Transitoire cérébrale moyenne Artère Occlusion Modèle de l'AVC néonatale chez les rats P10

L’objectif global de l’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne chez le rat nouveau-né est de fournir un modèle translationnel de l’AVC chez les nouveau-nés nés à terme. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des lésions cérébrales ischémiques néonatales en comprenant les mécanismes de lésion et de réparation dans le cerveau en développement, et comment nous pouvons les modifier avec différentes stratégies thérapeutiques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle fournit un modèle physiologiquement précis de l’AVC ischémique artériel focal chez les nouveau-nés, et qu’elle comprend également une composante de reperfusion, qui est une partie importante de la progression des lésions chez les nouveau-nés humains.

La démonstration visuelle de ce modèle est essentielle, car les étapes de cette chirurgie peuvent être très difficiles à apprendre. Les représentations bidimensionnelles de l’anatomie artérielle ne démontrent pas toujours de manière adéquate la nature complexe de la ramification 3D chez le rat. Commencez par peser le chiot pour vous assurer qu’il pèse entre 19 et 21 grammes.

Après avoir anesthésié le chiot à l’aide d’isoflurane inhalé conformément aux protocoles approuvés, assurez-vous qu’il n’y a pas de réponse à un pincement du pied. Maintenez la température de surface du corps à l’aide d’un coussin chauffant sous la phase chirurgicale. Fixez l’animal en position couchée avec du ruban adhésif sur les épaules.

Utilisez des cotons-tiges stériles pour frotter la région cervicale antérieure avec de l’éthanol à 70 %, suivi d’un écouvillon de solution de povidone iodée. Ensuite, infiltrez localement 0,25 % de bupivacaïne dans le site d’incision prévu. Ensuite, tout en travaillant à l’aide d’un stéréoscope, faites une incision cervicale antérieure de cinq à sept millimètres pour exposer l’artère carotide commune.

Placez deux à quatre écarteurs pour garder la cavité ouverte et l’artère exposée. Ensuite, localisez l’artère carotide interne, l’artère occipitale et l’artère carotide externe. Retirez le tissu conjonctif et la graisse des artères pour obtenir une vue claire.

Après avoir coupé 1,5 centimètre de fil de suture tressé en soie 6-0, détressez la suture en tirant des brins simples. Assurez-vous que les brins simples sont nets et non effilochés. Tout en maintenant le brin de suture à l’intérieur d’une pince à 45 degrés, balayez la pince en arc de cercle sous l’ICA de sorte que les pointes émergent entre l’ICA et l’OA. Ensuite, saisissez l’extrémité du brin de suture et tirez-la de manière à ce que l’extrémité soit facile d’accès.

Relâchez le brin de la pince et retirez-la de dessous l’ICA, en inversant le mouvement précédent. Attachez une ligature temporaire autour de l’ICA à la base la plus proche de l’endroit où elle se sépare de l’ACC. Rétractez soigneusement l’ICA latéralement, puis utilisez un clip pour fixer le brin rétracteur à l’excès de peau près de la région de l’aisselle du côté opposé à l’incision.

Assurez-vous que le brin rétractable est suffisamment tendu pour arrêter la circulation sanguine avant de passer à l’étape suivante. L’artère doit être plate et pâle. Utilisez une pince à 45 degrés pour saisir un autre brin de suture non tressé et enroulez-le sous et autour de l’ICA comme précédemment.

Positionnez ce brin latéralement au brin de rétraction. Ensuite, coupez une artériotomie de 0,2 millimètre à mi-chemin entre les ligatures attachées et dénouées, en vous rapprochant de la ligature liée. Maintenant, à l’aide d’une règle métrique, mesurez 10 millimètres de suture en nylon recouvert de silicone comme suture d’occlusion.

Coupez la suture avec une marge supplémentaire de deux à trois millimètres pour le retrait lors de la reperfusion. Tenez la suture d’occlusion avec une pince à 45 degrés et utilisez une pince droite pour créer une courbure, marquant le point d’arrêt de l’avancement. Introduisez la suture occlusive dans l’artériotomie, en la dirigeant parallèlement à l’ECA et vers la tête.

Faites avancer doucement la suture jusqu’à ce que la courbure soit atteinte. Utilisez ensuite le brin positionné latéralement au brin de rétraction pour attacher une ligature temporaire afin de fixer la suture d’occlusion. Retirez le clip de l’enrouleur, puis coupez les brins des deux ligatures temporaires, en laissant le brin qui servira à retirer le nœud plus long que le brin utilisé pour le resserrer.

Retirez les écarteurs et fermez la cavité à l’aide de soie tressée 6-0 pour créer trois ou quatre sutures interrompues. Retirez le chiot de l’anesthésie et placez-le sur un coussin chauffant à l’air ambiant. Surveillez le petit jusqu’à ce qu’il ait repris suffisamment conscience pour maintenir sa décubitus sternal et assurez-vous qu’il est complètement rétabli avant de le ramener à la mère.

Pendant l’occlusion, l’imagerie par résonance magnétique pondérée en diffusion peut être utilisée pour vérifier l’induction appropriée de la blessure. Ces images montrent une lésion ischémique en cours, indiquée par la flèche, détectée par DW-MRI pendant le MCAO transitoire. Environ deux heures et 50 minutes après l’occlusion du MCA, préparez le matériel chirurgical, puis commencez la procédure de reperfusion en anesthésiant comme précédemment.

Retirez les sutures interrompues et localisez la jonction, qui est marquée par les deux ligatures et l’extrémité finale de la suture occluse. Défaites soigneusement le nœud le plus latéral de la ligature temporaire en tirant sur le brin le plus long et retirez le brin de suture de la cavité. Exactement trois heures après l’occlusion de l’ACM, retirez lentement la suture occlusive de l’artère.

Il ne devrait y avoir aucune résistance. Utilisez une pince pour appliquer une pression sur l’artériotomie, puis dénouez soigneusement le nœud médial pour rétablir la circulation sanguine. Après avoir retiré le brin de suture du corps, appliquez un agent hémostatique sur l’artériotomie pour arrêter le saignement.

Le retour de la forme originelle de l’artère et de sa couleur rouge confirme que le flux sanguin de l’ICA a été rétabli. Retirez les écarteurs et fermez la cavité à l’aide de soie tressée 6-0 pour créer trois ou quatre sutures interrompues. Retirez le chiot de l’anesthésie et laissez-le se rétablir avec une surveillance comme avant de le remettre dans la cage de la maison.

Inspectez les chiots tous les jours pendant cinq jours. Notez leur poids et inspectez attentivement les sites d’incision pour une cicatrisation appropriée. Ces coupes de cerveau coronaire de 50 microns de 50 microns de la partie postérieure à l’antérieure, prélevées sur des animaux P-38, présentent des lésions assez graves après une TMCAO de trois heures à P-10.

La flèche indique la formation d’un kyste ipsilatéral et une réduction du volume cortical et striatal. Le trou rond sur le côté gauche représente un identifiant d’hémisphère controlatéral. Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de se rappeler que même si cette procédure est simple sur le plan conceptuel, le succès et la maîtrise peuvent prendre des heures d’optimisation et de pratique.

Une fois maîtrisée, l’occlusion peut être terminée en moins de 10 minutes, tandis que la reperfusion peut être terminée en moins de cinq minutes.