Modèle de souris pour une Transplantation du pancréas en utilisant une Technique mis à jour le brassard

Je m’appelle Benno Cardini, du Laboratoire de recherche Daniel Swarovski du Département de chirurgie viscérale, de transplantation et thoracique de l’Université de médecine d’Innsbruck. Aujourd’hui, nous allons vous montrer un modèle de souris pour la transplantation de pancréas à l’aide d’une technique de brassard modifiée. Anesthésier l’animal donneur avec une injection intrapéritonéale de kétamine et de xylazine, et raser la région abdominale.

Placez ensuite le receveur sur un champ opératoire en position couchée et frottez la région chirurgicale trois fois avec de la chlorhexidine. Maintenant, effectuez une laparotomie médiane de la région pubienne à la xiphoïde et élargissez l’incision sous-costale des deux côtés pour obtenir une meilleure vue sur le champ opératoire. Ensuite, extériorisez les viscères du côté gauche et injectez de l’héparine dans la veine cave infrarénale.

À l’étape suivante, identifiez l’aorte abdominale proximale au croisement de la veine rénale gauche, sapez l’aorte et attachez-la à cet endroit. Maintenant, passez au hile hépatique, identifiez et disséquez le canal cholédoque près du foie, et ligaturez-le près du pancréas. Enfin, transectez le canal cholédoque au-dessus de la ligature.

Ensuite, disséquez la veine porte près du foie pour obtenir une longueur suffisante pour une anastomose veineuse. À titre d’astuce, laissez un petit morceau de foie sur la veine porte pour une identification ultérieure plus facile. Ensuite, sapez la veine rénale gauche dans le tissu périaortique et ligaturez-la.

Transect ensuite la veine rénale et le tissu périaortique, en restant du côté droit de la ligature. Ensuite, disséquez brutalement l’aorte abdominale du tronc cœliaque au diaphragme, sapez l’aorte près du diaphragme et transectez-la à ce moment-là. Ensuite, identifiez et coagulez toutes les branches lombaires et transectez-les.

Traversez maintenant l’aorte sous la ligature précédemment définie. Perfuser maintenant le pancréas via le patch aortique avec une solution de perfusion glacée jusqu’à ce que vous voyiez l’effluent sortir de la veine porte. En haut, vous pouvez voir la veine porte perfusée et en dessous l’aorte perfusée.

Maintenant, replacez les viscères dans la cavité péritonéale et séparez progressivement le pancréas de l’intestin à l’aide de 8-0 ligatures en soie. En commençant par la région postpylorique, miner le duodénum deux fois et tirer 8-0 ligature de soie à travers elle. Ensuite, ligaturez-le et séparez nettement le pancréas du duodénum.

Cette approche est effectuée à plusieurs reprises jusqu’à ce qu’elle atteigne le ligament de Treitz. Il est essentiel de ne pas endommager le duodénum car cela exclurait le greffon des expériences en raison d’une éventuelle contamination. Une fois que le pancréas a été complètement séparé du duodénum, passez au mésentère, sapez-le et ligaturez-le, puis transectez-le.

Par analogie avec les étapes précédentes, séparez le pancréas du côlon transverse en le sapant, en le ligaturant et enfin en le transectant. Maintenant, en utilisant la même approche, séparez le pancréas de la région biliaire en le disséquant brusquement après la ligature. Par la suite, disséquez brusquement le pancréas de l’estomac.

Identifiez l’artère gastrique gauche, ligaturez-la et transectez-la. À la fin, retirez le pancréas avec la rate attachée et mettez-le dans une solution de reperfusion glacée jusqu’à une nouvelle implantation. Utilisez la rate comme poignée.

Par analogie avec le donneur, anesthésez l’animal receveur avec une injection intrapéritonéale de kétamine et de xylazine et rasez la région cervicale. Ensuite, placez l’animal donneur sur le terrain opératoire en position couchée et frottez la région cervicale trois fois avec de la chlorhexidine. Ensuite, effectuez une incision cutanée de l’incision jugulaire à l’angle mandibulaire droit.

Ensuite, identifiez toutes les branches latérales de la veine jugulaire externe droite, mobilisez-les, sapez-les et divisez-les après la coagulation bipolaire. Ensuite, saisissez le pôle inférieur de la glande sous-mandibulaire droite, soulevez-la crânienne et disséquez-la après coagulation bipolaire de ses vaisseaux nourriciers. Transectez maintenant toutes les branches médiales de la veine jugulaire externe droite après une coagulation bipolaire.

Lister la veine jugulaire externe deux fois plus crânienne que possible et la répartir entre les ligatures. Passez l’extrémité proximale de la veine jugulaire externe à travers un brassard en polyéthylène. Ici, il est important que la poignée du brassard fasse face au chirurgien opérateur.

Comme étape suivante, placez la pince veineuse microvasculaire venant du côté latéral. Maintenant, humidifiez la veine avec de l’héparine, retirez la ligature et tirez doucement la veine sur le brassard en polyéthylène. À la fin, fixez la veine sur le brassard avec un 8-0 circulaire Ligature de soie avec un nœud à l’arrière et trois à l’avant.

Pour accéder à l’artère carotide commune droite, mobiliser et transecter le muscle sternocléido-mastoïdien droit après une coagulation proximale et distale. Par la suite, mobilisez doucement l’artère carotide commune, en prenant soin de ne pas endommager les structures adjacentes telles que le nerf vagal. Par analogie avec la veine, ligaturez l’artère carotide commune deux fois, aussi crânienne que possible, et divisez-la entre les ligatures.

Passez maintenant le vaisseau à travers le brassard artériel. Enfin, fixez le brassard artériel avec la pince microvasculaire, en venant du côté médial. Ensuite, retirez la ligature et élargissez la lumière de l’artère à l’aide de dilatateurs de vaisseaux.

Après un élargissement suffisant de la lumière, tirez l’artère sur le brassard artériel. À la fin, par analogie avec la veine, fixez l’artère avec le 8-0 Ligature de soie. Ici, vous pouvez voir la veine et l’artère réparées pour l’anastomose veineuse artérielle.

Pour l’implantation, placez le greffon sur un As humidifié dans la région cervicale. Ensuite, tirez la veine porte à travers un 8-0 Boucle de ligature en soie, raccourcissez la veine pour une anastomose sans tension et tirez ensuite la veine porte sur le brassard veineux. Enfin, fixez la veine avec un 8-0 circulaire Ligature de soie.

Par analogie avec la veine, passez le moignon aortique à travers une boucle de ligature et raccourcissez l’aorte. Ensuite, tirez l’aorte sur le brassard artériel et fixez-la enfin avec un 8-0 circulaire Ligature de soie. Avant la reperfusion, identifiez les vaisseaux spléniques et ligaturez-les et enfin disséquez-les nettement et retirez la rate.

Pour la reperfusion, retirez d’abord la pince veineuse, puis la pince artérielle. Une reperfusion adéquate du greffon montre une pulsation visible de l’artère et une couleur rosâtre de l’ensemble du greffon. Humidifiez le greffon avec une solution saline normothermique.

Avant la fermeture de la plaie, retirez la poignée du ballonnet veineux pour éviter un pliage du vaisseau. À la fin, fermez la plaie par suture 6-0 et injectez 0,5 millilitres de solution saline normothermique par voie sous-cutanée. Pour valider le modèle, nous avons testé la fonction endocrinienne du pancréas transplanté.

Les souris ont été rendues hypoglycémiques par un prétraitement avec la streptozotocine quatre jours avant la chirurgie et ont été considérées comme hypoglycémiques si la glycémie était supérieure à 300 milligrammes pour cent. Cette photo linéaire montre la glycémie de souris témoins vivantes non transplantées en rouge, ainsi que celle des receveurs de greffons non exposés à un temps d’ischémie froide prolongé en bleu. De plus, la glycémie des receveurs de greffes pancréatiques exposées à une ischémie froide de 16 heures est indiquée en vert.

Les souris vivantes sont restées hypoglycémiques pendant toute la période d’observation. En revanche, la transplantation de greffons pancréatiques non exposés à un temps prolongé d’ischémie à froid a entraîné une glycémie normale dans les 24 heures, confirmant la fonction endocrinienne du greffon. La transplantation de greffons exposés à un temps d’ischémie à froid de 16 heures n’a pas permis de rétablir une glycémie normale chez les receveurs.

De plus, dans ce groupe, toutes les souris ont dû être sacrifiées dans les 48 heures en raison de lésions d’ischémie et de reperfusion associées à des lésions précoces du greffon. Dans cette vidéo, nous avons présenté une méthode de transplantation de pancréas chez la souris en utilisant une technique de brassard sans suture. C’est techniquement et microchirurgicalement faisable avec d’excellents taux de réussite.

Cependant, étant donné la fibrose progressive du pancréas, due à l’occlusion du canal, nous sommes d’avis que ce modèle est le mieux adapté aux domaines de recherche axés sur les lésions précoces de reperfusion d’ischémie associées aux dommages du greffon.