Name: Transitoire cérébrale moyenne Artère Occlusion Modèle de lAVC néonatale chez les rats P10 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-21T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Découvrez l'occlusion transitoire de l'artère cérébrale moyenne chez les rats P10, un modèle d'AVC néonatal physiologiquement précis. Cette méthode chirurgicale permet d'étudier les mécanismes de lésion cérébrale ischémique et d'évaluer des stratégies thérapeutiques.

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Le financement a été fourni par les subventions NIH K08 NS064094 et UCSF REAC. Les auteurs tiennent à remercier Nikita Derguin, Zinalda Vexler et Joel Faustino pour leur aide dans le développement de cette technique.

Toutes les recherches sur les animaux a été approuvé par l&#39;Université de Californie, San Francisco Comité sur la recherche animale et a été réalisée conformément au Guide pour les soins et l&#39; utilisation des animaux de laboratoire (Département américain de la Santé et des Services sociaux, Publication n ° 85-23, 1985 ). Les animaux ont été suivis de près par les vétérinaires de l&#39;UCSF institutionnel de protection des animaux et le Comité d&#39;utilisation (IACUC), accrédité par AAALAC. Une femelle rat Sprague-Dawley avec une litière rassis 8 (10 chiots par portée) a été obtenu. La mère et ses chiots ont reçu la nourriture et ad libitum eau et logés dans un établissement de soins des animaux et contrôlé en température léger avec enrichissement par jour, par protocole IACUC, jusqu&#39;à ce que les chiots étaient 10 jours. Tous les instruments chirurgicaux utilisés dans cette procédure ont été autoclaves pour assurer la stérilité. Stérilité des conseils d&#39;instruments est maintenue tout au long de la chirurgie. 1. cérébrale moyenne Artère Occlusion <ol><li> Peser le chiot et assure qu&#39;il est le poids approprié (19-21 g). Anesthésier le chiot dans 3% d&#39; isoflurane dans 100% de O 2 et d&#39; assurer qu&#39;il n&#39;y a pas de réponse à un pincement de pied. Maintenir la température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C à l&#39;aide d&#39;un coussin chauffant sous la scène chirurgicale. </li><li> Fixer l&#39;animal dans une position couchée avec la bande à travers les régions d&#39;épaulement. En utilisant des tampons de coton stérile, nettoyer la zone cervicale antérieure avec une solution de povidone-iode suivi par un tampon de 70% d&#39;éthanol dans de l&#39;eau distillée deux fois, en alternant entre chaque solution pendant quatre tampons totaux. </li><li> Localement infiltrer bupivacaïne à 0,25% dans le site d&#39;incision prévue. L&#39;utilisation d&#39;un stéréoscope, faire une ligne médiane de 5 à 7 mm antérieure incision cervicale pour exposer l&#39;artère carotide commune (ACC). Placez 2-4 écarteurs pour maintenir la cavité ouverte et l&#39;artère exposée. </li><li> Localiser l&#39;artère carotide interne (ICA), l&#39;artère occipitale (OA), et l&#39;artère carotide externe (ECA). Toiletter les artères pour obtenir une vue claire. Soyez voitureeful de ne pas perturber le nerf vague. NOTE: Pour les petits opérés de manière fictive, la inicision est laissée ouverte et les artères sont exposées, après quoi l&#39;incision est suturée fermée. Le temps de l&#39;anesthésie totale est équivalente à celle de la chirurgie d&#39;occlusion. </li><li> Coupez 1,5 cm de fil de suture tressé de soie 6-0. La suture défaire les nattes, tirant des brins simples. Assurez-vous que les simples brins sont propres et non effiloché. NOTE: Si nécessaire, les extrémités effilochées lisser en plongeant le seul brin dans l&#39;eau stérile et le toilettage du brin avec des pointes de forceps. </li><li> Tout en maintenant le fil de suture avec une pince de 45 degrés, déplacer la pince dans un mouvement d&#39;arc de balayage pour passer sous la CIA afin que les conseils émergent entre le forceps ICA et OA. NOTE: Si la dissection est bien fait, cette étape sera relativement facile. Si l&#39;ICA et l&#39;arthrose se touchent, veillez à ne pas rompre les artères lors de l&#39;utilisation du forceps pour isoler l&#39;ICA. Si le saignement se produit, appliquez une pression sur l&#39;artère avec la pince jusqu&#39;à ce quel&#39;arrêt du saignement. Absorber le sang avec un tampon stérile. </li><li> Prenez l&#39;extrémité du brin de suture qui est maintenue par la pince et tirez pour que la fin est facile d&#39;accès. Libérer le brin de la pince et la pince arrière de dessous du CIA, en inversant le mouvement de l&#39;étape 1.5 (figure 1A). </li><li> Attachez un ligatures temporaire autour de l&#39;ICA à la base, le plus proche de l&#39;endroit où il se sépare de la CCA. NOTE: Il est important pour attacher le noeud afin que l&#39;extrémité du fil qui sera tiré pour enlever le noeud est assez long (supérieur à 1 mm, inférieure à 3 mm) de saisir facilement avec une pince, tout en assurant qu&#39;il existe un quantité appropriée de fil de suture de l&#39;autre côté du noeud de rétraction. </li><li> rétracter latéralement avec précaution l&#39;ICA et utiliser un clip pour fixer le fil à l&#39;excès de peau à proximité de la région d&#39;aisselle du côté opposé à l&#39;incision. Assurez-vous que ce brin de rétraction est suffisamment tendu pour arrêter l&#39;écoulement du sang avant de procéder à l&#39;étape suivante, àminimiser le risque de saignement incontrôlé. Notez que l&#39;artère est plat et pâle. REMARQUE: Ne pas trop se rétractent, car il peut causer une déchirure partielle ou totale de l&#39;ICA. La rétraction peut être ajusté juste avant de faire l&#39;artériotomie en tirant sur le fil sur le côté opposé à la pince. </li><li> Utiliser 45 ° forceps pour saisir un autre brin de fil de suture non tressée et la boucle sous et autour de l&#39;ICA, comme à l&#39;étape 1.5. Position de ce volet latéral au fil de rétraction (figure 1B). REMARQUE: Cette étape peut également être fait avant la rétraction. En cas de doute sur la qualité de la rétraction, ce nœud peut être très vaguement lié avant l&#39;étape suivante. </li><li> Couper une mi-chemin artériotomie 0,2 mm entre les ligatures nouent et se dénouent, égarée plus proche de l&#39;égalité ligatures. NOTE: Le sang restant dans l&#39;artère liée au décollage peut vider par l&#39;artériotomie mais ne doit pas dépasser 5 pi. Si le saignement persiste, retirez délicatement le fil de rétraction pour augmenter la rétraction, avec soin à unvide d&#39;endommager l&#39;artère de tension excessive. </li><li> En utilisant une règle métrique, mesurez la suture occlusive et couper la suture avec une allocation supplémentaire de 2-3 mm pour le retrait du dispositif d&#39;occlusion pendant la reperfusion. Tenez le dispositif d&#39;occlusion avec une pince de 45 degrés et l&#39;utilisation de pinces droites pour créer un coude à la longueur appropriée pour atteindre le MCA, marquant un point d&#39;arrêt pour l&#39;avancement. REMARQUE: une longueur d&#39;occlusion de 10 mm de l&#39;extrémité de pointe de silicone sur le pli est utilisé pour P10 Sprague-Dawley ou jeunes rats Long Evans dans cette gamme de poids. </li><li> Utilisation de 45 ° forceps, alimenter le fil de suture d&#39;occlusion de nylon enduit de silicone dans l&#39;artériotomie et de faire avancer le fil de suture à la courbure qui marque la distance prédéterminée de la MCA (Figure 1C). Veiller à ce que l&#39;avancement est lisse; cesser immédiatement l&#39;avancement si la résistance se fait sentir. Au cours de l&#39;avancement, l&#39;objectif de la suture dans une direction qui est parallèle à la CC / CEA, vers la tête. NOTE: Si la suture est avancée dorsalement, versla colonne vertébrale de l&#39;animal, il peut courir dans l&#39;artère ptérygo (ZEP). Si la résistance est ressentie après 3-5 mm d&#39;avancement, la suture a frappé la jonction de la ZEP. Arrière de l&#39;obturateur de l&#39;artère jusqu&#39;à ce que la tête de silicone est proche de la artériotomie avant d&#39;ajuster la direction d&#39;avancement. Il ne faut pas supprimer complètement le dispositif d&#39;occlusion de l&#39;artériotomie. </li><li> Fixer le dispositif d&#39; occlusion en attachant une ligature temporaire, en utilisant le brin de l&#39; étape 1.10 (Figure 1D). </li><li> Retirez le clip enrouleur. Couper les brins de deux ligatures temporaires de telle sorte que le brin du nœud qui est tiré pour enlever le noeud est facile à saisir avec une pince droite et est plus long que le brin qui est tiré pour serrer le nœud. NOTE: Les brins doivent être suffisamment courte pour qu&#39;ils ne s&#39;emmêle pas dans la cavité après fermeture. </li><li> Retirez les enrouleurs et fermer la cavité à l&#39;aide 6-0 soie tressée pour créer trois à quatre points de suture interrompus. </li><li> Retirer le chiot deanesthésie et placez-le sur un coussin chauffant dans l&#39;air ambiant. Surveiller le chiot jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait repris connaissance suffisante pour maintenir décubitus sternale et veiller à ce qu&#39;il a complètement récupéré avant de le retourner au barrage. Assurez-vous que le chiot maintient une température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C. </li><li> Au cours de l&#39;occlusion, l&#39;imagerie par résonance magnétique pondérée en diffusion (DW-IRM) sous anesthésie isoflurane peut être utilisé pour vérifier l&#39;induction appropriée de blessure. La figure 2 montre une lésion ischémique en cours détecté par DW-IRM pendant tMCAO 9. REMARQUE: rotation pondérée en diffusion imagerie écho-planar est effectuée 10 à 15 minutes avant la reperfusion. Le cerveau entier est imagé avec série des coupes coronales d&#39;épaisseur de 2 mm à l&#39;aide des paramètres de la séquence d&#39;impulsions suivants: TR / TE = 5000/60 ms, 4 moyennes, champ de vision = 35 mm, matrice de données = 128x128, gradient diffusion durée = 20 ms, séparation = 29,7 ms, amplitude = 70mt / m, et facteur b = 1,045 s / mm 2.Les animaux présentant un manque d&#39;implication corticale ou atypique lésion ischémique, comme dans le tronc cérébral, sont exclus. </li></ol> 2. revascularisation REMARQUE: Occlusion est effectuée pendant 3 h pour provoquer une quantité modérée à sévère de blessure impliquant le striatum et le cortex. <ol><li> A environ 2 h et 50 min occlusion suivante de la MCA, anesthésier le chiot dans 3% d&#39; isoflurane dans 100% de O 2. Maintenir une température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C à l&#39;aide d&#39;un coussin chauffant sous la scène chirurgicale. </li><li> Retirer les sutures interrompues à l&#39;étape 1.16 et localiser la jonction, qui est marquée par deux ligatures et l&#39;extrémité de queue de la suture occlusive. REMARQUE: les animaux sont opérés de manière fictive induites et restent sous anesthésie pendant une période de temps équivalente aux animaux occlus. L&#39;incision est à nouveau ouvert et fermé suturée. Pour les animaux opérés de manière fictive, passez à l&#39;étape 2.11. </li><li> soigneusement untiele noeud le plus latéral lié précédemment à l&#39;étape 1.14 en tirant sur le brin plus long. NOTE: En cas de résistance à dénouer le nœud, arrêtez de faire en sorte que le brin correct du noeud est tiré. Si la résistance continue, augmenter le grossissement pour une meilleure vue. Soyez prudent lorsque vous déliement, car il est possible d&#39;endommager l&#39;artère pendant cette étape. </li><li> Retirer le fil de suture de la cavité. </li><li> Exactement 3 h après l&#39;occlusion MCA, lentement la suture occlusive de l&#39;artère. Il n&#39;y aura pas de résistance. NOTE: Dans la plupart des cas, il n&#39;y aura pas de saignement. Si une petite quantité de saignement se produit, appliquez une pression sur l&#39;artère sur le site artériotomie. </li><li> Utilisez une pince pour appliquer une pression à l&#39;artériotomie, comme l&#39;étape suivante restaure le flux sanguin ICA pour reperfusion. </li><li> délier soigneusement le noeud interne en utilisant le même procédé que dans l&#39;étape 2.3. </li><li> Retirez le fil de suture du corps et appliquer un agent hémostatique à l&#39;artériotomie pour arrêter le saignement. </li&gt; <li> Assurez-vous que le saignement est arrêté. NOTE: Retour de la couleur rouge et la forme originale de l&#39;artère confirme que le flux sanguin ICA a été restauré. </li><li> Retirez les enrouleurs et fermer la cavité avec trois à quatre sutures interrompues de soie 6-0 tressée. </li><li> Retirer le chiot de l&#39;anesthésie et placez-le sur un coussin chauffant dans l&#39;air ambiant. Surveiller jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait repris connaissance suffisante pour maintenir décubitus sternale et assurer le recouvrement intégral avant de le retourner au barrage. Assurez-vous que le chiot maintient une température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C. </li><li> Inspecter les chiots par jour pendant 5 jours. Recprd leur poids et d&#39;inspecter les sites d&#39;incision près pour la guérison appropriée. Retirer les sutures après 7-14 jours. Blessures post-tMCAO peut être imagée avec l&#39; IRM, éventuellement 9. REMARQUE: Les animaux peuvent perdre jusqu&#39;à 1 g de poids le premier jour, mais retrouvera généralement le poids sans intervention et être dans un même pesert gamme de commandes par jour 4-5. Rarement, un chiot peut perdre du poids excessif ou ont des difficultés d&#39;alimentation, ce qui nécessite un gavage oral se nourrit pendant 2-3 jours. </li><li> A P21, une blessure peut être évaluée de façon fiable avec des tests de comportement sensori, comme Rotarod ou l&#39;élevage du cylindre. Les tests cognitifs peut être effectuée dès que 4-6 semaines en utilisant des évaluations telles que la reconnaissance nouvelle de l&#39; objet ou le labyrinthe d&#39;eau de Morris 13. </li><li> Euthanasier les rats par injection intraperitoneale de Euthasol (50 mg / kg) pour la récolte du cerveau 11, 12. </li><li> L&#39; analyse histologique pour évaluer le volume de blessure ou de réponse aux interventions peuvent être effectuées avec du violet de crésyle ou coloration H &amp; E (figure 3) 10. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les étapes critiques au sein du protocole Tout d&#39; abord, il est important de maintenir la normothermie de l&#39;initiation de l&#39; anesthésie jusqu&#39;à la guérison complète, car il y a des effets connus de l&#39; hypothermie à la fois 17 et 18 hyperthermie sur la progression des lésions cérébrales chez les animaux immatures et matures. En second lieu, tout en assurant l&#39;animal et de rétracter l&#39;incision, un positionnement optimal pour surveiller la respiration et de veiller à ce que la trachée est libre de compression est essentiel. En troisième lieu, éviter de serrer ou d&#39;étirement du nerf vague, car cela pourrait provoquer des changements dans la fréquence cardiaque avec la stimulation vagale. En quatrième lieu, parce que la rétraction de l&#39;ICA est nécessaire pour contrôler le saignement pendant la artériotomie, il faut faire attention au degré de tension lors de la rétraction pour éviter d&#39;endommager l&#39;artère. Si l&#39;artère ne se déchire de rétraction, ou s&#39;il y a une mauvaise incision artériotomie, l&#39;animal doit être exclu de l&#39;analyse en raison du risqued&#39;hémorragie et reperfusion pauvres. Modifications et dépannage Grâce à l&#39;IRM comme guide, la longueur de suture peut être optimisée pour faire en sorte que la pointe de silicone obture correctement la MCA pour créer l&#39;ischémie focale. Si l&#39;IRM ne sont pas disponibles, les chiots peuvent être euthanasiés avant pour la dissection reperfusion pour visualiser la mise en place de la suture. Ajuster la longueur de suture au besoin. Le poids des petits est fortement corrélé avec les exigences de longueur de suture occlusive. Le temps d&#39;occlusion peut être modifiée pour ajuster le degré de gravité des blessures. En outre, la forme et la longueur de suture sont critiques. Pour P10 rats Sprague-Dawley et Long Evans pesant 19-21 g, 10 mm est la longueur optimale d&#39;insertion dans notre expérience. En outre l&#39;insertion de la suture occlusive peut provoquer une perforation de la MCA. De plus, la cohérence dans la forme du filament occlusive dans chaque opération se traduira par une plus grande cohérence des blessures pattern 19, 20. Pour cette raison, nous vous recommandons d&#39;utiliser des sutures professionnellement fabriqués spécialement à cet effet. Il est également important de noter que le type de blessure peut varier entre les praticiens en raison des différences apparemment minute dans la technique. Limites de la technique L&#39;exécution de cette technique dans un petit développement rongeurs nécessite une expérience significative. Si elle est effectuée correctement, le chirurgien est en mesure de provoquer un type de blessure très cohérente à travers les animaux de différentes tailles et d&#39;atteindre un taux de survie supérieur à 95%. En outre, des outils chirurgicaux appropriés sont essentiels. Les instruments chirurgicaux doivent être bien entretenus pour assurer que tous les conseils de l&#39;instrument se rapproche correctement. Signification de cette technique par rapport aux méthodes existantes ou alternatives Bien que l&#39; hypoxie-ischémie, ou le modèle Rice-Vannucci 2 </sup&gt;, est le plus souvent utilisé pour étudier une lésion hypoxique-ischémique dans le cerveau en développement, il est important de noter que ce modèle de tMCAO est distinct de HI en ce qu&#39;il est l&#39;ischémie focale transitoire sans hypoxie globale, suivie d&#39;une phase de reperfusion lorsque la obstruction est enlevé et la circulation sanguine est rétablie. Cela provoque une blessure plus cohérente et reproductible et est plus clinique translationnelle en provoquant un type de blessure similaire à celle observée en plein terme AVC néonatal. Cela permet à l&#39;étude des modèles de blessures focales et des réponses compensatoires dans le tissu non endommagé. Les applications futures après la maîtrise de cette technique Ce modèle est similaire à la cause la plus fréquente d&#39;AVC chez les nouveau - nés humains, un thrombus occlusif transitoire qui se produit au cours de la période périnatale 11, 21. L&#39;étiologie est pas tout à fait claire et est très probablement multifactorielle, mais il est présumé dans la plupart des cas to résulter d&#39;emboles qui passent du placenta 11. En outre, de nombreux nouveau - nés ayant subi un AVC périnatal présumé présentent souvent une activité plus tard de saisie ou subtile examen neurologique focal Anomalies 22. Cela rend l&#39;utilisation d&#39;une approche cohérente, modèle de lésion de la traduction pour identifier les mécanismes de progression des blessures et des stratégies thérapeutiques possibles cruciales.

AVC au cours de la période néonatale est une cause importante de décès et d&#39; invalidité, survenant dans moins de 1 à 2 300 naissances vivantes 1. Cela conduit au développement du système nerveux central modifié et augmentation de la morbidité à long terme, y compris augmentation de l&#39;incidence de l&#39;épilepsie, infirmité motrice cérébrale, un retard mental, et d&#39;autres types de moteur ou d&#39;un dysfonctionnement cognitif. Les effets à long terme de l&#39;AVC précoce font des modèles animaux traductionnelles essentiels pour l&#39;examen des mécanismes de blessures et de réparation dans cette population, y compris les stratégies pour protéger le cerveau lésé ou pour améliorer la réparation. Différents modèles d&#39;ischémie ont été utilisés pour étudier les lésions cérébrales chez les animaux adultes, et alors que la procédure Rice-Vannucci (modifié Levine) 2 est couramment utilisé pour étudier une lésion hypoxique-ischémique dans le cerveau en développement, l&#39; ischémie-reperfusion focale est un mécanisme de blessure distinct causant des blessures focale, avec un noyau blessé et penumbra et intact tissu distant. Les Koizumi 3 et 4 Longa modèles ont été développés chez les rats adultes pour obtenir une occlusion de l&#39; artère cérébrale moyenne transitoire par l&#39;artère carotide commune (ACC) et de l&#39; artère carotide externe (ECA), respectivement. Dans les deux modèles, la ligature permanente et cautérisation des branches de l&#39;artère sont importantes pour minimiser les saignements et de rationaliser la procédure chirurgicale, ce qui provoque aussi des effets néfastes sur la capacité de l&#39;animal à se nourrir et de prendre du poids après une blessure. En outre, il existe des mécanismes de blessures distinctes dans le cerveau immature et des modèles spécifiques de blessures observés en conséquence. Plus récemment, la course photothrombotique (méthode Rose Bengale) 5 et ligature MCA permanente 6 ont été utilisées pour étudier la course néonatale et adulte. Les deux accidents vasculaires cérébraux photothrombotique et MCA ligature créer des changements permanents dans le flux sanguin cérébral qui se traduisent par un manque de reperfusion. Revascularisation est un élément essentiel du développement et de la progression des lésions focales, avec excitotoxicité accrue, formation de radicaux libres, et la production d&#39;oxyde nitrique conduisant à la mort cellulaire retardée qui implique des cascades de signalisation qui sont distincts de la phase ischémique 7. Hypoxie-ischémie implique la ligature de la carotide unilatérale permanente suivie par une hypoxie globale, qui diffère aussi de la cause de la lésion hypoxique-ischémique chez l&#39;homme et ne provoque pas un modèle de lésion focale constante, ce qui rend l&#39;étude du noyau blessé et penumbra plus difficile. Nous avons décrit précédemment un modèle d&#39;ischémie-reperfusion accident vasculaire cérébral non hémorragique chez le rat immature utilisant une occlusion de l&#39; artère cérébrale moyenne transitoire (MCAO) 8, 9, 10. Cette méthode est moins invasive qui accède et obture la MCA à travers l&#39;artère carotide interne sans ligati permanentou cautérisation. Cela fournit un modèle de blessure similaire à la cause la plus fréquente d&#39;accident vasculaire cérébral pendant la période périnatale 11, 12. Ce modèle d&#39;ischémie-reperfusion des résultats de blessures des dommages au striatum ipsilatéral et le cortex pariéto-temporale. Ce modèle de tMCAO permet également le contrôle de la gravité des blessures en faisant varier la durée de l&#39;occlusion. L&#39;examen des voies de signalisation et les changements histologiques dans le noyau et blessé et penumbra dans le tissu non endommagé ipsilatéral et controlatéral peut encore élucider les mécanismes de blessures et de réparation dans le cerveau immature. Cette étude démontrera ce modèle de blessure important pour le développement du cerveau.

<table><tbody><tr><td>Isoflourane</td><td>Henry Schein</td><td>50033</td><td>anesthésique, à 3 %&nbsp ;</td></tr><tr><td>Surgioscope trinoculaire</td><td>World Precision Instruments</td><td>PSMT5N</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Sunbeam</td><td>000731-500-000</td> Thermomètre IR <td>à réglage faible à moyen</td></tr><tr><td></td><td>Extech Instruments</td><td>72-5270</td><td></td></tr><tr><td>Kit de rétraction pour petits animaux&nbsp ;</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>CermaCut Ciseaux</td><td>Fine Science</td><td>Tools 14958-09</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>112522-00</td><td>2x</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>2x</td></tr><tr><td>B-2 Micro Clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Forcepts for Clamp Application</td><td>Fine Outils scientifiques</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro Vannas Ciseaux</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>15000-03</td><td>Tranchant 2mm</td></tr><tr><td>Sutures d’occlusion</td><td>Doccol</td><td>602123PK10</td><td>701712PK5Re</td></tr><tr><td>Règle</td><td>Outils scientifiques</td><td></td><td></td>fins</tr><tr><td>Agent hémostatique&nbsp ;</td><td>Avitene</td><td>DVL1010590</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Perma-Hand Soie Coupe InverséeSuture</td><td>Ethicon</td><td>769G</td><td></td></tr><tr><td>Euthasol</td><td>Virbac</td><td>710101</td><td>0,22 mL/kg</td></tr><tr><td>Applicateurs à pointe de coton</td><td>Henry Schein</td><td>100-9249</td><td></td></tr><tr><td>Ruban de laboratoire</td><td>VWR</td><td>89097-990</td><td></td></tr></tbody></table>

transitoire cérébrale moyenne artère occlusion modèle de l&#39;avc néonatale chez les rats p10

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Un certain nombre de modèles animaux ont été utilisés pour étudier les lésions hypoxiques-ischémiques, les lésions traumatiques, l’hypoxie globale ou l’ischémie permanente dans le cerveau immature et mature. L’accident vasculaire cérébral survient fréquemment pendant la période périnatale chez l’homme, et l’ischémie-reperfusion transitoire est la forme la plus courante d’accident vasculaire cérébral chez les nouveau-nés. La phase de reperfusion est un élément essentiel de la progression de la lésion, qui se produit sur une période de quelques jours à quelques semaines, et de la réponse endogène à la lésion. Ce modèle de rat postnatal au jour 10 (p10) de l’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne (tMCAO) crée une lésion unilatérale d’ischémie-reperfusion focale non hémorragique qui peut être utilisée pour étudier les mécanismes de lésion focale et de réparation dans le cerveau équivalent à terme. Le profil de lésion produit par tMCAO est cohérent et hautement reproductible et peut être confirmé par IRM ou analyses histologiques. La gravité de la blessure peut être manipulée par des changements dans le temps d’occlusion et d’autres méthodes qui seront discutées.

La gravité des blessures causées par tMCAO dépend fortement à la fois le temps d'occlusion et l'expérience du chirurgien. Une occlusion de 90 minutes produit souvent une légère à modérée type de blessure, tandis que 3 h produit une blessure modérée à sévère. La gravité des blessures peut être évaluée par diverses méthodes, y compris l'IRM, histologie, ou des analyses à court ou du comportement à long terme. La figure 2 montre un exemple du DW-IRM réalisée 75 min dans une occlusion de 90 min, ce qui confirme la lésion ischémique impliquant l'hémisphère ipsilatéral. L'imagerie de diffusion démontre une diffusion accrue dans le striatum ipsilatéral et la majorité du cortex ipsilatéral, sans modification controlatérales pendant la phase ischémique aigu. Cela correspond à un niveau modéré de blessure à long terme impliquant à la fois le cortex et la substance grise profonde. Occlusion des résultats MCAla mort cellulaire qui commence dans le striatum des blessures moins graves et développe une aggravation des blessures corticale et hippocampique des durées d'occlusion et des blessures plus graves. Lors de l' optimisation de la technique chirurgicale, par exemple pour déterminer la longueur d'insertion de suture, l' IRM est fortement recommandée, car elle permet la confirmation du placement de suture appropriée et la visualisation de l' oedème et de la progression des blessures pendant l' occlusion 14, 15, 16. Si l'IRM ne sont pas disponibles, H &amp; E ou coloration violette crésyl sont des méthodes histologiques simples et fiables pour déterminer la morphologie des blessures et peuvent être utilisés aux deux points de temps précoces et tardifs après la tMCAO. La figure 3 montre un modèle de lésion modérée à sévère à l' examen histopathologique suite à une occlusion de 3 h, ce qui démontre la formation de kystes et de volume dans le striatum et le cortex ipsilatéral. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1" quantification objective st de coupes color cr afin calculer le rapport entre volume l ipsilat controlat confirme une isch reperfusion. plus pr apr anesth avec euthasol cerveau a r par perfusion transcardiaque dans du pbs m paraformaldehyde. la suite postfixation pendant nuit et saccharose entier sectionn des intervalles pm chaque section douzi s mont violet>10. Même avec une blessure légère, les changements locomoteurs, comme encerclant et hémiparésie, sont notés au cours de la période d'occlusion. Avec des blessures plus graves, ces changements vont persister après la reperfusion. tests comportementaux supplémentaires peuvent être utilisés pour évaluer la gravité des blessures, y compris les essais d'élevage Rotarod ou cylindre pour la fonction sensori et le labyrinthe d'eau de Morris pourla fonction cognitive 13. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig1.jpg"> Figure 1: Surgical images en direct de la procédure tMCAO. (A) Le premier brin de fil de suture est enroulée autour de l'ICA, tel que décrit à l' étape 1.6. (B) Le premier ligatures temporaire est liée et l'ICA est rétracté. Le second brin de fil de suture est enroulée autour de l'ICA, latéralement par rapport au premier brin de fil de suture, tel que décrit à l'étape 1.9. (C) La suture d'occlusion revêtu de silicone est introduit dans le site d'artériotomie, tel que décrit à l' étape 1.12. (D) La seconde ligature temporaire est attaché pour fixer le dispositif d' occlusion en place, comme indiqué à l' étape 1.14. Barre d'échelle = 1 mm. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig2.jpg"> Figure 2: IRM Au cours OCCLusion Démontre le approprié Unilatérale blessures. Avant vers l'arrière, des tranches d'image coronale du DW-IRM, réalisée au cours d'une occlusion de 90 min, démontrer une diffusion accrue impliquant l'hémisphère ipsilatéral (flèches), ce qui correspond à une lésion ischémique en cours dans la phase aiguë. Reproduit avec la permission de l' AVC 11. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54830/54830fig2large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="figure 3" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig3.jpg"> Figure 3: blessures impliquant le striatum Unilatérale et Cortex à 4 semaines suivant tMCAO. Arrière en avant, coronales coupes de cerveau teinté crésyl-violet (chaque 50 um) récoltées à partir P38 animaux montrent des blessures assez graves (les flèches montrent la formation de kystes ipsilatéral et réduit corticale etvolume de striatal) suivant une tMCAO 3 h à P10. Le trou rond sur le côté gauche représente un identifiant de l'hémisphère contralateral. Barre d'échelle = 5 mm. Reproduit avec la permission de Neurobiology of Disease 12. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54830/54830fig3large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a>

L’AVC néonatal est une cause importante de lésions cérébrales précoces nécessitant un modèle translationnel avec des modèles de lésions focales cohérents et une reproductibilité élevée afin de permettre l’étude. Cette étude décrit la procédure chirurgicale détaillée pour créer une lésion d’ischémie-reperfusion focale unilatérale non hémorragique chez les rongeurs équivalents à terme.

Transitoire cérébrale moyenne Artère Occlusion Modèle de l&#39;AVC néonatale chez les rats P10

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

L’objectif global de l’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne chez le rat nouveau-né est de fournir un modèle translationnel de l’AVC chez les nouveau-nés nés à terme. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des lésions cérébrales ischémiques néonatales en comprenant les mécanismes de lésion et de réparation dans le cerveau en développement, et comment nous pouvons les modifier avec différentes stratégies thérapeutiques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle fournit un modèle physiologiquement précis de l’AVC ischémique artériel focal chez les nouveau-nés, et qu’elle comprend également une composante de reperfusion, qui est une partie importante de la progression des lésions chez les nouveau-nés humains.La démonstration visuelle de ce modèle est essentielle, car les étapes de cette chirurgie peuvent être très difficiles à apprendre. Les représentations bidimensionnelles de l’anatomie artérielle ne démontrent pas toujours de manière adéquate la nature complexe de la ramification 3D chez le rat. Commencez par peser le chiot pour vous assurer qu’il pèse entre 19 et 21 grammes.Après avoir anesthésié le chiot à l’aide d’isoflurane inhalé conformément aux protocoles approuvés, assurez-vous qu’il n’y a pas de réponse à un pincement du pied. Maintenez la température de surface du corps à l’aide d’un coussin chauffant sous la phase chirurgicale. Fixez l’animal en position couchée avec du ruban adhésif sur les épaules.Utilisez des cotons-tiges stériles pour frotter la région cervicale antérieure avec de l’éthanol à 70 %, suivi d’un écouvillon de solution de povidone iodée. Ensuite, infiltrez localement 0,25 % de bupivacaïne dans le site d’incision prévu. Ensuite, tout en travaillant à l’aide d’un stéréoscope, faites une incision cervicale antérieure de cinq à sept millimètres pour exposer l’artère carotide commune.Placez deux à quatre écarteurs pour garder la cavité ouverte et l’artère exposée. Ensuite, localisez l’artère carotide interne, l’artère occipitale et l’artère carotide externe. Retirez le tissu conjonctif et la graisse des artères pour obtenir une vue claire.Après avoir coupé 1,5 centimètre de fil de suture tressé en soie 6-0, détressez la suture en tirant des brins simples. Assurez-vous que les brins simples sont nets et non effilochés. Tout en maintenant le brin de suture à l’intérieur d’une pince à 45 degrés, balayez la pince en arc de cercle sous l’ICA de sorte que les pointes émergent entre l’ICA et l’OA. Ensuite, saisissez l’extrémité du brin de suture et tirez-la de manière à ce que l’extrémité soit facile d’accès.Relâchez le brin de la pince et retirez-la de dessous l’ICA, en inversant le mouvement précédent. Attachez une ligature temporaire autour de l’ICA à la base la plus proche de l’endroit où elle se sépare de l’ACC. Rétractez soigneusement l’ICA latéralement, puis utilisez un clip pour fixer le brin rétracteur à l’excès de peau près de la région de l’aisselle du côté opposé à l’incision.Assurez-vous que le brin rétractable est suffisamment tendu pour arrêter la circulation sanguine avant de passer à l’étape suivante. L’artère doit être plate et pâle. Utilisez une pince à 45 degrés pour saisir un autre brin de suture non tressé et enroulez-le sous et autour de l’ICA comme précédemment.Positionnez ce brin latéralement au brin de rétraction. Ensuite, coupez une artériotomie de 0,2 millimètre à mi-chemin entre les ligatures attachées et dénouées, en vous rapprochant de la ligature liée. Maintenant, à l’aide d’une règle métrique, mesurez 10 millimètres de suture en nylon recouvert de silicone comme suture d’occlusion.Coupez la suture avec une marge supplémentaire de deux à trois millimètres pour le retrait lors de la reperfusion. Tenez la suture d’occlusion avec une pince à 45 degrés et utilisez une pince droite pour créer une courbure, marquant le point d’arrêt de l’avancement. Introduisez la suture occlusive dans l’artériotomie, en la dirigeant parallèlement à l’ECA et vers la tête.Faites avancer doucement la suture jusqu’à ce que la courbure soit atteinte. Utilisez ensuite le brin positionné latéralement au brin de rétraction pour attacher une ligature temporaire afin de fixer la suture d’occlusion. Retirez le clip de l’enrouleur, puis coupez les brins des deux ligatures temporaires, en laissant le brin qui servira à retirer le nœud plus long que le brin utilisé pour le resserrer.Retirez les écarteurs et fermez la cavité à l’aide de soie tressée 6-0 pour créer trois ou quatre sutures interrompues. Retirez le chiot de l’anesthésie et placez-le sur un coussin chauffant à l’air ambiant. Surveillez le petit jusqu’à ce qu’il ait repris suffisamment conscience pour maintenir sa décubitus sternal et assurez-vous qu’il est complètement rétabli avant de le ramener à la mère.Pendant l’occlusion, l’imagerie par résonance magnétique pondérée en diffusion peut être utilisée pour vérifier l’induction appropriée de la blessure. Ces images montrent une lésion ischémique en cours, indiquée par la flèche, détectée par DW-MRI pendant le MCAO transitoire. Environ deux heures et 50 minutes après l’occlusion du MCA, préparez le matériel chirurgical, puis commencez la procédure de reperfusion en anesthésiant comme précédemment.Retirez les sutures interrompues et localisez la jonction, qui est marquée par les deux ligatures et l’extrémité finale de la suture occluse. Défaites soigneusement le nœud le plus latéral de la ligature temporaire en tirant sur le brin le plus long et retirez le brin de suture de la cavité. Exactement trois heures après l’occlusion de l’ACM, retirez lentement la suture occlusive de l’artère.Il ne devrait y avoir aucune résistance. Utilisez une pince pour appliquer une pression sur l’artériotomie, puis dénouez soigneusement le nœud médial pour rétablir la circulation sanguine. Après avoir retiré le brin de suture du corps, appliquez un agent hémostatique sur l’artériotomie pour arrêter le saignement.Le retour de la forme originelle de l’artère et de sa couleur rouge confirme que le flux sanguin de l’ICA a été rétabli. Retirez les écarteurs et fermez la cavité à l’aide de soie tressée 6-0 pour créer trois ou quatre sutures interrompues. Retirez le chiot de l’anesthésie et laissez-le se rétablir avec une surveillance comme avant de le remettre dans la cage de la maison.Inspectez les chiots tous les jours pendant cinq jours. Notez leur poids et inspectez attentivement les sites d’incision pour une cicatrisation appropriée. Ces coupes de cerveau coronaire de 50 microns de 50 microns de la partie postérieure à l’antérieure, prélevées sur des animaux P-38, présentent des lésions assez graves après une TMCAO de trois heures à P-10.La flèche indique la formation d’un kyste ipsilatéral et une réduction du volume cortical et striatal. Le trou rond sur le côté gauche représente un identifiant d’hémisphère controlatéral. Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de se rappeler que même si cette procédure est simple sur le plan conceptuel, le succès et la maîtrise peuvent prendre des heures d’optimisation et de pratique.Une fois maîtrisée, l’occlusion peut être terminée en moins de 10 minutes, tandis que la reperfusion peut être terminée en moins de cinq minutes.

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L'induction chirurgicale d'une lésion cérébrale ischémique chez le rat est un modèle largement utilisé pour la recherche sur les AVC. Ici nous démontrons l'induction d'une ischémie cérébrale focale par occlusion de l'artère cérébrale moyenne. Visualisation de l'infarctus entraînant par coloration histologique et l'imagerie par résonance magnétique est également représentée.

Focale modèle d&#39;ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l&#39;artère cérébrale moyenne chez le rat

Nous démontrons dans la vidéo un procédé pour produire une occlusion de l'artère cérébrale moyenne chez des souris adultes en utilisant un monofilament intraluminale. Nous montrons aussi comment évaluer l'étendue de l'infarctus cérébral par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) coloration.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Source : Larpthaveesarp, A., et. al. Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne d’un accident vasculaire cérébral néonatal chez des rats P10. J. vis. exp. (2017)Cette vidéo démontre l’établissement du modèle d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un rat. L’artère carotide interne (ICA) est exposée et une ligature est sécurisée pour limiter l’afflux sanguin. Une occlusion est insérée à travers l’ICA pour atteindre l’artère cérébrale moyenne. Le petit est ensuite laissé...

Génération d’une occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un petit rat pour induire une ischémie cérébrale locale

Nous décrivons une méthode hautement reproductible pour l'occlusion permanente d'un important vaisseau sanguin cérébral des rongeurs. Cette technique peut être accompli avec très peu de dommages périphérique, la perte de sang minime, un taux élevé de survie à long terme, et le volume de l'infarctus cohérent en rapport avec la population clinique humaine.

Permanent occlusion des vaisseaux cérébraux<em&gt; Via</em&gt; Double ligature et Transection

Différents modèles murins de l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) sont largement utilisés dans les recherches sur le cerveau expérimentale. Ici, nous démontrons le modèle de transcrânienne OAMC distale permanente qui produit infarctus cortical cohérente d'une taille correspondant à des dommages imposée par la majorité des accidents ischémiques cérébraux humains.

Modélisation des maladies chez les souris: Coagulation permanente de l&#39;artère cérébrale moyenne distale

Différents modèles d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAo) sont utilisés dans la recherche expérimentale sur les accidents vasculaires cérébraux. Ici, un modèle expérimental d’AVC de MCAo transitoire via l’artère carotide externe (ECA) est décrit, qui vise à imiter l’AVC humain, dans lequel le thrombus cérébrovasculaire est enlevé en raison d’une lyse spontanée du caillot ou d’un traitement.

Modélisation de l’AVC chez la souris: occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne via l’artère carotide externe

Ce protocole démontre un modèle unique d’AVC chez la souris avec un infarctus de taille moyenne et un excellent taux de survie. Ce modèle permet aux chercheurs en AVC préclinique de prolonger la durée de l’ischémie, d’utiliser des souris âgées et d’évaluer les résultats fonctionnels à long terme.

Un modèle modifié d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne transcrânienne pour étudier les résultats de l’AVC chez des souris âgées

Ce protocole décrit le modèle d’ischémie cérébrale focale transitoire chez la souris par occlusion intraluminale de l’artère cérébrale moyenne. De plus, des exemples d’évaluation des résultats sont présentés à l’aide de l’imagerie par résonance magnétique et de tests comportementaux.

Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne de l’AVC

Le protocole actuel décrit un modèle de rat d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne qui préserve la structure anatomique des vaisseaux cérébraux sans causer de dommages.

Un modèle chez le rat d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne sans endommager la structure anatomique des vaisseaux cérébraux

L’objectif de cette étude était d’établir une méthode reproductible pour réaliser une craniectomie suivie d’une obstruction permanente et sélective de l’artère cérébrale moyenne chez le rat, pour une application dans des études expérimentales sur les déficits de la mémoire motrice et spatiale.

Occlusion sélective et permanente de l’artère cérébrale moyenne chez les rats : une approche expérimentale pour étudier les déficits de la mémoire motrice et spatiale

Découvrez l'occlusion transitoire de l'artère cérébrale moyenne chez les rats P10, un modèle d'AVC néonatal physiologiquement précis. Cette méthode chirurgicale permet d'étudier les mécanismes de lésion cérébrale ischémique et d'évaluer des stratégies thérapeutiques.

Transitoire cérébrale moyenne Artère Occlusion Modèle de l'AVC néonatale chez les rats P10

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