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DOI: 10.3791/54968-v
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Ici, nous démontrons comment les monocytes sont isolés par séparation par billes magnétiques des cellules mononucléées du sang périphérique après centrifugation par gradient de densité du sang anticoagulé humain. Après une incubation de 5 jours, les monocytes humains sont différenciés en cellules dendritiques immatures et sont prêts pour des procédures expérimentales dans un cadre non clinique.
L’objectif global de cette technique de séparation des billes magnétiques CD14 est d’isoler les monocytes du sang pour leur différenciation ultérieure en cellules dendritiques ou macrophages in vitro. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’immunologie sur la reconnaissance, le traitement et la présentation d’agents pathogènes ou d’antigènes par les cellules dendritiques. Le principal avantage de cette procédure d’isolement est qu’il est possible d’obtenir une population de monocytes purs de 98 à 99 %.
Karolin Thurnes, une technicienne de notre groupe de travail, fera la démonstration de la procédure. Commencez par répartir le volume de la poche de sang entre des tubes à centrifuger stériles de 50 millilitres en fonction de la quantité de sang reçue. Ajustez le volume final dans chaque tube à 50 millilitres avec du PBS Dulbecco stérile si nécessaire et centrifugez les échantillons.
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