Name: Production et administration de la thérapeutique mésenchymateuses souches / cellules stromales (MSC) Spheroids apprêté dans les cultures 3-D dans des conditions dXeno-libres (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Découvrez la production de sphéroïdes de cellules souches mésenchymateuses en conditions sans xénogreffe pour améliorer la rétention et la fonctionnalité cellulaire. Ces protocoles avancent la médecine régénérative.

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Ce travail a été financé en partie par des P40RR17447 de subvention de l’Institut national de la santé et des RP150637 de prix de l’Institut de prévention et de recherche sur le cancer du Texas. Nous tenons à remercier le Dr Darwin J. Prockop pour son soutien dans le cadre du projet.

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</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Le MSC optimal pour une utilisation dans des applications cliniques et de recherche devrait être très active pour maximiser leur profit, et préférentiellement préparé dans des conditions XF chimiquement définis pour réduire au minimum la fourniture d&#39;antigènes potentiels de moyenne composants xénogéniques tels que FBS. Dans les protocoles décrits ici, nous avons montré des méthodes pour 1) activer MSCs en culture en 3D par la formation de sphéroïdes, 2) réaliser l&#39;activation 3D des cellules souches mésenchymateu...

Mésenchymateuses souches / cellules stromales (CSM) ont montré un grand potentiel pour diverses approches de la médecine régénératrice. MSC ont été initialement isolé en tant que composant de stroma de moelle osseuse , mais elles ont été obtenues à partir de nombreux autres tissus adultes, y compris le tissu adipeux 1, 2, 3. Fait intéressant, la méthode d&#39;isolement principale englobe la propriété remarquable de cellules souches mésenchymateuses à adhérer étroitement sur une culture de tissu en plastique en présence de sérum de fœtus bovin (FBS). Bien que cette technique d&#39;isolement classique permet une extension aisée et rapide des cellules souches mésenchymateuses en deux dimensions (2D) la culture, il est également très artificielle et ne tient pas compte l&#39; importance de l&#39;environnement naturel en trois dimensions (3D) conduisant à une perte potentielle d&#39;importantes caractéristiques cellulaires 4, 5 , 6. Par conséquent, l&#39;étude des cellules souches mésenchymateuses dans des cultures 3D, quisont plus physiologique que les cultures 2D traditionnels, a vu le jour à la recherche des caractéristiques de MSC &quot;perdus / diminués». En outre, un grand intérêt a augmenté pour identifier les conditions (XF) gratuit xéno-chimiquement défini pour la culture et l&#39;activation MSC, et donc rendre les cellules plus favorable pour les applications cliniques. De nombreuses études ont été publiées démontrant la culture 3D de MSCs tant en biomatériaux et que des agrégats ou sphéroïdes sphériques. MSCs en biomatériaux ont été initialement conçus pour les approches d&#39;ingénierie tissulaire pour remplacer des tissus endommagés par des échafaudages de cellules ensemencées, alors que les cultures sphéroïde de MSCs ont été considérés comme un moyen de comprendre le comportement de MSC in vivo après l&#39; administration des cellules pour des thérapies dans les essais pré-cliniques ou cliniques 4, 5, 7. Fait intéressant, la forme MSCs sphéroïdes spontanément lorsque l&#39;adhésion à la culture de tissus en plastique ne sont pas autorisés8, 9, 10. Traditionnellement, l&#39;agrégation cellulaire a été facilitée par des procédés de ballon spinner ou des techniques d&#39;incrustation liquides, les méthodes utilisées initialement dans la biologie du cancer dans les efforts visant à essayer d&#39;imiter le microenvironnement tumoral. Plus récemment, d&#39; autres méthodes sont apparues qui démontrent l&#39; agrégation des cellules dans des boîtes de culture pré-enduit avec des produits chimiques spécifiques pour empêcher la cellule-plastique adhérence 4, 5, 6. L&#39;un des plus simples et les plus économiques méthodes pour générer des sphéroïdes MSC est à la culture les en gouttes suspendues, une technique qui a été souvent utilisé pour produire des corps embryoïdes à partir de cellules souches embryonnaires. La pendaison technique de culture de goutte, l&#39;adhérence des cellules à la matière plastique de culture de tissu est empêchée en mettant en suspension les cellules dans une goutte de milieu sur le côté inférieur d&#39;un couvercle de boîte de culture tissulaire et en laissant la gravité pour faciliter AGGREG cellulairetion dans le sommet de la goutte. La taille des sphéroïdes peut être facilement manipulée en changeant la concentration des cellules ou du volume de la goutte, ce qui rend les cultures suspendues goutte particulièrement facile à contrôler. Les premières études sur la culture 3D de MSCs ont démontré des différences radicales dans les caractéristiques des cellules en 3D par rapport à leurs homologues 2D 6, 8, 9. Dans le même temps, des rapports ont démontré que les effets bénéfiques des cellules souches mésenchymateuses in vivo comptaient sur leur capacité à devenir activés par des signaux micro-environnementales et, en réponse, pour produire des anti-inflammatoires et immunomodulateurs 11 facteurs. Fait intéressant, la plupart de ces facteurs, tels que la Prostaglandine E2 (PGE2), d&#39;une tumeur gène du facteur stimulée nécrose 6 (TSG6) et le facteur de croissance des hépatocytes (HGF) ont été produits en quantités beaucoup plus importantes de sphéroïdes MSC que MSCs 2D traditionnels ouvrant la voie à la idée deen utilisant des cultures 3D pour activer les cellules 8, 12, 13. De plus, l&#39; activation de gènes dans des cultures 3D est apparu récapituler les mécanismes, au moins en partie, de l&#39; activation des cellules après injection à des souris 12. En activant MSCs avant leur utilisation dans des expériences, les effets des cellules peuvent être longs et plus important que l&#39;effet de MSC traditionnelle in vivo est souvent retardé et transitoire, et peut être décrit comme &quot;hit and run&quot;. Au cours des dernières années, des études fonctionnelles importantes en utilisant sphéroïdes MSC ont démontré qu&#39;ils peuvent supprimer les réponses inflammatoires et de moduler l&#39; immunité in vivo en influençant les cellules effectrices telles que les macrophages, les cellules dendritiques, les neutrophiles et les cellules T faisant sphéroïdes une forme attrayante de MSCs apprêtées 2 , 3. En outre, la production de molécules anticancéreuses, telles que interleukin-24 (IL-24) et la nécrose de la tumeur lié au facteur de ligand induisant l&#39; apoptose (TRAIL) sont augmentés dans des cultures 3D de cellules souches mésenchymateuses par rapport à la monocouche MSCs, un phénomène qui pourrait être exploité pour la thérapie ciblée des cancers 8, 10, 14. Comme la culture de MSC traditionnelle exigeait non seulement l&#39;utilisation de la culture de tissus en plastique, mais aussi FBS, un autre obstacle pour rendre sphéroïdes MSC plus favorable pour une utilisation clinique avait à surmonter. Pour faire face à cet obstacle, nous avons récemment montré la formation de sphéroïdes MSC dans des conditions de XF spécifiques définis chimiquement et établi que les sphéroïdes MSC résultants ont été activés pour produire les mêmes molécules anti-inflammatoires et anti-cancéreuses que les sphéroïdes générés dans des conditions avec du FBS 14. Ici, ces résultats sont présentés dans plusieurs protocoles détaillés qui démontrent la génération de cellules souches mésenchymateuses pré-activé dans les cultures 3D en utilisant XFmédias. En outre, les protocoles sont présentés qui décrivent des moyens efficaces pour évaluer les niveaux des MSCs d&#39;activation en ce qui concerne leurs effets anti-inflammatoires, immunomodulatrices et anti-cancéreuses, ainsi qu&#39;un procédé pratique pour livrer les sphéroïdes intacts dans des souris.

<table><tbody><tr><td>MEM-&alpha ; (Minimal, Essentiel, Moyen, Alpha)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>12561049 ; 12561056 ; 12561072</td><td>milieu essentiel minimal pour la préparation du milieu de croissance MSC (CCM)</td></tr><tr><td>FBS (sérum fœtal bovin), premium select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11595 ; S11510 ; S11550 ; S11595-24</td><td>composant d’un milieu de culture complet pour tous les types de cellules</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>25030081 ; 25030149 ; 25030164</td><td>composant d’un milieu de culture complet pour tous les types de cellules</td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>15070063</td><td>composant d’un milieu de culture complet pour tous les types de cellules</td></tr><tr><td>Unités de filtre de stérilisation, 0,22 & micro ; m membrane PES</td><td>MilliporeSigma</td><td>SCGPU01RE ; SCGPU02RE ; SCGPU05RE ; SCGPU10RE ; SCGPU11RE</td><td>milieu de stérilisation</td></tr><tr><td>150 mm boîte de culture cellulaire</td><td>Nunc</td><td>D8554&nbsp ; Culture cellulaire SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Forma Incubateur humidifié CO2</td><td>Thermo Fisher</td><td>Model 3110</td><td>Incubation de cellules cultivées</td></tr><tr><td>Passage précoce MCS</td><td>Centre pour la préparation et la distribution de cellules souches adultes au Texas A& M Health Science Center Collège de médecine Institut de médecine régénérative à Scott & Préparation NA blanche</td><td></td><td>de cultures 2D et 3D de milieux</td></tr><tr>chauffants à<td>bain d’eau</td><td>MSCs VWR</td><td>89501-468</td><td>à 37 &deg ; C</td></tr><tr><td>Pipettes</td><td>Eppendorf</td><td>492000904</td><td>manipulation manuelle des liquides</td></tr><tr><td>Pipete-Aid</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>4-000-300</td><td>manipulation des pipettes sérologiques</td></tr><tr><td>stériles Costar pipette sérologique stérile (5, 10, 25 et 50 ml)</td><td>Corning</td><td>4487 ; 4101 ; 4251 ; 4490</td><td>manipulation des liquides</td></tr><tr><td>PBS (solution saline tamponnée au phosphate), pH 7,4</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>10010023 ; 10010072 ; 10010031; 10010049</td><td>traitement de la culture cellulaire</td></tr> Solution de <tr><td>trypsine/EDTA à 0,25 %</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>25200056 ; 25200072 ; 25200114</td><td>levage des cellules adhérentes et dispersion des agrégats cellulaires</td></tr><tr><td>15 ml Tube conique</td><td>Corning/BD Falcon</td><td>Centrifugation</td><td>à 352097</td> cellules</tr><tr><td>50 ml Tube conique</td><td>Corning/BD Falcon</td><td>Centrifugation</td><td>à 352098</td> cellules</tr><tr><td>Eppendor centrifugeuse réfrigérée</td><td>Eppendorf/Fisher</td><td>Scientific Model 5810R</td><td>centrifugation cellulaire</td></tr><tr><td>hémocytomètre</td><td>Fisher Scientific</td><td>26716</td><td>comptage cellulaire</td></tr><tr><td>trypan blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154 SIGMA</td><td>exclusion des cellules mortes lors du comptage cellulaire dans l’hémacytomètre</td></tr><tr><td>Defined xenofree MSC medium-1 (XFM-1)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>A1067501</td><td>Milieu sans xéno spécialement formulé pour la croissance et l’expansion des cellules souches mésenchymateuses humaines</td></tr><tr><td>Défini milieu MSC xénolibre-2 (XFM-2)</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>5420</td><td>Milieu défini, sans xénogramme pour cellules souches mésenchymateuses humaines</td></tr><tr><td>HSA (albumine sérique humaine)</td><td>Gemini</td><td>800-120</td><td>Composant du milieu CSM sans xéno</td></tr><tr><td>rHSA (albumine sérique humaine recombinante)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9731&nbsp ; SIGMA</td><td>Composant d’un milieu MSC sans xéno</td></tr><tr><td>Mini Kit d’isolement total de l’ARN</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>Extraction de l’ARN total</td></tr><tr><td>Qiashredder</td><td>Qiagen</td><td>79654</td><td>Homogénéisation de l’échantillon avant l’extraction de l’ARN total</td></tr><tr><td>DNase sans ARNase Set&nbsp ;</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Élimination de l’ADN sur colonne lors de l’extraction totale de l’ARN</td></tr><tr><td>&bêta ;-mercaptoéthanol&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250&nbsp ; ALDRICH</td><td>Inhibition des ARNs dans le tampon RLT</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>97043-562</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotomètre</td><td>Biorad</td><td>NA</td><td>Concentration et qualité de l’ARN Transfert</td></tr><tr>de<td>l’ADNc Kit de transcription inverse de l’ADNc ThermoFisher</td><td>/Applied Biosystems</td><td>4368814</td><td>transcription de l’ARN total en ADNc Tests d’expression</td></tr><tr><td>génique</td><td>ThermoFisher/Applied Biosystems</td><td>varie</td> la <td>combinaison amorce/sonde pour la PCR en temps réel PCR</td></tr><tr><td>universelle rapide Master Mix</td><td>ThermoFisher/Applied Biosystems</td><td>4352042 ; 4364103 ; 4366073 ; 4367846</td><td>master mix pour réaction PCR en temps réel</td></tr><tr><td>Système de PCR en temps réel (ABI Prism 7900 HT Sequence Detection System)</td><td>ABI Prizm</td><td>NA</td><td>PCR en temps réel</td></tr><tr><td>Tube à centrifuger de 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td>centrifugation cellulaire, collecte et stockage d’échantillons</td></tr> <tr><td>(-80 &deg ; C) congélateur</td><td>Thermo Fisher</td><td>Modèle Thermo Forma 8695</td><td>stockage d’échantillons</td></tr><tr><td>PGE2 (Prostaglandine E2) ELISA Kit</td><td>R& D Systems</td><td>KGE004B</td><td>estimation de la concentration de cytokines dans l’échantillon</td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco' s medium Eagle modifié)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>10566-016 ; 10566-024 ; 10566-032</td><td>milieux de culture de macrophages</td></tr><tr><td>J774 macrophages de souris</td><td>ATCC</td><td>TIB-67</td> lignée <td>cellulaire de macrophages de souris</td></tr><tr><td>Plaque à 12 puits</td><td>Corning</td><td>3513</td><td>in vitro stimulation des macrophages</td></tr><tr><td>LPS (lipopolysaccharide)</td><td>Sigma-aldrich</td><td>L4130</td><td>in vitro stimulation des macrophages</td></tr><tr><td>Souris TNF-a Kit ELISA</td><td>R& D Systems</td><td>MTA00B</td><td>estimation de la concentration de cytokines dans l’échantillon</td></tr><tr><td>Souris IL-10 (interleukine 10) kit ELISA</td><td>R& D Systems</td><td>M1000B</td><td>estimation de la concentration de cytokines dans le milieu de l’échantillon</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>11875-085</td><td>milieu de culture de splénocytes</td></tr><tr><td>souris BALB/c</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>651</td><td>in vivo livraison de sphéroïdes ; préparation de splénocytes</td></tr><tr><td>Anti-souris CD3e Functional Grade</td><td>Purified eBioscience</td><td>145-2C11</td><td>in vitro stimulation splénocytaire</td></tr><tr><td>70 &mu ; crépine M&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>Préparation des splénocytes</td></tr><tr><td>Solution de lyse des globules rouges (1x)</td><td>Affymetrix eBioscience</td><td>00-4333</td><td>élimination des globules rouges lors de l’isolement des splénocytes</td></tr><tr><td>Souris IFN-&#947 ; (interféron gamma) Kit ELISA</td><td>R& D Systems</td><td>MIF 00</td><td>estimation de la concentration de cytokines dans l’échantillon</td></tr><tr><td>de cellules cancéreuses de la prostate LNCaP&nbsp ;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1740</td><td>étudie l’effet des CSM 3D sur les lignées cellulaires cancéreuses in vitro</td></tr>Kit <tr><td>de test de prolifération cellulaire basé sur l’ADN</td><td>ThermoFisher</td><td>C7026</td><td>Mesure du nombre de cellules basée sur le contenu</td></tr><tr><td>en ADN NaCl</td><td>Sigma-Aldrich S5150</td><td></td><td>composant du réactif de lyse</td></tr><tr><td>EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique)</td><td>ThermoFisher</td><td>FERR1021</td><td>chélateur de calcium, composant du réactif de lyse</td></tr><tr><td>Rnase A</td><td>Qiagen</td><td>19101</td><td>Dégradation de l’ARN pour la mesure de l’ADN</td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques multimode basé sur un filtre</td><td>BMG Technology</td><td>NA</td><td>Dosages de microplaques (ELISA, quantification cellulaire, etc.)</td></tr><tr><td>HBSS (solution saline équilibrée de Hanks), pas de calcium, pas de magnésium, pas de rouge de phénol</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>14175079</td><td>résurgence des sphéroïdes MSC avant les injections in vivo</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>Anesthésie pour les injections in vivo</td></tr><tr><td>Oxygène, gaz comprimé</td><td>Praxair</td><td>NA</td><td>Pour une utilisation avec l’isoflurane</td></tr><tr><td>Thermo Forma BSL-2</td><td>armoire Thermo Fisher</td><td>Modèle 1385</td><td>Culture cellulaire stérile</td></tr><tr><td>Sécurité I.V. cathéter/aiguille stiletto, 20 G, 1 pouce</td><td>Terumo</td><td>SR*FNP2025</td><td>Administration de shpéroïdes dans la cavité péritonéale</td></tr><tr><td>Embouts de micropipettes stériles</td><td>Eppendorf</td><td>varie</td><td>la manipulation des liquides/cellules</td></tr></tbody></table>

production et administration de la thérapeutique mésenchymateuses souches / cellules stromales (msc) spheroids apprêté dans les cultures 3-d dans des conditions d&#39;xeno-libres

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell (MSC) Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

cellules stromales souches / mésenchymateuses (CSM) sont très prometteurs en bioingénierie et la médecine régénérative. MSCs peuvent être isolés à partir de tissus adultes multiples par leur forte adhérence à la culture tissulaire en plastique, puis encore développés in vitro, le plus souvent à l&#39; aide de sérum bovin fœtal (FBS). Depuis FBS peut provoquer des MSCs pour devenir immunogène, sa présence dans les cultures MSC limite les applications cliniques et expérimentales des cellules. (XF) médias libres xéno-Par conséquent, les études employant chimiquement définis pour les cultures MSC sont extrêmement précieux. De nombreux effets bénéfiques des cellules souches mésenchymateuses ont été attribuées à leur capacité à réguler l&#39;inflammation et l&#39;immunité, principalement par la sécrétion de facteurs immunomodulateurs tels que le facteur stimulée par le gène de nécrose tumorale 6 (TSG6) et de la prostaglandine E2 (PGE2). Cependant, MSCs nécessitent une activation pour produire ces facteurs et puisque l&#39;effet des cellules souches mésenchymateuses est souvent transitoire, un grand intérêt a émergé pour découvrir des moyens de pré-activation des cellules prior pour leur utilisation, ce qui élimine le temps de retard pour l&#39; activation in vivo. Nous présentons ici des protocoles pour activer efficacement ou MSCs premiers en trois dimensions (3D) cultures dans des conditions XF définies chimiquement et d&#39;administrer ces MSCs pré-activé in vivo. Plus précisément, nous décrivons d&#39;abord les méthodes pour générer MSC sphérique micro-tissus ou «sphéroïdes» en gouttes suspendues à l&#39;aide de moyen XF et démontrer comment les sphères et milieu conditionné (CM) peuvent être récoltées pour diverses applications. Deuxièmement, nous décrivons les écrans d&#39;expression des gènes et in vitro des tests fonctionnels pour évaluer rapidement le niveau d&#39;activation MSC en sphéroïdes, mettant l&#39; accent sur le potentiel anti-inflammatoire et anti-cancer des cellules. En troisième lieu , on décrit une nouvelle méthode pour injecter des sphéroïdes intacts MSC dans le péritoine de souris pour tester in vivo l&#39; efficacité. Dans l&#39;ensemble, les protocoles ici à surmonter des défis majeurs de l&#39;obtention de cellules souches mésenchymateuses pré-activé sous XF con défini chimiquementconditions et fournir un système flexible pour administrer sphéroïdes MSC pour les thérapies.

Dans les travaux en cours, suspendus cultures de chute ont été utilisées pour générer des micro-tissus sphériques compacts ou «sphéroïdes» de MSCs activées dans des conditions XF. La feuille de route d&#39; investigation sur la figure 1 montre que les CSM sont encouragés à auto-assembler en sphéroïdes lorsqu&#39;il est suspendu dans la pendaison gouttes pendant 72 heures, après quoi les sphéroïdes, ou le CM chargés de facteurs thérapeutiques sphère dérivés, peuvent être ...

Le potentiel thérapeutique des cellules souches/stromales mésenchymateuses (CSM) est bien documenté, mais la meilleure méthode de préparation des cellules pour les patients reste controversée. Dans ce document, nous communiquons des protocoles pour générer et administrer efficacement des agrégats sphériques thérapeutiques ou « sphéroïdes » de CSM amorcés dans des conditions exemptes de xénogrammes pour des applications expérimentales et cliniques.

Production et administration de la thérapeutique mésenchymateuses souches / cellules stromales (MSC) Spheroids apprêté dans les cultures 3-D dans des conditions d&#39;Xeno-libres

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) hold great promise in bioengineering and regenerative medicine. MSCs can be isolated from multiple adult tissues via ...

L'objectif général de ces expériences est de produire efficacement et d'injecter des agrégats sphériques thérapeutiques, ou sphéroïdes, de cellules souches mésenchymateuses/stromales, ou MSC, préparées dans des conditions sans composants d'origine animale, pour des applications expérimentales et cliniques. Ces méthodes peuvent aider à surmonter les principaux obstacles dans le domaine des thérapies par MSC, tels qu'une faible rétention cellulaire, une survie insuffisante et une fonctionnalité altérée, souvent observés après la transplantation de cellules dispersées et dans des conditions défavorables fréquemment associées aux lésions tissulaires.Le principal avantage de ces procédures est que les sphéroïdes de MSC peuvent être préparés, conditionnés et injectés en l'absence de produits animaux immunogènes, tels que le SFB, ce qui limite actuellement certaines applications cliniques des cellules et peut également fausser l'interprétation de certaines données précliniques. Bien que ce mécanisme puisse être très bénéfique pour médier l'efficacité basée sur les MSC, il peut également servir à comprendre la réparation tissulaire médiée par les MSC ainsi que la manière dont d'autres form

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Research

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Ce protocole décrit l'isolement et à l'expansion ultérieure des cellules stromales mésenchymateuses et les cellules endothéliales formant colonie sans l'utilisation de sérum animal pour générer des paires autologues à des fins de transplantation expérimentale.

Isolement et animale expansion sans sérum du cordon ombilical humain dérivé cellules stromales mésenchymateuses (CSM) et des cellules endothéliales progénitrices Colony Forming (CPEF)

Culture de cellules humaines mésenchymateuses stromales (CSMh) avec du sérum autologue, réduit les risques de rejet par un matériau xénogénique et d'autres effets négatifs. Elle permet aussi la récupération d'un sous-ensemble de progéniteurs mésodermiques, qui peut délivrer CSMh frais. Incorporation CSMh dans un caillot de fibrine autologue permet une manipulation facile et l'implantation chirurgicale efficace.

Mésenchymateuses stromales Culture cellulaire et livraison dans des conditions autologues: Une approche intelligente pour les applications orthopédiques

Ici, nous présentons des protocoles de culture des sphéroïdes cellulaires du ligament parodontal humain (PDL) par des films chitosan. La culture des sphéroïdes cellulaires tridimensionnels (3D) offre une alternative au système de culture de polystyrène de culture de tissu conventionnel (TCPS).

Formation de sphéroïdes cellulaires parodontaux humains sur Chitosan Films

Ici, nous présentons un protocole pour produire un grand nombre d’exosomes de qualité GMP à partir de cellules souches mésenchymateuses du liquide synovial à l’aide d’un bioréacteur 3D.

Préparation à grande échelle d’exosomes dérivés de cellules souches mésenchymateuses du liquide synovial par culture de bioréacteur 3D

Ici, nous décrivons la production à grande échelle de sphéroïdes stromaux / cellules souches (ASC) dérivés des adipeux à l’aide d’un système de pipetage automatisé pour ensemencer la suspension cellulaire, assurant ainsi l’homogénéité de la taille et de la forme des sphéroïdes. Ces sphéroïdes ASC peuvent être utilisés comme blocs de construction pour les approches de bio-impression 3D.

Production automatisée à grande échelle de sphéroïdes de cellules souches dérivées de cellules adipeuses pour la bioimpression 3D

Ici, nous présentons un protocole pour récolter les cellules adhérentes des flacons multicouches de manière semi-automatisée fermée à l’aide d’un système de centrifugation à contre-courant. Ce protocole peut être appliqué pour récolter à la fois des cellules adhérentes et des cellules en suspension à partir d’autres plates-formes d’expansion cellulaire avec peu de modifications aux étapes existantes.

Traitement des cellules souches mésenchymateuses humaines pour des applications cliniques à l’aide d’un flux de travail semi-automatisé fermé

Les produits xénogéniques (chimiques ou d’origine animale) introduits dans les étapes de préparation/manipulation de la thérapie cellulaire sont associés à un risque accru de réactivité immunitaire et de transmission pathogène chez les patients hôtes. Ici, une méthode complète sans xénogénétique pour l’isolement et l’expansion in vitro de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux est décrite.

Isolement et culture de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux à l’aide d’une méthode innovante sans xénogène pour la thérapie humaine

Un protocole est décrit pour la production de cellules dépendantes de l’ancrage micro-micro-microopérateur comme thérapies cellulaires potentielles. En ciblant un cas d’utilisation du syndrome de détresse respiratoire aiguë, un rendement cellulaire comparable et une expression génique favorable par rapport aux conditions de processus basées sur des flasques sont illustrés. Ce protocole est extensible à d’autres cellules dépendantes de l’ancrage et aux indications de cibles.

Production par microbioréacteurs de cellules stromales mésenchymateuses dépendantes de l’ancrage, prêtes au syndrome de détresse respiratoire aiguë

Nous décrivons ici des procédés pour la dissection de tissus foetaux et maternels à partir de placenta humain à terme, suivie par l'isolement et l'expansion des cellules souches / cellules stromales (MSC) à partir de ces tissus.

Isolement et expansion de mésenchymateuses cellules souches / stromales dérivées de placenta humain Tissue

Une méthode pour l' élevage Drosophila melanogaster dans des conditions axéniques et gnotobiotiques est présenté. Fly embryons sont dechorionated dans l'hypochlorite de sodium, transférés de manière aseptique à l'alimentation stérile, et élevés dans des récipients fermés. Inoculant régime alimentaire et les embryons avec des bactéries conduit à des associations gnotobiotiques, et la présence bactérienne est confirmée par plaquage du corps entier homogénats drosophile.

L&#39;élevage du Fruit Fly<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sous axéniques et gnotobiotique Conditions

Découvrez la production de sphéroïdes de cellules souches mésenchymateuses en conditions sans xénogreffe pour améliorer la rétention et la fonctionnalité cellulaire. Ces protocoles avancent la médecine régénérative.

Production et administration de la thérapeutique mésenchymateuses souches / cellules stromales (MSC) Spheroids apprêté dans les cultures 3-D dans des conditions dXeno-libres (Vidéo) | JoVE Journal

Production et administration de la thérapeutique mésenchymateuses souches / cellules stromales (MSC) Spheroids apprêté dans les cultures 3-D dans des conditions d'Xeno-libres

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