Examiner Assemblée protéasome avec recombinant Archaeal Protéasomes et dénaturant PAGE: le cas pour une approche combinée

Ce protocole utilise à la fois sous-unité coexpression et sous-unité postlysis mélange pour un examen plus approfondi de l'ensemble de protéasome recombinant.

L’objectif global de cette expérience est d’analyser l’assemblage d’un complexe multiprotéique tel que le protéasome, en utilisant des sous-unités recombinantes et l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide non dénaturante, ou PAGE. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du protéasome, telles que les espèces intermédiaires rencontrées le long de la voie d’assemblage de ce complexe protéique. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet un criblage rapide de l’assemblage par deux approches parallèles, permettant la détection d’intermédiaires sur et hors voie. Cette procédure commence par l’expression bactérienne telle que décrite dans le protocole textuel. Pour effectuer une lyse bactérienne, décongelez la palette cellulaire induite co-exprimant la combinaison souhaitée de sous-unités de protéasome, sur de la glace pendant cinq minutes. Une fois décongelée, remettre la palette en suspension dans 600 microlitres de tampon de lyse.Incuber la suspension à 30