Unicellulaire profil d'expression génique utilisant FACS et qPCR avec les normes internes

L’objectif global de cette procédure est de quantifier les niveaux d’ARNm dans des cellules individuelles à l’aide de la qPCR microfluidique avec des étalons internes. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie unicellulaire, par exemple si les populations cellulaires de cellules réagissent à un stimulus de différentes manières. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut mesurer l’expression de plus de gènes que l’ARN FISH à un coût inférieur à celui de l’ARN-Seq dans des cellules uniques.

Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous explorions des protocoles permettant de mesurer l’expression génique dans des cellules uniques par qPCR microfluidique. Nous voulions modifier les méthodes existantes pour estimer plus précisément le nombre absolu de transcrits différents dans des cellules uniques. William Telford, le directeur de l’installation de cytométrie en flux utilisée par mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure de tri cellulaire.