Un modèle de Cardiac Remodeling Grâce à constriction de l'aorte abdominale chez les rats

L’objectif global de l’intervention chirurgicale est de fournir une plate-forme simple pour étudier l’hypertrophie, le remodelage et le dysfonctionnement du myocarde. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine cardiovasculaire telles que la signalisation impliquant l’hypertrophie cardiovasculaire et le remodelage. Ainsi que la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques dans les cardiopathies hypertensives.

Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une méthode peu invasive qui nécessite des techniques chirurgicales très simples et pourtant les résultats sont très reproductibles. Les implications de ces techniques s’étendent à notre traitement des cardiopathies hypertensives. Étant donné que la constriction de l’aorte abdominale induit une surcharge de pression et conduit finalement à une hypertrophie cardiaque, un remodelage et une insuffisance cardiaque.

Pour commencer, préparez une aiguille de seringue de calibre 22 en utilisant une pierre à aiguiser pour émousser la pointe. Ensuite, à l’aide d’une pince, plissez l’aiguille à angle droit. Préparer le matériel chirurgical requis, y compris la cage de récupération et autoclaver les instruments chirurgicaux.

Maintenez les rats autour de 200 grammes et maintenez-les sous des cycles lumière-obscurité de 12 heures à une température contrôlée avec un accès libre à la nourriture et à l’eau. Placez le rat en position couchée sur une plate-forme chirurgicale avec un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle. Rasez complètement la zone chirurgicale pour éviter la contamination de la plaie par contact avec la fourrure.

Ensuite, avec de la bétadine ou un autre réactif agréable, frottez l’abdomen rasé de près. Ensuite, à l’aide d’un scalpel, faites une incision de deux centimètres le long de la ligne médiane de l’abdomen. Ensuite, à l’aide d’une solution saline normale, humidifiez les organes abdominaux et gardez les organes humides pendant la chirurgie.

À l’aide de boules de coton, déplacez soigneusement les organes digestifs sur le côté pour exposer la veine cave inférieure et la région péritonéale postérieure. Identifiez ensuite l’aorte abdominale qui se trouve juxtaposée à la veine cave inférieure et généralement à sa gauche. Maintenant, à l’aide d’une pince, percez le péritoine pour découvrir les vaisseaux en dessous.

Isolez doucement l’aorte abdominale adjacente aux artères rénales et passez une suture en soie 4/0 de huit centimètres de long sous le vaisseau entre les origines des artères rénales droite et gauche. Faites un double nœud lâche avec la suture et laissez une boucle de trois millimètres de diamètre. Placez ensuite l’aiguille de calibre 22 émoussée et pliée à l’intérieur de la boucle.

Serrez le nœud autour de l’aorte et de l’aiguille, puis retirez immédiatement l’aiguille pour obtenir une constriction de 0,7 millimètre de diamètre. Avec des sutures 6/0 fermer la cavité abdominale. Ensuite, utilisez de simples sutures interrompues pour fermer les incisions musculaires et cutanées.

Utilisez de la teinture d’iode pour frotter le site chirurgical afin de prévenir l’infection. Pour prévenir la douleur postopératoire, traitez l’animal avec de l’acétaminophène et observez-le de près jusqu’à ce qu’il retrouve une conscience suffisante, comme l’indiquent la liberté de mouvement et l’apport alimentaire, et maintient la décubitus sternal. À 10 semaines après l’opération, pesez le rat.

Après avoir anesthésié l’animal et confirmé la profondeur de l’anesthésie, placez le rat sur un plateau métallique. Faites maintenant une incision de cinq centimètres dans la région thoracique autour de la ligne médiane du processus xiphoïde. À l’aide d’une pince tranchante, percez le diaphragme.

Ensuite, à l’aide de ciseaux, coupez et retirez la cage thoracique le long des lignes médio-claviculaires des deux côtés pour exposer le cœur. Excise soigneusement le cœur le long des frontières cardiaques et vasculaires. Ensuite, retirez doucement le cœur sans saisir le tissu.

Montez le cœur sur un appareil de perfusion Langendorff modifié en attachant le tronc aortique à l’aiguille de perfusion. Utilisez ensuite le tampon Krebs pour perfuser le cœur et laver le sang. Pesez le cœur et calculez le rapport poids/poids du cœur.

Ensuite, tout en portant un masque, placez l’organe dans du paraformaldéhyde à 4 % et fixez-le sur de la glace pendant la nuit. Après avoir fixé le tissu cardiaque, placez-le sur un dispositif de sectionnement de tissus, coupez-le en tranches de deux millimètres d’épaisseur et placez les sections dans une cassette d’enrobage. Après l’enrobage de paraffine et la section supplémentaire selon le protocole de texte, déparaffinisez les lames en les plaçant dans un réservoir de xylène pendant 30 minutes.

Ensuite, réhydratez le tissu dans une série d’alcool diluée séquentiellement suivie d’eau distillée. Ensuite, utilisez une solution de rouge picrosirius adéquate pour couvrir complètement les sections de tissu et incubez pendant une heure. Utilisez ensuite une solution d’acide acétique à 0,5 % pour rincer les lames deux fois.

Et rincez les échantillons deux fois dans de l’alcool absolu. Faites sécher les échantillons à l’air libre et montez-les dans de la résine synthétique à l’aide d’une lamelle. Ensuite, utilisez la lumière visible sous un microscope à un grossissement de 200X pour imager les lames.

Enfin, calculez le pourcentage de zone positive rouge picrosirius sur la surface totale qui indique l’étendue de la fibrose. Comme le montre ici, le volume cardiaque a augmenté après une chirurgie de constriction de l’aorte abdominale. Comme le démontre un rapport poids cardiaque/poids corporel plus élevé, qui est un indicateur d’hypertrophie cardiaque.

En utilisant la coloration rouge picrosirius, le myocarde fibrotique avec une teneur accrue en collagène peut être distingué des zones normales. Comme le démontrent ces échantillons colorés, la fibrose cardiaque a augmenté après une chirurgie de constriction de l’aorte abdominale par rapport aux témoins. Une fois maîtrisée, la chirurgie peut être réalisée en 30 minutes si elle est effectuée correctement.

Suite à cette procédure, d’autres méthodes comme l’échocardiographie peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires sur la fonction cardiaque. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des cardiopathies hypertensives pour explorer les mécanismes impliquant la cardiohypertrophie, le remodelage et l’échec. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer une constriction de l’aorte abdominale pour induire une cardiohypertrophie et un remodelage myocardique chez le rat.