achèvement de la réaction par chromatographie sur couche mince (CCM) 16 et le test de Kaiser 17 (une couleur jaune indique l&#39;absence de NH2 libre). Précipiter le produit polymère 1 (MeO-PEG 5 K Lys (Fmoc NH-2)) par addition d&#39; environ 200 ml d&#39;éther refroidi à la glace dans le ballon de réaction. Séparer le polymère précipité par centrifugation (6 min à 6000 x g et 4 ° C). <ol><li> Pour effectuer TLC, repérer les échantillons sur des plaques de CCM de gel de silice revêtues. En utilisant du dichlorométhane / méthanol (9: 1) comme phase mobile. Observer les taches sous une lampe UV après avoir développé les plaques de CCM. On peut également utiliser ninhydrine réactif de coloration pour visualiser les taches amine sur une plaque chauffante. </li><li> Pour KaiLe test de ser, placez un peu de l&#39;échantillon dans le tube de verre contenant le réactif de Kaiser. Faire chauffer à 100 ° C pendant 5 minutes et recherchez le changement de couleur (si la couleur de la solution reste jaune, puis la réaction est terminée). </li></ol></li><li> Re-dissoudre le produit dans du DMF anhydre (10-20 ml) et répéter la précipitation et centrifugation (voir étape 1.4). </li><li> Répétez l&#39;étape 1.5, puis laver le précipité de polymère à trois reprises avec de l&#39;éther glacé. </li><li> Transférer le précipité de polymère 1 à un ballon de réaction propre et raccorder le ballon à une source de vide élevé pour éliminer l&#39;éther résiduel. </li><li> Préparer et ajouter environ 20-30 ml de 20% (v / v) 4-méthylpipéridine dans le DMF en polymère intermédiaire 1. Remuer jusqu&#39;à dissolution complète. Exécutez la réaction pendant 3 heures. </li><li> Effectuer TLC 16 et le test de Kaiser (une couleur bleue confirme la présence de NH 2 libre) 17 (voir étape 1.4) pour confirmer la achèvementsn de la réaction. Si la réaction est terminée, passez à la précipitation de l&#39; éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étapes 1,4-1,6). </li><li> Sécher le produit polymère 2 (MeO-PEG 5K - Lys (NH 2) 2) sous vide. </li><li> Effectuer un tour de plus de (Fmoc) 2 Lys-OH-accouplement sur l&#39; intermédiaire 2 (étapes 1,1-1,7) pour générer des produits 3 (MeO-PEG 5K Lys (Lys (NH-Fmoc) 2) 2). De-protéger (étapes 01.08 à 01.10) les groupes Fmoc (4, Meo-PEG 5K Lys (Lys (NH 2) 2) 2) et deux (étapes 1,1-1,7) le (Fmoc) Lys (Boc) -OH à générer une polylysine dendritique de troisième génération (5, MeO-PEG-Lys - Lys 5k 2 - ((Fmoc) Lys (Boc)) 4) terminé par quatre groupes Boc et Fmoc sur une extrémité de la chaîne de PEG. </li><li> Transférer le polymère intermédiaire obtenu 5 dans un ballon de réaction. dans la mesureballon de réaction eparate, préparer 1: 1 (v / v) d&#39;acide trifluoroacétique (TFA) dans du dichlorométhane (DCM). Ajouter 15-20 ml d&#39;un mélange 1: 1 TFA / DCM (volume / volume) du polymère intermédiaire 5. On agite le mélange jusqu&#39;à ce que le polymère soit complètement dissous. Agiter pendant une 3 heures supplémentaires. </li><li> Effectuer TLC 16 et le test de Kaiser (une couleur bleue confirme la présence de NH 2 libre) 17 (voir l&#39; étape 1.4) pour confirmer l&#39;achèvement de la réaction. Si la réaction est terminée, on évapore le mélange de polymère-dans-TFA / DCM avec de l&#39;air jusqu&#39;à l&#39;obtention d&#39;une solution visqueuse. Procéder à la précipitation de l&#39; éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étapes 1,4-1,6). Sécher le produit polymère 6 (MeO-PEG 5k Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (NH 2)) 4) sous vide. </li><li> Polymère intermédiaire 6 dans un ballon de réaction de transfert. Utilisez environ 40 ml de DMF anhydre contenant 8 équiv. de N, N -diisopropylethylamine (DIEA) pour dissoudre le polymère intermédiaire 6. Dans un récipient en verre, dissoudre 12 équiv. de HOBt, 12 équiv. de DIC, et 12 équiv. de (Fmoc), Cys (Trt) -OH dans 20 à 25 ml de DMF anhydre. Agiter pendant 10-15 min, puis ajouter le mélange réactionnel dans le ballon de réaction contenant 6. Exécutez la réaction pendant la nuit. </li><li> Confirmer l&#39;achèvement de la réaction avec TLC 16 et le test de Kaiser (voir l&#39; étape 1.4; une couleur jaune indique l&#39;absence de NH2 libre) 17. Si la réaction est terminée, passez à la précipitation de l&#39; éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étape 1,4-1,6), pour isoler le produit 7 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys - ((Fmoc) Cys (Trt))) 4. </li><li> Effectuer Fmoc de protection sur 7, comme indiqué à l&#39; étape 1.8, pour obtenir un produit 8 (PEG 5K Lys-Lys 2 - (Lys (NH 2) - (Cys (NH 2) (Trt))) 4). Couple (Fmoc) -PEG 2 -Suc-OH (linker &quot;Ebes&quot;, 24 équiv.) Sur un couplage polymère intermédiaire en utilisant la procédure décrite ci - dessus pour HOBt / DIC médiation pour obtenir l&#39; intermédiaire 9 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt) ) 4 (Ebes (NH-Fmoc)) 8). </li><li> Effectuer un tour de plus de Fmoc de protection (étapes 1,6-1,8) pour obtenir l&#39; intermédiaire 10 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 (Ebes (NH 2)) 8). </li><li> Transférer le polymère intermédiaire 10 dans un ballon de réaction et ajouter du DMF anhydre (environ 30 à 40 ml) pour le dissoudre. Dans un autre ballon de réaction, dissoudre 24 équiv. de CAOSu (préparé selon le mode opératoire publié antérieurement) dans du DMF anhydre (20-30 ml) 18. Ajouter 48 équiv. de N, N - diisopropyléthylamine et laisser agiter pendant 10-15 min. Transférer le contenu dans le flacon de réaction contenant 10 et laisser la réaction run overnight. </li><li> Confirmez l&#39;achèvement de la réaction avec TLC 16 et le test de Kaiser (voir l&#39; étape 1.4; une couleur jaune indique l&#39;absence de NH2 libre) 17. Si la réaction est terminée, passez à la précipitation de l&#39; éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étapes 1,4-1,6) pour isoler le produit 11 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 -Ebes 8 -CA 8). Dialyser dans de l&#39;eau désionisée et on lyophilise l&#39;échantillon pour donner une poudre blanche. </li><li> Placer le polymère intermédiaire 11 dans un ballon de réaction. Préparer et ajouter 20 ml de TFA / 1,2-éthanedithiol (EDT) / triéthylsilane (SIT) / H 2 O (94 / 2,5 / 1 / 2,5, v / v) dans la solution de polymère. Incorporer le mélange jusqu&#39;à dissolution complète. Exécutez la réaction pendant 4 heures. Confirmer l&#39;achèvement de la réaction par CCM 16. </li><li> Sous la hotte, souffler de l&#39; air dans le polymère-TFA / EDT / TIS / H 2mélange O jusqu&#39;à ce que la solution devient visqueuse. Procéder à la précipitation de l&#39; éther, comme indiqué pour le produit 1 (étapes 1.4 à 1.6), pour isoler le produit final, 12 (PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8). Dissoudre dans de l&#39;acétonitrile et lyophilisé pour donner une poudre blanche. </li></ol> 2. Préparation de micelles PTX-chargés <ol><li> Préparer un PTX-chargé PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 micelles en utilisant la méthode d&#39;évaporation standard. <ol><li> Dissoudre 20 mg de DT avec une quantité différente de PTX (1-9 mg) dans 1 ml de chloroforme (CHCI3). Éliminer le solvant en utilisant un évaporateur rotatif pour obtenir un film de polymère homogène et sec. Reconstituer le film avec 1 ml de tampon phosphate salin (PBS) par vortex, puis par traitement aux ultrasons pendant 30 min à 40 kHz, le cas échéant, pour permettre la formation de micelles chargées de médicament. </li><li> Ajouter 6 ul de 3% (p / p) H 2 O 2 (1 équiv. De free les groupes thiol) pour oxyder les groupes thiol sur le TD. Utilisez la solution micellaire pour une caractérisation plus poussée une fois que le niveau des groupes thiol libres reste à des valeurs constantes faibles, comme indiqué par le test de Ellman 19. </li><li> On filtre la solution avec un filtre de 0,22 pm pour stériliser l&#39;échantillon. Analyser la quantité de médicament chargée dans les micelles d&#39;un 20 système HPLC après la libération des médicaments à partir des micelles en y ajoutant 9 fois l&#39; acétonitrile et en effectuant 10 minutes de sonication. Utiliser une colonne HPLC C18 avec un mélange acétonitrile / eau comme phase mobile. </li><li> Calculer la charge de médicament en fonction de la courbe d&#39;étalonnage entre les valeurs de surface par HPLC et les concentrations du médicament standard 11. NOTE: L&#39;efficacité de chargement est défini comme le rapport du médicament chargé dans les micelles de la teneur initiale en médicament. </li></ol></li></ol> 3. Caractérisations de micelles <ol><li> Mesurer la répartition de la taille et de taille micelles avec une diffusion de lumière dynamique (DLS) instrument 29. Effectuer les mesures à la température ambiante et de maintenir la concentration de micelles à 1 mg / ml. REMARQUE: Pour effectuer l&#39;analyse granulométrique, utilisez PBS comme vide, puis enregistrer la taille des particules pour les échantillons réels. Prenez les lectures en triple pour les échantillons, puis la moyenne des lectures. </li><li> Utilisez les spectres de fluorescence pour mesurer la concentration micellaire critique (CMC) de PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 avant et après réticulation avec pyrène comme sonde fluorescente hydrophobe, comme décrit précédemment 13,21. NOTE: En règle générale, la concentration micellaire est comprise entre 5 × 10 -7 à 5 × 10 -4 M. </li></ol> 4. Stabilité des micelles en SDS avec ou sans agents réducteurs <ol><li> Préparer des solutions mères de dodécylsulfate de sodium (SDS) à une solution (7,5 mg / ml) et de disulfure de micelles réticulées (1,5 mg / ml) dans du PBS. Ensuite, uchanter les solutions mères, faire un mélange de solution dans laquelle la concentration finale SDS est à 2,5 mg / ml et la concentration de micelles est à 1,0 mg / ml. </li><li> Mesurer la distribution de taille et la taille (comme indiqué à l&#39;étape 3.1), des solutions micellaires, à des intervalles de temps prédéterminés, avec ou sans la présence de glutathion 10 mM (GSH). </li></ol> 5. hémolyse Assay <ol><li> Évaluer le potentiel hémolytique de micelles PTX-chargé, non-réticulés (PTX-MR) préparé selon une procédure publiée précédemment 11 et micelles réticulées PTX-chargés (PTX-RDR) en utilisant du sang frais citraté de souris nues recueillies à partir de la queue voile. <ol><li> Collecter des globules rouges par centrifugation des échantillons de sang (1,0 ml) à 1000 g pendant 10 min, les laver trois fois avec du PBS, puis remettre en suspension les culots cellulaires avec du PBS jusqu&#39;à une concentration finale de 2%. </li></ol></li><li> Mélanger 200 pi de suspension d&#39;érythrocytes avec des concentrations différentes (0,2 et 1,0mg / ml) de PTX-MR et PTX-DCMs, respectivement, et incuber pendant 4 heures à 37 ° C dans un agitateur incubateur. </li><li> Centrifuger les mélanges micelles-érythrocytaires à 3000 xg pendant 5 min. Transférer 100 pl de surnageant de tous les échantillons dans une plaque à 96 puits. Mesurer l&#39;absorbance de l&#39;hémoglobine libre dans le surnageant à 540 nm en utilisant un lecteur de micro-plaque. NOTE: Les globules rouges incubées avec le Triton-100 (2%) et du PBS doivent être utilisées en tant que témoins positifs et négatifs, respectivement. Le pour cent de l&#39;hémolyse des globules rouges est calculée avec la formule suivante: RBC hémolyse = (OD échantillon - OD contrôle négatif) / (contrôle positif OD - témoin négatif OD) x 100%. </li></ol>

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<li>Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+peroxide-mediated+oxidative+refolding+of+a+protein+at+physiological+pH+and+implications+for+oxidative+folding+in+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid.+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum.</a> Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).</li>
<li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicines%3A+closing+the+translational+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicines: closing the translational gap.</a> Lancet. 384, 2175-2176 (2014).</li>
<li>Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf">http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf</a> (2006).</li>
</ol>

Y. Li et K.S.L. sont les inventeurs d’un brevet en instance sur des systèmes micellaires réticulés de manière réversible (demande de brevet américain 61/485,774). K.S.L. est le scientifique fondateur de LamnoTherapeutics Inc., qui prévoit de développer les nanothérapies décrites dans le manuscrit. Les autres auteurs ne déclarent aucun intérêt financier concurrent.

Plusieurs nanoparticules ont été étudiés pour leur utilisation potentielle dans l&#39;administration de médicaments. doxorubicine liposomale et le paclitaxel (PTX) chargé en sérumalbumine nano-agrégats humains sont parmi les nanotherapeutics approuvés par la FDA pour le traitement du cancer. Cependant, bien que cliniquement efficace, ces deux nanotherapeutics sont relativement &quot;grande&quot; taille, et ils ont tendance à s&#39;accumuler dans le foie et les poumons. micelles polymériques avec des tailles de particule...

La nanotechnologie est un domaine en pleine émergence qui a bénéficié d&#39; un certain nombre de domaines biomédicaux 1. Nanoparticules offrent des possibilités pour la conception et le réglage des propriétés qui ne sont pas réalisables avec d&#39;autres types de traitements conventionnels. Nano-transporteurs améliorent la stabilité des médicaments contre la biodégradation, prolonger le temps de circulation de la drogue, à surmonter les problèmes de solubilité médicaments, et peuvent être ajustés pour la livraison ciblée de médicaments et pour les agents de co-distribution imagerie 1,2. systèmes de distribution à base de nanoparticules sont prometteurs dans l&#39;imagerie et le traitement du cancer. Vasculatures tumorales sont leaky aux macromolécules et peuvent conduire à une accumulation préférentielle de circulation des nanoparticules sur les sites tumoraux par la perméabilité accrue et la rétention (EPR) Effet 3. Parmi les différents nano-supports (par exemple, des liposomes, des hydrogels, des polymères et des micelles) qui sont activement poursuivies comme supports pour des médicaments anticancéreux, des micelles polymères ont acquis une grande popularité au cours ee dernière décennie 4,5. Les micelles polymériques sont un système thermodynamique qui, lors de l&#39;administration par voie intraveineuse, peut éventuellement être diluée au-dessous de la concentration micellaire critique (CMC), conduisant à leur dissociation en unimères. stratégies de réticulation ont été utilisées pour réduire au minimum la dissociation micellaire en unimères. Cependant, les micelles excessivement stabilisées peuvent empêcher de libérer le médicament aux sites cibles, réduisant ainsi l&#39;efficacité thérapeutique globale. Plusieurs approches chimiques ont été explorées pour rendre la réticulation dégradable en réponse à redox ou à des stimuli externes, tels que des liaisons disulfures réductibles 6,7 et pH-clivable 8 ou ester hydrolysable obligations 9,10. Nous avons précédemment rapporté la conception et la synthèse de nanoparticules micellaires , comprenant de l&#39; acide cholique dendritique (CA) et des séquences linéaires de polyéthylène glycol (PEG) , les copolymères appelés telodendrimers (TD) 15/11 </sup&gt;. Ces TDs sont représentés comme PEG nK -Cay (où n = poids moléculaire en kilodaltons (K), y = nombre d&#39;acide cholique (CA) unités). Ils sont caractérisés par leur petite taille, longue durée de conservation, et une grande efficacité dans les médicaments encapsulant tels que le paclitaxel (PTX) et doxorubicine (DOX) dans le noyau hydrophobe. Les éléments constitutifs de la TD, tels que le PEG, la lysine, et CA, sont biocompatibles, et la présence d&#39;une couronne de PEG peut conférer un caractère nanoparticulaire &quot;furtif&quot;, ce qui empêche l&#39;absorption non spécifique des nanoparticules micellaires par le système réticulo-endothélial. polymères linéaires-dendritique thiolées peuvent facilement être générés par l&#39;introduction de cysteines dans le squelette du oligo-lysine dendritique de notre TDs standard. Cet article présente un protocole facile pour la production d&#39;un système de délivrance de médicament micellaire réversiblement réticulé par introduction reticulations disulfure dans le noyau hydrophobe de Tou (figure 1).

<table><tbody><tr><td>MeO-PEG5K-NH2</td><td>Rapp Polymere</td><td>125000-2</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Fmoc)-OH</td><td>Aaptec</td><td>AFK107</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-OH</td><td>Anaspec</td><td>AS-20132</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Aapptec</td><td>AAC105</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylformamide</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td></td></tr><tr><td>Éther éthylique</td><td>Fisher Scientific</td><td>E134-20</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropylethylamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125806</td><td></td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td>Corrosif, manipuler avec précaution</td></tr><tr><td>4-méthyl pipéridine</td><td>Alfa-Aesar</td><td>L-02709</td><td></td></tr><tr><td>Ebes linker</td><td>Anaspec</td><td>AS-61924</td><td></td></tr><tr><td>Acide cholique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1129</td><td></td></tr><tr><td>1,2-Ethanedithiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>02390</td><td>Poignée à l’intérieur de la hotte. Gants d’eau de Javel après utilisation.</td></tr><tr><td>Triisopropylsilane</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>Chloroforme (anhydre)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Solution de peroxyde d’hydrogène 30 %</td><td>Aaron Industries</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HoBt-Cl</td><td>Aaptec</td><td>CXZ096</td><td></td></tr><tr><td>DIC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125407</td><td></td></tr><tr><td>Souris nues athymiques femelles (souche Nu/Nu), 6&ndash ; 8 semaines</td><td>Harlan (Livermore, CA)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

une approche efficace et facile pour la production de micelles réversible disulfure réticulés

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

Nanomédecine est une nouvelle forme de thérapie qui exploite les propriétés uniques des particules qui sont nanomètres échelle pour application biomédicale. Améliorer l&#39;administration de médicaments pour maximiser les résultats thérapeutiques et de réduire les effets secondaires associés au médicament sont quelques-unes des pierres angulaires de la nanomédecine actuelle. Nanoparticules en particulier, ont trouvé une large application dans le traitement du cancer. Nanoparticules qui offrent un haut degré de flexibilité dans la conception, l&#39;application et la production sur la base du microenvironnement de la tumeur devraient être plus efficaces avec la traduction rapide dans la pratique clinique. Le micellaire nano-support polymère est un choix populaire pour les applications de distribution de médicaments. Dans cet article, nous décrivons un protocole simple et efficace pour la synthèse, des micelles réticulées disulfure drogue chargé basé sur l&#39;auto-assemblage d&#39;un copolymère bien défini amphiphile linéaire-dendritique (telodendrimer, TD). TD est constituée de polyéthylène glycol (PEG) comme segment hydrophile et un groupe d&#39;acide cholique thiolé comme la fraction hydrophobe attachée par étapes de formation de noyau à un PEG de terminaison amine en utilisant la chimie des peptides à base de solutions. Les médicaments chimiothérapeutiques, tels que le paclitaxel (PTX), peuvent être chargés à l&#39;aide d&#39;un procédé d&#39;évaporation de solvant standard. Le O 2 oxydation médiée a déjà été utilisé pour former disulfures liaisons transversales intra-micellaires de groupes thiol libres sur le TDs. Cependant, la réaction a été lente et pas réalisable pour la production à grande échelle. Récemment, une méthode d&#39;oxydation de l&#39; H 2 O 2 médiée a été explorée comme une approche plus réaliste et efficace, et il était 96 fois plus rapide que la méthode précédemment. En utilisant cette approche, 50 g de PTX-chargés, les nanoparticules réticulées disulfure ont été produits avec succès avec la distribution granulométrique étroite et une efficacité élevée de chargement de drogue. La stabilité de la solution micellaire obtenue est analysée en utilisant des conditions perturbatrices telles que la co-incubation avecvec un détergent dodécylsulfate de sodium, avec ou sans agent réducteur. Les micelles, réticulés disulfure chargés en médicament ont démontré une activité hémolytique inférieure par rapport à leurs homologues non réticulées.

Préparation et caractérisation des drogues chargé, micelles Disulfure réticulés Amphiphiles polymères PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 est un dendrimère susceptible de former un système micellaire disulfure réticulé pour la délivrance de médicaments anticancéreux. Structurellement, il est défini comme un oligomère dendritique d'acide cholique (domaine hydrophobe) reliés à une extrémité de la molécule liné...

Pour administrer des médicaments anticancéreux aux sites tumoraux avec une spécificité élevée et des effets secondaires réduits, de nouvelles méthodes basées sur les nanoparticules sont nécessaires. Ici, nous décrivons des micelles réticulées de disulfure qui peuvent être facilement préparées par oxydation médiée par le peroxyde d’hydrogène et sont capables de se dissocier efficacement dans un environnement tumoral réducteur pour libérer des charges utiles.

Une approche efficace et Facile pour la production de micelles réversible Disulfure réticulés

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

L’objectif global de cette procédure est de fournir un protocole simple et efficace pour synthétiser des micelles réticulées de disulfure chargées de médicaments pour l’administration ciblée de médicaments. Cette méthode peut aider à répondre à des questions dans le domaine de la nanomédecine. Par exemple, comment produire efficacement des nano-formulations stables.Le principal avantage de cette technique est qu’elle nous permet de synthétiser facilement des micelles réticulées de disulfure à grande échelle, ce qui est extrêmement souhaitable pour les études cliniques chez les patients. Pour commencer cette procédure, ajoutez deux grammes de monoamine de polyéthylène glycol à terminaison monométhyle dans une fiole à fond rond. Ajoutez dix millilitres de DMF anhydre pour le dissoudre.Refroidir sur glace. Ajouter trois équivalents d’hydroxybenzotriazole, trois équivalents de DIC et trois équivalents de lysine protégée par le di-eth-moc dans une fiole à fond rond. Ensuite, ajoutez dix millilitres de DMF anhydre.Remuez le mélange pendant 20 minutes sur une plaque d’agitation magnétique. Ajouter ensuite le mélange dans la fiole à fond rond contenant du polyéthylène glycol à terminaison

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Procédé pour analyser l'accessibilité au solvant du groupe thiol de résidus cystéine...

L&#39;analyse de l&#39;accessibilité au solvant des résidus de cystéine sur<em&gt; Cueilleur rayado fino virus</em&gt; Virus-like particles produits dans<em&gt; Nicotiana benthamiana</em&gt; Plantes et réticulation des peptides à VLP

Les études biophysiques et biochimiques des interactions entre les domaines de la protéine membranaire embarqués face à de nombreux défis techniques, dont le premier est l'obtention de matériel d'étude approprié. Cet article décrit un protocole de production et de purification du disulfure stabilisées complexes peptide transmembranaire qui sont appropriés pour l'analyse structurale par une solution de résonance magnétique nucléaire (RMN) et d'autres applications analytiques.

La production de disulfure stabilisées complexes peptide transmembranaire pour des études structurales

Une technique simple, robuste et évolutive pour fonctionnaliser et s'auto-assembler macroscopiques monocouche films de nanoparticules sur des substrats ligand libre-modèle est décrit dans le présent protocole.

Une technique pour fonctionnaliser et auto-assemblage de nanoparticules macroscopiques-ligand monocouches Films sur substrats libre-modèle

Cet article décrit un procédé de production de nanoparticules polymères auto-assemblées en utilisant la polymérisation par dispersion médiée par la lumière visible. L’utilisation de la lumière visible à faible énergie pour contrôler la polymérisation permet la formation reproductible de micelles auto-assemblées ressemblant à des vers à haute teneur en solides.

Synthèse Facile de micelles Worm-like par lumière visible Mediated Dispersion Polymérisation En utilisant photoredox Catalyst

Le présent ouvrage décrit une méthode pour fabriquer des nanocristaux micellaire, une nouvelle classe majeure de nanobiomaterials. Cette méthode combine electrospray descendante, ascendante, auto-assemblage et le contrôle de la structure à base de solvant. Le procédé de fabrication est en grande partie continue, peut produire des produits de qualité et possède un moyen peu coûteux de contrôle de la structure.

Fabrication de nanocristaux micellaire sphériques et en forme de ver en combinant Electrospray, auto-assemblage et le contrôle de la Structure à base de solvant

Nous présentons ici deux protocoles ultrarapides pour la reconstitution des protéines membranaires dans des protéoliposomes coniques et la fusion de ces protéoliposomes avec des bicouches lipidiques cible pour la livraison sans tensioactifs de ces protéines de membrane dans la bicouche traduisaient. La combinaison de ces approches permet un assemblage rapide et facile à contrôler des systèmes complexes membranaires multi-composants.

Sans tensioactifs ultrarapide Reconstitution des protéines membranaires dans les bicouches lipidiques à l’aide de fusogène complémentaire chargée protéoliposomes.

Nous présentons un protocole pour la construction des thioéthers/vinyle sulfure-tethered hélicoïdales peptides utilisant photoinduit thiol-ene/thiol-yne hydrothiolation.

Construction de Thiol-ene/yne hélicoïdale Peptides Via photoinduit thioéther/sulfure de vinyle-attaché Hydrothiolation

Ici, nous présentons une synthèse one-pot, sans transition-métal des thiols et thioesters d’halogénures aromatiques et thiométhylate de sodium, suivi par l’élaboration de monocristaux d’un réseau de métal-dithiolène à l’aide d’espèces de thiol généré in situ de thioester plus stable et plus docile.

Synthèse d’un bloc de construction de Thiol pour la cristallisation d’un cadre de métal Gyroidal soufre semiconductrices

Les liaisons disulfures ont longtemps été connues pour stabiliser la structure de nombreuses protéines. Une méthode simple pour analyser les complexes multimères stabilisés par ces liaisons est une analyse SDS-PAGE non réductrice. Ici, cette méthode est illustrée par l’analyse de l’isoforme nucléaire de dUTPase de la lignée cellulaire ostéosarcome osseuse humaine U-2 OS.

Combinaison de l’analyse SDS-PAGE non réductrice et de la réticulation chimique pour détecter les complexes multimères stabilisés par des liaisons disulfures dans les cellules de mammifères dans la culture

Le protocole présente les paramètres optimisés pour la préparation des liposomes thermosensibles à l’aide du dispositif microfluidique micromélangeur d’os de hareng décalé. Cela permet également la co-encapsulation de la doxorubicine et de l’indocyanine vert dans les liposomes et la libération photothermique déclenchée de doxorubicine pour la libération contrôlée / déclenchée de médicaments.

Production microfluidique de liposomes sensibles à la température contenant des lysolipides

Apprenez à synthétiser des micelles réticulées par ponts disulfure chargées en médicaments pour la libération ciblée dans les tumeurs. Cette méthode par oxydation au peroxyde d'hydrogène permet une production à grande échelle.

Une approche efficace et Facile pour la production de micelles réversible Disulfure réticulés

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