Name: Murine lymphocytaire par étiquetage 64 Cu-anticorps du récepteur de ciblage pour In Vivo Le trafic cellulaire par PET / CT (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Découvrez le marquage des lymphocytes murins par anticorps monoclonal radiomarqué au cuivre-64 pour le suivi in vivo par imagerie TEP/CT. Cette technique permet d'étudier la distribution cellulaire et les mécanismes thérapeutiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Les auteurs remercient le Dr Julia Mannheim, Walter Ehrlichmann, Ramona Stumm, Funda Cay, Daniel Bukala, Maren Harant ainsi que Natalie Altmeyer pour le soutien lors de l&#39;analyse des expériences et des données. Ce travail a été soutenu par Werner Siemens-Fondation, la DFG par le SFB685 (projet B6) et FORTUNE (2309-0-0).

<ol><li>Cerri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+Infusion+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+an+Animal+Model+of+Parkinson%27s+Disease%2C+Focusing+on+Cell+Distribution+and+Neuroprotective+and+Behavioral+Effects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Intracarotid Infusion of Mesenchymal Stem Cells in an Animal Model of Parkinson's Disease, Focusing on Cell Distribution and Neuroprotective and Behavioral Effects.</a> Stem Cells Trans Med. 4 (9), 1073-1085 (2015).</li>
<li>Hasenbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+glioma+tropism+of+bone+marrow-derived+progenitor+cells+by+2-photon+laser+scanning+microscopy+and+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Monitoring the glioma tropism of bone marrow-derived progenitor cells by 2-photon laser scanning microscopy and positron emission tomography.</a> Neuro Oncol. 14 (4), 471-481 (2012).</li>
<li>Sood, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+18F-FDG-Labeled+Autologous+Bone+Marrow+%E2%80%93+Derived+Stem+Cells+in+Patients+With+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of 18F-FDG-Labeled Autologous Bone Marrow – Derived Stem Cells in Patients With Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Clin Nucl Med. 40 (9), 697-700 (2015).</li>
<li>Perez-Diez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4+cells+can+be+more+efficient+at+tumor+rejection+than+CD8+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD4 cells can be more efficient at tumor rejection than CD8 cells.</a> Blood. 109 (12), 5346-5354 (2007).</li>
<li>Muranski, P., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+immunotherapy+of+cancer+using+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adoptive immunotherapy of cancer using CD4+ T cells.</a> Curr. Opin. Immunol. 21 (2), 200-208 (2009).</li>
<li>Braumuller, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-helper-1-cell+cytokines+drive+cancer+into+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-helper-1-cell cytokines drive cancer into senescence.</a> Nature. 494 (7437), 361-365 (2013).</li>
<li>Kochenderfer, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+B-lineage+cells+and+regression+of+lymphoma+in+a+patient+treated+with+autologous+T+cells+genetically+engineered+to+recognize+CD19%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19.</a> Blood. 116 (20), 4099-4102 (2010).</li>
<li>Cherry, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+of+Positron+Emission+Tomography+and+Applications+in+Preclinical+Drug+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Fundamentals of Positron Emission Tomography and Applications in Preclinical Drug Development.</a> J. Clin. Pharmacol. 41 (5), 482-491 (2001).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Effective+Immuno-PET+Imaging+Method+to+Monitor+CD8-Dependent+Responses+to+Immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An Effective Immuno-PET Imaging Method to Monitor CD8-Dependent Responses to Immunotherapy.</a> Cancer Res. 76 (1), 73-82 (2016).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+antibody+fragments+for+immuno-PET+imaging+of+endogenous+CD8%2B+T+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Engineered antibody fragments for immuno-PET imaging of endogenous CD8+ T cells in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (3), 1108-1113 (2014).</li>
<li>Dobrenkov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+Efficacy+of+Adoptively+Transferred+Prostate+Cancer-Targeted+Human+T+Lymphocytes+with+PET+and+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the Efficacy of Adoptively Transferred Prostate Cancer-Targeted Human T Lymphocytes with PET and Bioluminescence Imaging.</a> J Nucl Med. 49 (7), 1162-1170 (2008).</li>
<li>Rini, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+with+FDG-labeled+Leukocytes+versus+Scintigraphy+with+111In-Oxine-labeled+Leukocytes+for+Detection+of+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">PET with FDG-labeled Leukocytes versus Scintigraphy with 111In-Oxine-labeled Leukocytes for Detection of Infection.</a> Radiology. 238 (3), 978-987 (2006).</li>
<li>Ritchie, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+macrophage+activated+killer+cells+to+sites+of+metastatic+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of macrophage activated killer cells to sites of metastatic ovarian carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 56 (2), 155-163 (2006).</li>
<li>Adonai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+cell+labeling+with+64Cu-pyruvaldehyde-bis%28N4-methylthiosemicarbazone%29+for+imaging+cell+trafficking+in+mice+with+positron-emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo cell labeling with 64Cu-pyruvaldehyde-bis(N4-methylthiosemicarbazone) for imaging cell trafficking in mice with positron-emission tomography.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (5), 3030-3035 (2002).</li>
<li>Huang, J., Lee, C. C. I., Sutcliffe, J. L., Cherry, S. R., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiolabeling+Rhesus+Monkey+CD34%2B+Hematopoietic+and+Mesenchymal+Stem+Cells+with+64Cu-Pyruvaldehyde-Bis%28N4-Methylthiosemicarbazone%29+for+MicroPET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Radiolabeling Rhesus Monkey CD34+ Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells with 64Cu-Pyruvaldehyde-Bis(N4-Methylthiosemicarbazone) for MicroPET Imaging.</a> Mol. Imaging. 7 (1), (2008).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Tracking+of+Th1+Cells+by+PET+Reveals+Quantitative+and+Temporal+Distribution+and+Specific+Homing+in+Lymphatic+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In Vivo Tracking of Th1 Cells by PET Reveals Quantitative and Temporal Distribution and Specific Homing in Lymphatic Tissue.</a> J Nucl Med. 55 (2), 301-307 (2014).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((64Cu+antibody-targeting+of+the+T-cell+receptor+and+subsequent+internalization+enables+in+vivo+tracking+of+lymphocytes+by+PET%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">64Cu antibody-targeting of the T-cell receptor and subsequent internalization enables in vivo tracking of lymphocytes by PET.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 112 (4), 1161-1166 (2015).</li>
<li>McCarthy, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+high+specific+activity+64Cu+using+a+biomedical+cyclotron%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient production of high specific activity 64Cu using a biomedical cyclotron.</a> Nucl. Med. Biol. 24 (1), 35-43 (1997).</li>
<li>Kalkhof, S., Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chances+and+pitfalls+of+chemical+cross-linking+with+amine-reactive+N-hydroxysuccinimide+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chances and pitfalls of chemical cross-linking with amine-reactive N-hydroxysuccinimide esters.</a> Anal. Bioanal. Chem. 392 (1), 305-312 (2008).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin Iii,, J, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Th17+Differentiation+of+Naive+CD4+T+Lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Th17 Differentiation of Naive CD4 T Lymphocytes.</a> J Vis Exp. (79), e50765(2013).</li>
<li>Flaherty, S., Reynolds, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Naive+CD4%2B+T+Cell+Isolation+and+In+vitro+Differentiation+into+T+Cell+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets.</a> J Vis Exp. (98), e52739(2015).</li>
<li>Judenhofer, M., Wiehr, S., Kukuk, D., Fischer, K., Pichler, B. Chapter 363. <a target="_blank" href="http://www.springer.com/us/book/9783642129445">Small Animal Imaging. Basics and Practical Guide</a>. , Springer. 363-370 (2011).</li>
<li>Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPhelps%2C+ME+%22PET.+Molecular+Imaging+and+Its+Biological+Applications%22">PET. Molecular Imaging and Its Biological Applications</a>. , Springer-Verlag. 93-101 (2004).</li>
<li>Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+and+Antimatter%3A+The+Resurgence+of+Immuno-PET%5BTitle%5D)+AND+%22JNM%22%5BJournal%5D)">Antibodies and Antimatter: The Resurgence of Immuno-PET.</a> JNM. 50 (1), 2-5 (2009).</li>
<li>Lewis, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+pretargeted+64Cu+for+tumor+imaging+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy.</a> J Nucl Med. 44 (8), 1284-1292 (2003).</li>
<li>Boswell, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+in+vivo+stability+of+copper-64-labeled+cross-bridged+and+conventional+tetraazamacrocyclic+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Comparative in vivo stability of copper-64-labeled cross-bridged and conventional tetraazamacrocyclic complexes.</a> J Med Chem. 47 (6), 1465-1474 (2004).</li>
<li>Ghosh, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+DOTA+and+NODAGA+as+chelators+for+%2864%29Cu-labeled+immunoconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of DOTA and NODAGA as chelators for (64)Cu-labeled immunoconjugates.</a> Nucl Med Biol. 42 (2), 177-183 (2015).</li>
<li>Johnson, T. E., Birky, B. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+TE+%22Health+Physics+and+Radiological+Health%22">Health Physics and Radiological Health</a>. , 4th ed, Lippincott Williams & Wilkins. (2011).</li>
<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Meth. 2 (12), 932-940 (2005).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à dévoiler.

Ce protocole présente une méthode fiable et facile à radiomarquer de manière stable des cellules pour le suivi in vivo par TEP. En utilisant cette méthode, les cellules Cova-TH1, isolé et élargi in vitro à partir de souris donneuses, pourrait être radiomarqués avec 64 Cu-DOTA-KJ1-26-mAb et leur prise d&#39; origine a été suivi pour les ganglions pulmonaires et périthymique en tant que sites de présentation dans une Cova Cova induite par DTHR des voies aériennes aiguës. <p class="jove_con...

Le suivi des cellules non-invasive est un outil polyvalent pour surveiller la fonction cellulaire, la migration et homing in vivo. De récentes études de suivi de cellules se sont concentrées sur mésenchymateuses 1, 2 ou cellules souches dérivées de la moelle osseuse 3 dans le cadre de la médecine régénérative, les globules blancs périphériques autologues dans l&#39; inflammation ou des lymphocytes T dans des thérapies cellulaires adoptifs contre le cancer 3, 4. L&#39;élucidation des sites d&#39;action et les principes biologiques sous-jacents des thérapies à base de cellules est d&#39;une importance énorme. CD8 + lymphocytes T cytotoxiques, récepteur de l&#39; antigène chimère génétiquement modifiées (CAR) des cellules T ou des lymphocytes infiltrant les tumeurs (TIL) ont été largement considéré comme l&#39;étalon-or. Cependant, les cellules TH1 spécifiques de l&#39; antigène associé à la tumeur se sont révélés être une option de traitement alternative efficace 4, &lt;/ sup&gt; 5, 6, 7. Comme les principaux acteurs dans l&#39; inflammation, les maladies auto - immunes spécifiques d&#39;organes (par exemple, la polyarthrite rhumatoïde ou d&#39; asthme bronchique), et les cellules de grand intérêt pour l&#39; immunothérapie du cancer, il est important de caractériser les modes de distribution et de homing temporelles des cellules TH1. L&#39; imagerie in vivo non invasive par TEP présente une quantitative, une méthode très sensible 8 pour examiner les schémas de migration des cellules, dans la prise d&#39; origine in vivo, et les sites d&#39;action des lymphocytes T et des réponses au cours de l&#39; inflammation, les allergies, les infections ou le rejet de la tumeur 9, 10, 11. Cliniquement, 111 In-oxine est utilisé pour la scintigraphie des leucocytes pour la discrimination de l&#39; inflammation et de l&#39; infection 12, tandis que le 2-désoxy-2- (18F) fluoro-D-glucose (18 F-FDG) est couramment utilisé pour les études de suivi des cellules en PET 3, 13. Un inconvénient majeur de ce traceur PET, cependant, est la courte demi-vie du radionucléide 18 F à 109,7 min et la faible stabilité intracellulaire qui empêche l&#39; imagerie aux points de temps plus tard transfert post cellulaire adoptive. Pour plus long terme in vivo des études de suivi de cellules par PET, bien instable dans les cellules, 64 Cu-PTSM est fréquemment utilisé pour étiqueter de façon non spécifique des cellules 14, 15 avec des effets néfastes réduits au minimum sur la viabilité des cellules T et la fonction 16. Ce protocole décrit un procédé pour réduire davantage les effets désavantageux sur la viabilité cellulaire et la fonction à l&#39;aide d&#39;un récepteur de cellule T (TCR) de mAb radiomarquée spécifique de. Premièrement, la production du radio - isotope 64 Cu, la conjugaison du mAb avec KJ1-26 ee chélateur DOTA, et le 64 Cu-radiomarquage ultérieur sont présentés. Dans une deuxième étape, l&#39;isolement et l&#39; expansion de cellules Cova-TH1 de souris donneuses DO11.10 et le radiomarquage avec sont décrits en détail 64 mAb conjugué DOTA-Cu chargé KJ1-26 (64 Cu-DOTA-KJ1-26). L&#39;évaluation des valeurs absorption et l&#39; efflux de la radioactivité avec un calibrateur de dose et par y-comptage, respectivement, ainsi que l&#39;évaluation des effets de 64 Cu-radiomarquage sur la viabilité des cellules par exclusion au bleu trypan et de fonctionnalité avec ELISA de IFN-y sont présentés . Pour les non-invasive dans le suivi des cellules in vivo, le déclenchement d&#39;un modèle de souris de DTHR voies aériennes aiguë induite par Cova et l&#39; acquisition d&#39; image par PET / CT après le transfert cellulaire adoptive sont décrits. De plus, cette approche de l&#39;étiquetage peut être transférée à différents modèles de la maladie, les cellules T de souris avec différentes cellules ou RLT d&#39;intérêt général avec les récepteurs liés à la membrane ou l&#39;expression markers membrane continue qui sous - tend la navette 17.

<table><tbody><tr><td>HCl, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>1.00318</td><td>64Cu</td></tr><tr><td>production Méthanol, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>1.06007</td><td>64Cu</td></tr><tr><td>production Isopropanol, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>1.0104</td><td>64Cu production</td></tr><tr><td>Pt/Ir (90/10) plaque</td><td>&Ouml ; gussa</td><td>Custom made</td><td>64Cu production</td></tr><tr><td>Chambre PEEK</td><td>WKL</td><td>Custom made</td><td>64Cu production</td></tr><tr><td>64Ni</td><td>Chemotrade</td><td></td><td>64Cu</td></tr><tr><td>production Polygramme SIL G/UV 254 plaque</td><td>Macherey-Nagel</td><td>805021</td><td>64Cu</td></tr><tr><td>production Échange d’ions colonne</td><td>BioRad</td><td>AG1-X8</td><td>64Cu</td></tr><tr><td>production Système de cible à semi-conducteurs pour la production PETtrace</td><td>WKL</td><td>costum made</td><td>64Cu production</td></tr><tr><td>64Cu module de travail</td><td>WKL</td><td>costum made</td><td>64Cu</td></tr><tr><td>production Calibrateur de dose</td><td>Capintec</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr><tr><td>PETtrace cyclotron</td><td>General Electric Medical Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-NHS</td><td>Macrocycliques</td><td>B-280</td><td>Immuno-conjugaison DOTA</td></tr><tr><td>Anti-cOVA-TCR (KJ1-26)</td><td></td><td>Isolé de la culture cellulaire d’hybridome</td><td>Conjugaison DOTA</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71633</td><td>DOTA-conjugaison</td></tr><tr><td>H+ Chelex 100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7901</td> Unité de <td></td></tr><tr><td>filtration Amicon Ultra-15</td> à conjugaison DOTA <td>Merck Millipore</td><td>UFC910008</td><td>Conjugaison DOTA</td></tr><tr><td>Eau ultrapure Rotipuran</td><td>Carl</td><td>Roth HN68.3</td><td>Conjugaison DOTA</td></tr><tr><td>Acétate d’ammonium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32301</td><td>Conjugaison DOTA</td></tr><tr><td>Université de</td><td>Tübingen</td><td></td><td>Conjugaison DOTA</td></tr><tr><td>Micro Bio-spin Colonne P-6</td><td>Laboratoires Bio-Rad</td><td>7326221</td><td>DOTA-conjugaison</td></tr><tr><td>Citrate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71497</td><td>DOTA-conjugaison</td></tr><tr><td>Cyclone Plus PhosphorImager&nbsp ;</td><td>Perkin-Elmer</td><td>L2250116</td> DMEM<td>, conjugaison DOTA,</td></tr><tr><td></td><td>Merck Millipore</td><td>102568</td><td>ingrédient pour le milieu des lymphocytes T.</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Merck Millipore</td><td>S0115/1004B</td><td>ingrédient pour milieu cellulaire T&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium</td><td>Merck Millipore</td><td>L0473</td><td>ingrédient pour milieu de cellules T&nbsp ;</td></tr><tr><td>Acides aminés MEM</td><td>Merck Millipore</td><td>K0293</td><td>ingrédient pour milieu de cellules T&nbsp ;</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp ;</td><td>Merck Millipore</td><td>L 1613</td><td>ingrédient pour milieu de cellules T&nbsp ;</td></tr><tr><td>&nbsp ; Pénicilline/Streptomycine</td><td>Merck Millipore</td><td>A2212</td><td>ingrédient pour milieu cellulaire T&nbsp ;</td></tr><tr><td>0,05 mM 2-&beta ;-mercaptoéthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>ingrédient pour milieu de cellules T&nbsp ;</td></tr><tr><td>DO11.10</td><td></td><td>souris élevage maison</td><td>culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td>TH1 culture cellulaire</td></tr><tr><td>Passoire 40 &micro ; m&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>352340</td><td>TH1 culture cellulaire</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Lonza</td><td>10-548E</td><td>TH1 culture cellulaire</td></tr><tr><td>CD4 Microbilles, souris</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-097-145</td><td>TH1 culture cellulaire Séparateur</td></tr><tr><td>QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-976</td><td>TH1 culture cellulaire</td></tr><tr><td>LS colonne</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td>TH1 culture cellulaire</td></tr><tr><td>anticorps anti-CD4 (Gk1.5)</td><td></td><td>Isolé à partir d’une culture cellulaire d’hybridome</td><td>Culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>Anticorps anti-CD8 (5367.2)</td><td></td><td>Isolé d’une culture cellulaire d’hybridome</td><td>Culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>Anticorps anti-rat (MAR18.5)</td><td></td><td>Isolé d’une culture cellulaire d’hybridome</td><td>Culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>Complément de lapin MA</td><td>tebu-Bio</td><td>CL3221</td><td>TH1 culture cellulaire</td></tr><tr><td>Anti-IL-4 anticorps (11B11)</td><td></td><td>Isolé à partir d’une culture cellulaire d’hybridome</td><td>Culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>cOVA 323-339-peptide&nbsp ;</td><td>Micro-collections CEM</td><td>Commande sur mesure</td><td>Culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>CPG1668-oligonucléotides</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>Commande sur mesure</td><td>Culture cellulaire TH1 IL-2</td></tr><tr><td></td><td>Novartis</td><td>65483-116-07</td><td>Culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>Plaques à 96 puits</td><td>Greiner&nbsp ;</td><td>655180</td><td>TH1 culture cellulaire 24</td></tr><tr><td>plaques</td><td>Greiner&nbsp ;</td><td>662160</td><td>TH1</td></tr><tr><td>Fiole de culture cellulaire</td><td>Greiner&nbsp ;</td><td>660175</td><td>Plaques de culture cellulaire TH1</td></tr><tr><td>à 48 puits</td><td>Greiner&nbsp ;</td><td>677 180</td><td>étiquetage de cellules</td></tr><tr><td>Gammacell 1000</td><td>Best Theratronics</td><td>via enquête&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Gulmay RT225</td><td>Gulmay</td><td>via enquête&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Merck Millipore</td><td>L6323</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>Souris IFN-&gamma ; ELISA</td><td>BD Biosciences</td><td>558258</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>PE Annexine V Kit de détection de l’apoptose&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>559763</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>Tube 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>55.476</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>Tubes à fond rond&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>352008</td><td>in vitro</td></tr><tr><td>évaluation Assistant &gamma ;-compteur</td><td>Perkin-Elmer</td><td>2480-0010</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>ELISA Lecteur MultiscanEX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>51118177</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Leica</td><td>via enquête&nbsp ;</td><td>in vitro évaluation</td></tr><tr><td>BD LSRII&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>via enquête&nbsp ;</td><td>in vitroévaluation</td></tr><tr><td>souris BALB/c</td><td>Charles River</td><td>028</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Gel d’aluminium</td><td>Serva Électrophorèse</td><td>12261.01</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer HealthCare</td><td>Commandé via Hôpital universitaire</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>Ratiopharm</td><td>Commandé via Hôpital universitaire</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>CP-Pharma</td><td>Commandé via University hospital</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>30 G aiguille</td><td>BD Biosciences</td><td>304000</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Seringue</td><td>BD Biosciences</td><td>11612491</td><td>in vivo Trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Capillaires 10 &micro ; L</td><td>VWR</td><td>612-2439</td><td></td></tr><tr><td>Inveon PET scanner</td><td>Siemens Healthineers</td><td>n’est plus disponible</td><td>in vivo trafic cellulaire, sociétés alternatives : Bruker, Mediso&nbsp ;</td></tr><tr><td>Scanner Inveon SPECT/CT</td><td>Siemens Healthineers</td><td>n’est plus disponible</td><td>in vivo trafic cellulaire</td></tr><tr><td>Inveon Research Workplace</td><td>Siemens Healthineers</td><td></td><td>analyse d’images, logiciel alternatif : Pmod</td></tr></tbody></table>

murine lymphocytaire par étiquetage<sup&gt; 64</sup&gt; cu-anticorps du récepteur de ciblage pour<em&gt; in vivo</em&gt; le trafic cellulaire par pet / ct

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Ce protocole illustre la production de 64 Cu et la conjugaison chélateur / radiomarquage d&#39;un anticorps monoclonal (mAb) , suivie d&#39; une culture de cellules de lymphocytes murins et 64 récepteur Cu-anticorps ciblant des cellules. Dans l&#39; évaluation in vitro du radiomarqueur et non-invasive dans le suivi des cellules in vivo dans un modèle animal d&#39;une voie aérienne d&#39; hypersensibilité retardée réaction (DTHR) par PET / CT sont décrites. Dans le détail, la conjugaison d&#39;un anticorps monoclonal avec l&#39;agent chélatant acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécane-1,4,7,10-tétraacétique (DOTA) est représenté. Suite à la production de 64 radioactif Cu, le radiomarquage de l&#39;anticorps monoclonal DOTA-conjugué est décrite. Ensuite, l&#39;expansion de l&#39; ovalbumine de poulet (COVA) CD4 + interféron spécifique de (IFN) -γ-production de cellules T auxiliaires (Cova-TH1) et la radiomarquage subséquente des cellules Cova-TH1 sont représentés. Diverses techniques in vitro sont présentées pour évaluer l&#39;effets de 64 Cu-radiomarquage sur les cellules, telles que la détermination de la viabilité des cellules par exclusion au bleu trypan, la coloration de l&#39; apoptose avec l&#39; Annexine V pour la cytométrie en flux, et l&#39;évaluation de la fonctionnalité par un dosage immuno-enzymatique IFN-γ (ELISA) . En outre, la détermination de l&#39;absorption radioactive dans les cellules et la stabilité de l&#39;étiquetage sont décrites en détail. Ce protocole décrit en outre comment effectuer des études de suivi de cellules dans un modèle animal pour une DTHR des voies respiratoires et, par conséquent, l&#39;induction de DHTR aiguë des voies aériennes induite par COVA dans des souris BALB / c est inclus. Enfin, un flux de travail TEP / CT robuste comprenant l&#39;acquisition d&#39;image, la reconstruction, et l&#39;analyse est présentée. Le 64 récepteur de Cu-anticorps approche de ciblage avec l&#39; internalisation du récepteur ultérieur fournit une spécificité élevée et la stabilité, réduit la toxicité cellulaire, et de faibles taux d&#39;efflux par rapport au PET traceurs communs pour le marquage cellulaire, par exemple 64 Cu-pyruvaldehyde bis (N4-méthylthiosemicarbazone) (64 Cu-PTSM). Enfin, notre approche permet non-invasive in vivo suivi des cellules en PET / CT avec un rapport optimal signal-sur-fond pendant 48 heures. Cette approche expérimentale peut être transférée à différents modèles animaux et types de cellules avec les récepteurs liés à la membrane qui sont internalisés.

La figure 1 résume le marquage des cellules Cova-TH1 avec le 64 Cu-DOTA-KJ1-26-mAb et la conception expérimentale pour l&#39;in vitro et in vivo traitées dans ce protocole. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55270/55270fig1.jpg" /> Figure 1: 64 Cu-DOTA-KJ1-26-mAb étiquetage Process &amp; Experimental design. (A) Représentati...

Suite à la préparation d&#39;un 64 anticorps monoclonal Cu-modifié de liaison à un récepteur de cellule T murine transgénique, les cellules T sont radiomarqué in vivo, une analyse de la viabilité, la fonctionnalité, la stabilité du marquage et de l&#39; apoptose, et par transfert adoptif dans des souris avec une voie aérienne d&#39;hypersensibilité de type retardé réaction pour l&#39;imagerie non invasive par tomographie par émission de positons / tomodensitométrie (PET / CT).

Murine lymphocytaire par étiquetage<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-anticorps du récepteur de ciblage pour<em&gt; In Vivo</em&gt; Le trafic cellulaire par PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

L'objectif général de cette procédure est de marquer de façon stable des lymphocytes murins à l'aide d'un anticorps monoclonal radioactif modifié au cuivre afin de suivre in vivo la distribution temporelle et les schémas de migration des lymphocytes par TEP/TDM chez des modèles murins d'inflammation ou de cancer. Cette méthode peut aider à élucider les sites d'action ainsi que les principes biologiques fondamentaux clés des thérapies cellulaires, telles que les thérapies par cellules souches en médecine régénérative ou les immunothérapies anticancéreuses. Le principal avantage de cette technique réside dans sa capacité à permettre l'imagerie de la migration cellulaire sur une période de 48 heures, avec un contraste élevé et des effets néfastes minimes sur les cellules.Cette méthode peut être facilement transférée à tout type cellulaire d'intérêt possédant des récepteurs membranaires spécifiques et les anticorps monoclonaux correspondants. En général, les personnes novices dans cette méthode peuvent éprouver des difficultés avec la conjugaison de l'agent chélatant et les procédés de radiomarquage, ce qui entraîne une fraction immunoréactive plus faible et une activité cellule-spécif

murine-lymphocyte-labeling-64cu-antibody-receptor-targeting-for-vivo

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Dans cette vidéo, nous démontrons le radiomarquage intracellulaire des cellules T auxiliaires à l’aide d’anticorps monoclonaux conjugués aux isotopes radioactifs pour l’imagerie non invasive par tomographie par émission de positons.

Marquage des lymphocytes T auxiliaires murins à l’aide d’anticorps monoclonaux radiomarqués

Cette vidéo présente une technique impliquant un radio-immunoconjugué pour l’imagerie in vivo d’une tumeur dans un modèle murin. Lors de l’injection du radio-immunoconjugué, les anticorps du conjugué se lient à un antigène membranaire spécifique sur les cellules cancéreuses. Le radiotraceur du conjugué émet des positrons qui interagissent avec les électrons voisins pour produire de l’énergie, qui est détectée par un scanner de tomographie par émission de positons (TEP) pour créer une image de...

Une technique d’imagerie TEP in vivo pour détecter des tumeurs dans un modèle murin à l’aide d’anticorps radiomarqués

Nous décrivons un protocole général pour le suivi in vivo de cellules à l'aide de l'IRM dans un modèle de souris ex vivo avec des cellules marquées. Un protocole typique pour le marquage de cellules, le traitement d'acquisition d'image et la quantification est inclus.

In vivo 19 F IRM pour le suivi cellulaire

La cycloaddition de Diels-Alder bioorthogonale à demande d’électrons inverses a été exploitée pour créer une stratégie d’imagerie TEP préciblée efficace et modulaire pour le cancer. Dans ce protocole, les étapes de cette méthodologie sont décrites dans le contexte d’un système modèle utilisant l’anticorps ciblant le cancer colorectal huA33 et un radioligand marqué au Cu 64.

Exploiter la demande Bioorthogonal inverse Electron Diels-Alder Cycloaddition pour préalablement visées PET Imaging

Peptides dérivés d’origine virale, couplées à l’anticorps-conjugués (ACs) est une approche gagne du terrain en raison du risque de fournir des charges moléculaires avec accumulation de cellules de tumeur accrue. Utilisant des méthodes communes pour évaluer la conjugaison de peptide, AC et accumulation intracellulaire de charge utile et le ciblage de la tumeur, ce protocole permet aux chercheurs pendant les phases clés du développement initial.

Évaluation initiale des anticorps-conjugués modifié avec Peptides viraux dérivés pour accroître l’Accumulation cellulaire et améliorer le ciblage tumoral

Ce protocole décrit une méthode pour image résident-infiltration tumorale T CD8 cellules marquées avec des anticorps fluorescent couplés au sein de tranches de tumeur du poumon humain. Cette technique permet des analyses en temps réel de la migration des cellules T CD8 par microscopie confocale.

Ex Vivo Imagerie des Lymphocytes T CD8 résident dans des tumeurs du poumon humain tranches à l’aide de la microscopie confocale

Protocoles pour une évaluation quantitative de la chimiotaxie des lymphocytes et des migrations sont des outils importants pour la recherche de l’immunologie. Un protocole in vitro est décrit ici, que les permis en temps réel, multiplexés évaluation de la migration cellulaire, ainsi qu’un complémentaire en vivo technique propice suivi de cellules natives de rate.

Quantifier la chimiotaxie Monocyte humain In Vitro et lymphocytes murins traite In Vivo

Ici, nous montrons les méthodes in vivo la quantification d’évacuation de leucocytes de naïve, enflammée et peau murine maligne. Nous effectuons une comparaison entre deux modèles : transdermique FITC application et in situ photoconversion. En outre, nous démontrent l’utilité de photoconversion pour le suivi des sorties de leucocytes de tumeurs cutanées.

Quantification des leucocytes évacuation via les vaisseaux lymphatiques de peau Murine et tumeurs

Ce protocole décrit une technique pour imager différentes populations de cellules dans les ganglions lymphatiques drainants sans altérations dans la structure d'organe.

Visualisation de la structure des ganglions lymphatiques et de la localisation cellulaire à l'aide de la microscopie confocale ex-Vivo

Ce protocole décrit la méthodologie de suivi non invasif des lymphocytes T génétiquement modifiés pour exprimer les récepteurs d’antigènes chimériques in vivo avec une plate-forme cliniquement disponible.

Imagerie dynamique des lymphocytes T récepteurs de l’antigène chimérique avec [18F]Tomographie par émission de positons tétrafluoroborates/Tomodensitométrie

Cet article détaille la méthodologie de radiomarquage d’un anticorps monoclonal anti-CD19 spécifique à l’homme et comment l’utiliser pour quantifier les lymphocytes B dans le système nerveux central et les tissus périphériques d’un modèle murin de sclérose en plaques à l’aide d’approches d’imagerie TEP in vivo, de comptage gamma ex vivo et d’autoradiographie.

Imagerie des lymphocytes B CD19+ dans un modèle murin expérimental d’encéphalomyélite auto-immune à l’aide de la tomographie par émission de positons

Découvrez le marquage des lymphocytes murins par anticorps monoclonal radiomarqué au cuivre-64 pour le suivi in vivo par imagerie TEP/CT. Cette technique permet d'étudier la distribution cellulaire et les mécanismes thérapeutiques.

Murine lymphocytaire par étiquetage

Explorer plus de vidéos