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DOI: 10.3791/54880-v
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Ce protocole présente un procédé pour la récupération morphologique des neurones corrigés lors des enregistrements électrophysiologiques en utilisant le remplissage de la biocytine et de post-traitement immunohistochimique ultérieure. Nous montrons que les sections de biocytin rempli d'épaisseur qui ont été colorées et sous une lamelle peuvent être recolorées avec un deuxième jours ou des mois d'anticorps primaires plus tard.
L’objectif de ce protocole est de présenter une méthode efficace d’identification des neurones patchés lors d’enregistrements électrophysiologiques à l’aide de la biocytine et de l’immunomarquage pour la récupération de la morphologie avant la recoloration avec des anticorps spécifiques afin de déterminer l’identité neurochimique. Cette méthode décrit donc une étape importante nécessaire pour étudier la diversité de la structure et de la fonction neuronales. C’est essentiel pour comprendre leur rôle dans les réseaux cérébraux.
Le principal avantage de l’utilisation d’une technique de traitement séquentiel, est qu’elle élimine la perte de données due à l’incapacité à récupérer la morphologie. Cela aide donc également à guider les marqueurs neurochimiques à tester dans ces cellules. Bien que cette méthode soit décrite pour la récupération morphologique des cellules en lames épaisses, elle peut également être appliquée aux lames minces et sur des échantillons préalablement colorés et montés.
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