Un modèle de souris syngénique rénal métastatique Carcinome cellulaire pour l'évaluation des thérapies quantitatives et longitudinales précliniques

Mise en oeuvre d'un modèle orthotopique de carcinome rénal chez les souris immunocompétentes donne le chercheur un système cliniquement pertinente définie par la présence d'une tumeur rénale et des métastases pulmonaires primaires dans le même animal. Ce système peut être utilisé pour tester précliniquement une variété de traitements in vivo.

L’objectif global de cette procédure est d’établir des tumeurs rénales orthotopiques de souris par l’implantation intrarénale de cellules tumorales pour l’étude de la croissance tumorale et des métastases et de l’efficacité des thérapies antitumorales. Cette méthode peut être utilisée pour répondre à des questions clés dans le domaine de l’oncologie urologique, telles que l’efficacité d’une nouvelle thérapie dans un modèle préclinique de cancer du rein. Le principal avantage de cette technique est que l’implantation d’une tumeur intrarénale établit une tumeur rénale primitive métastasante du poumon, imitant la pathogenèse clinique du carcinome rénal.

Pour préparer les cellules tumorales de Renca, détachez d’abord la culture cellulaire avec 0,25 % de trypsine et de HBSS après un rinçage au PBS. Neutralisez la réaction après cinq minutes avec le milieu RPMI complet. Transférez les cellules dans un tube conique pour la centrifugation et remettez le granulé en suspension dans du HBSS frais.

Après avoir compté, ajustez le volume à deux fois dix à six cellules par millilitre de HBSS et aspirez les cellules dans une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 18. Ensuite, placez un champ chirurgical stérile sur un coussin chauffant et confirmez le niveau approprié de sédation par pincement des orteils. Retirez les poils du flanc gauche de la souris et appliquez une pommade vétérinaire sur les yeux.

Ensuite, frottez le site d’implantation avec un antiseptique iodé à 5 % de povidone et utilisez un scalpel stérile pour faire une incision unique d’un à un centimètre et demi sur le flanc gauche, en prenant soin de ne pas pénétrer dans le péritoine. À l’aide de ciseaux, séparez le derme du péritoine, en tamponnant le site d’incision avec de la gaze de coton stérile pour éliminer tout sang. Saisissez ensuite la tête avec la main gauche et soutenez le flanc avec la main droite pour localiser la rate à travers le péritoine.

À l’aide d’un doigt de la main droite, palpez la souris par le dessous. Le rein devrait devenir visible. En gardant une prise ferme sur l’animal pour fournir une tension à travers le péritoine et les reins, demandez à un assistant de délivrer lentement 0,1 millilitre de cellules Renca à travers le péritoine intact jusqu’au centre du rein.

Maintenez l’aiguille en place pendant cinq à 10 secondes pour réduire le reflux des cellules. Ensuite, fermez l’incision avec une fine couche d’adhésif tissulaire cyanoacrylate. Au point final de l’expérience, utilisez des ciseaux pour faire une incision médiane, en commençant par le milieu de l’abdomen à travers la cage thoracique, le cou et les glandes salivaires.

À l’aide de ciseaux et de pinces, retirez soigneusement les côtes sans compromettre le tissu pulmonaire et retirez le tissu conjonctif pour exposer la trachée. Remplissez une seringue de trois millilitres équipée d’une aiguille de calibre 18 avec 10 % d’encre de Chine et de PBS. Ensuite, à l’aide d’une pince, enfilez soigneusement une suture en soie sous la trachée, puis faites un nœud lâche.

Ensuite, insérez soigneusement l’aiguille dans la trachée et gonflez lentement les poumons avec un millilitre à un millilitre et demi de la solution d’encre de Chine. Tirez le nœud autour de la trachée pour inhiber le reflux de l’encre, puis retirez l’aiguille et coupez soigneusement le tissu conjonctif pour retirer les poumons gonflés. Fixez les poumons dans un tube conique de 15 millilitres contenant cinq millilitres de solution de Fekete dans une hotte chimique à température ambiante.

Après 24 à 48 heures, retirez les poumons décolorés intacts et séparez soigneusement les lobes dans une boîte de Pétri de 35 x 10 millimètres. Comptez ensuite le nombre de nodules tumoraux blancs au microscope à dissection. Une implantation réussie de cellules Renca intrarénales chez la souris entraîne le développement d’une tumeur dans le rein et des métastases dans les poumons, les animaux porteurs de tumeurs présentant une charge tumorale robuste, mesurée par l’augmentation du poids des reins implantés dans la tumeur.

Comme observé, les tumeurs Renca peuvent être identifiées par coloration immunohistochimique pour la cytokératine huit et 18. L’implantation d’une lignée cellulaire Renca exprimant la luciférase permet de suivre la charge tumorale dans le rein et les métastases dans le poumon par imagerie bioluminescente, comme le confirme l’inflation pulmonaire India Link. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de cinq minutes par souris si elle est correctement exécutée.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’identifier clairement le rein à travers le péritoine pour assurer une implantation précise de la tumeur intrarénale. À la suite de cette procédure, d’autres méthodes, telles que les tests précliniques de médicaments, peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires, telles que dans quelle mesure le nouveau médicament affecte-t-il la croissance ou les métastases des tumeurs intrarénales ? Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer l’implantation de cellules tumorales intrarénales pour établir des tumeurs rénales orthotopiques chez la souris.

N’oubliez pas que travailler avec des animaux vivants et des instruments chirurgicaux peut être dangereux et que des précautions, telles que le respect des directives institutionnelles sur la manipulation des animaux et le maintien d’une zone chirurgicale et d’instruments stériles, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.