Name: Évaluation de lincidence des produits chimiques sur lenvironnement Miel de développement Abeille de lindividu à la colonie Niveau (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Découvrez une méthode d'évaluation des effets des pesticides sur les abeilles individuelles et les colonies entières. Cette approche in vivo utilise un régime larvaire pour étudier l'impact écotoxicologique sur Apis mellifera.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Cette recherche a été soutenue par Grant 105AS-13.2.3-BQ-B1 du Bureau de santé animale et végétale inspection et de quarantaine, le Conseil de l&#39;agriculture, Yuan exécutif et Grant 103-2313-B-197-002-MY3 du ministère de la science et de la technologie (MOST).

1. Préparation <ol><li> Faire 1 L de 50% de sirop de sucre. Dissoudre 1 kg de saccharose dans 1 L ddH 2 O. </li><li> Préparer la solution pyriproxyfène (PPN) dans BLD. Faire 1,1 L de 10 000 ppm solution PPN de stock et une solution diluée à 100 ml PPN dans 1 litre stérilisé ddH 2 O. Conserver à 4 ° C. </li><li> Diluer la solution mère PPN à des concentrations finales de 0,1, 1, 10 et 100 mg / kg (ppm) dans le BLD pour l&#39;expérience suivante. </li><li> Faire PPN-sirop (pour le niveau de la colonie). Diluer le stock PPN à des concentrations finales de 10 et 100 ppm à 50% de sirop de sucre pour l&#39;expérience suivante. </li><li> Miel élevage des abeilles. Note: Ici, l&#39;emplacement expérimental est le rucher Université nationale Ilan (NIU), Ville Yi-Lan, Taiwan; (Coordonnées GPS: N24.747278, E121.746200). <ol><li> Vérifiez abeille (Apis mellifera L.) colonies par semaine pour la quantité de nourriture et d&#39; alimentation avec 1 litre 50% de sirop de sucre si nécessaire (la zone de stockage de miel est vide). Définir un environnement saincolonie 9 cadres de peignes d&#39;abeilles dans chaque colonie avec une reine pondre des œufs normalement. </li></ol></li><li> Préparer 100 ml de l&#39;alimentation des larves de base (BLD). Dissoudre 6% de D-glucose, 6% de fructose et 1% d&#39; extrait de levure dans de l&#39; eau désionisée distillée stérilisée (ddH 2 O) et de compléter avec 50% de la gelée royale. Conserver à 4 ° C mais pas pendant plus de 3 jours. Note: Pré-chaud à 35 ° C avant l&#39;expérience et l&#39;utilisation dans les 3 jours. </li></ol> 2. méthode in vivo alimentation Remarque: In vivo mode d&#39;alimentation a été modifié depuis Hanley et al. 20 <ol><li> Abeille de sélection de larves et d&#39; étiquetage. <ol><li> Insérez un à reine pour diviser 9 cadres d&#39;une colonie saine en 4 cadres et 5 cadres tout en limitant la reine à la section 4 du cadre. Laisser au moins une trame vide dans la section 4 de trame pour pondre des œufs. </li><li> Après la reine pondre des œufs pour 1 jour, Vérifiez les cadres de l&#39;apparition d&#39;œufs et de garder les œufs à l&#39; intérieur des ruches d&#39; abeilles pendant 72 h (le 4 e jour) jusqu&#39;au 1 jour ancienne éclosion des larves. Prenez l&#39;un des cadres contenant vieux 1 jour larves d&#39;ouvrières (éclos dans les 24 h) hors de la ruche d&#39;essai à la main et enlever les travailleurs d&#39;abeilles du cadre avec une brosse d&#39;abeille. </li><li> Couvrir le cadre avec une lame transparente (taille = longueur x largeur x épaisseur = 29,7 mm x 21 mm x 0,1 mm) et clouer la lame transparente sur le bord de trames avec des punaises (figure 1A). </li><li> Pour chaque traitement, sélectionner de manière aléatoire 50 un jour, des larves âgées (4 ème jour) et marquer chaque cellule de couvain en utilisant des marqueurs permanents sur la lame transparente (figures 1A et 1B). Note: Écrivez les informations de chaque traitement sur le cadre et lame transparente et en utilisant des marqueurs permanents pour éviter la confusion entre les différents traitements. Retirez les diapositives marquées et garder pour in vivo &lt;/ Em&gt; l&#39;alimentation et de l&#39;observation. </li></ol></li><li> Dans l&#39; alimentation vivo. <ol><li> Ajouter différentes concentrations de PPN-BLD (0,1, 1, 10 et 100 ppm) à chaque cellule de couvain marqué par pipetage au jour 1, 2 et 3 avec 10 pi, 10 pi et 20 pi, respectivement, en fonction de la quantité d&#39;admission du âge larves. Ajouter la même quantité de BLD (pas PPN) à un groupe témoin. De ce fait, la dose totale de PPN-BLD dans chaque cellule de couvain marqué accumule à 4, 40, 400 et 4000 pg. REMARQUE: reconnaître les cellules de couvain marquées par les lames transparentes marquées et retirer les lames transparentes marquées après le repas. Utilisation fraîche BLD d&#39;alimentation pour empêcher le nettoyage des cellules de couvain par les abeilles ouvrières. </li><li> Remettre les cadres traités PPN aux colonies d&#39;origine pour d&#39;autres observations. REMARQUE: Chaque traitement a quatre répétitions biologiques dans quatre colonies. </li></ol></li><li> Observation des larves traitées au jour 7. <ol><li> Pour observer ee larves PPN-traitées, retourner les diapositives transparentes marquées aux cadres pour enregistrer la mortalité et les taux de capsulage dans les cellules de couvain marquées. </li></ol></li><li> Observation des taux de pupes et Eclosion traités au jour 13. <ol><li> Retirer la cire d&#39;abeille de couvain operculé. </li><li> Mettez la pince à épiler douce déversée dans les cellules couvain et serrer les chrysalides très légèrement puis prendre pupes doucement. </li><li> Transférer les pupes dans des plaques de culture tissulaire à 24 puits avec une double couche de tissus de laboratoire sous chaque puits. Notez les dommages et la mortalité pendant le transfert chrysalide. </li><li> Maintenir l&#39;humidité relative dans un incubateur à 34 ° C des plaques de culture tissulaire à 24 puits et de 70% jusqu&#39;à l&#39; émergence (environ 8 jours). </li><li> Observer et enregistrer les chrysalides et les abeilles ont émergé. </li></ol></li><li> Statistiques <ol><li> Calculer les données enregistrées et présente en moyenne ± écart-type </li><li> Analyser les données en utilisant une analyse de variance (Anova) par SAS et utiliser le moins significatif essai différence (LSD) pour analyser les différences entre les deux modes de traitements différents. Définir statistiquement significative comme valeur p &lt;0,05. Des lettres différentes dans la même colonne du tableau montre un effet significatif par l&#39;analyse statistique. </li></ol></li></ol> 3. Toxicité des PPN à la Colonie Niveau en Ruche <ol><li> Mettre en place les groupes d&#39;abeilles. <ol><li> Insérer une grille à reine verticalement pour diviser 9 trames d&#39;une colonie saine en 4 trames (partie A) et de 5 images (partie B) tout en limitant la reine de la section 4 du cadre. Laisser au moins une trame vide dans la section 4-trame pour pondre des œufs. Remarque: En d&#39;autres à reine le au-dessus de la partie reine pour empêcher la reine de se déplacer entre les parties. </li><li> Après la reine pondre des œufs pour 1 jour, vérifiez les cadres de l&#39;apparition des œufs. Prenez les cadres appropriés contenant des oeufs à partir de la partie A à la main et enlever les travailleurs d&#39;abeillesà partir de la trame avec une brosse d&#39;abeille. </li><li> Couvrir le cadre avec lame transparente et clouer la lame transparente sur le bord du cadre avec des punaises. </li><li> sélectionner de façon aléatoire 100 cellules de couvain contenant des oeufs et marquer chaque cellule de couvain en utilisant un marqueur permanent sur la lame transparente. Affecter ces 100 cellules de couvain comme groupe 1. écrire les informations de chaque traitement sur le châssis et lame transparente en utilisant un marqueur permanent pour éviter la confusion entre les différents traitements. </li><li> Remettez le cadre marqué à la partie A pendant 3 jours, puis transférer la reine à la partie B pour pondre leurs œufs. </li><li> Après 1 jour, vérifiez les cadres de la partie B, choisir un cadre approprié et l&#39;étiquette 100 cellules de couvain contenant des oeufs comme décrit à l&#39;étape 3.1.4. Affecter ces 100 cellules de couvain Groupe 2. </li><li> Remettez le cadre marqué à la partie B pendant 3 jours, puis transférer la reine à la partie A à pondre des œufs. </li><li> Répétez la reine échange entre la partie A et partie B 6 fois plus et assigner numériquement les groupes,respectivement (Figure 2). Il devrait y avoir au total 9 groupes. </li></ol></li><li> T rande colonie d&#39;abeilles avec du sirop de sucre PPN au jour 13 (Figure 2). <ol><li> Ajouter 1 L 50% de sirop de sucre PPN contenant 10 ou 100 ppm dans une boîte d&#39;alimentation d&#39;abeille en matière plastique (W x L x H = 20 cm x 30 cm x 3,5 cm) et de mettre la boîte au-dessus des cadres dans les colonies expérimentales. Nota: Le groupe 1 ne reçoit pas le PPN à 13 jours que les cellules de couvain ont été scellées. </li><li> Alimenter le groupe de contrôle avec 1 L 50% de sirop de sucre (pas d&#39;PPN) tel que décrit à l&#39;étape 2.2. </li></ol></li><li> Compter une larve d&#39;un jour et enregistrer le taux d&#39; éclosion des oeufs de 100 cellules de couvain marqués pour chaque groupe au jour 5 (Figure 2). œufs d&#39;abeilles miel prennent habituellement 3 jours pour éclore en larves de 0 jour; Par conséquent, vérifier et étiqueter 100 œufs contenant des cellules de couvain au jour 1 et compter le nombre de larves âgées de jour 1 pour chaque groupe au jour 5 pour obtenir le pourcentage de taux d&#39;éclosion. </li><li> Contant les cellules operculées et enregistrer que le taux de recouvrement de 100 larves de cellules de couvain marqués pour chaque groupe au jour 11 (Figure 2). 6 à 7 jours vieux couvain larves seront coiffées avec de la cire d&#39;abeille par les travailleurs d&#39;abeilles pour nymphose des larves. </li><li> Observer la maturation des nymphes et enregistrer le taux d&#39;éclosion de 100 cellules de couvain marqués pour chaque groupe au jour 17 (Figure 2). <ol><li> Retirer la cire d&#39;abeille de couvain operculé et prendre chrysalides avec une pince à épiler pointe douce doucement. Transférer les pupes dans une des plaques de culture tissulaire à 24 puits avec une double couche de tissus de laboratoire sous chaque puits. </li><li> Garder les plaques de culture tissulaire à 24 puits dans un incubateur à 34 ° C et 70% d&#39;humidité relative jusqu&#39;à l&#39;émergence. </li><li> Observer et enregistrer les chrysalides et a émergé abeilles pour chaque groupe jusqu&#39;à ce que le groupe 9 (49 jours expérimentaux). Remarque: Chaque traitement a quatre répétitions biologiques. </li></ol></li><li> Statistiques <ol><li> Calculer les données enregistrées et présent sous forme de la moyenne± SD. </li><li> Analyser les différences significatives entre les paires de traitements (par exemple , 0 ppm / 10 ppm, 10 ppm / 100 ppm et de 0 ppm / 100 ppm) dans chaque groupe à l&#39;aide de deux t bilatéral de -test de l&#39;élève. Définir comme statistiquement significative si P -value &lt;0,05. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ruffi nengo, S. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/287268867_Integrated_pest_management_to_control_Varroa_destructor_and_its_implications_to_Apis_mellifera_colonies">Integrated pest management to control Varroa destructor and its implications to Apis mellifera colonies.</a> Zootecnia Trop. 32 (2), 149-168 (2014).</li>
<li>Mullin, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+levels+of+miticides+and+agrochemicals+in+North+American+apiaries%2C+implications+for+honey+bee+health%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High levels of miticides and agrochemicals in North American apiaries, implications for honey bee health.</a> PLoS One. 5, e9754(2010).</li>
<li>Lu, C. A., Chang, C. H., Tao, L., Chen, M. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/282222257_Distributions_of_neonicotinoid_insecticides_in_the_Commonwealth_of_Massachusetts_A_temporal_and_spatial_variation_analysis_for_pollen_and_honey_samples">Distributions of neonicotinoid insecticides in the Commonwealth of Massachusetts, a temporal and spatial variation analysis for pollen and honey samples.</a> Environ. Chem. 13, 4-11 (2016).</li>
<li>Tsai, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ccsenet.org/journal/index.php/ep/article/view/25732">Analysis of coupling the pesticide use reduction with environmental policy for agricultural sustainability in Taiwan.</a> Environ. & Pollut. 2, 59-65 (2013).</li>
<li>Weng, Z. H. Pesticide market status and development trend (in Chinese). PRIDE. , 
 <a target="_blank" href="https://pride.stpi.narl.org.tw/">https://pride.stpi.narl.org.tw/</a> (2016).</li>
<li>Kevan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167880999000444">Pollinators as bioindicators of the state of the environment, species, activity and diversity.</a> Agric. Ecosys. Environ. 74 (1-3), 373-393 (1999).</li>
<li>Kevan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0006320775900452">Forest application of the insecticide fenitrothion and its effect on wild bee pollinators (Hymenoptera: Apoidea) of lowbush blueberries (Vaccinium SPP.) in Southern New Brunswick, Canada.</a> Biol. Conserv. 7, 301-309 (1975).</li>
<li>Crane, E., Walker, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrane%2C+E+%22The+impact+of+pest+management+on+bees+and+pollination%22">The impact of pest management on bees and pollination</a>. , IBRA. Cardiff, UK. (1983).</li>
<li>Haouar, M., Decormis, L., Rey, J. <a target="_blank" href="https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/19920232241">Fluvalinate applied to flowering apple trees-contamination of honey-gathering bees and hive products.</a> Agronomie. 10 (2), 133-137 (1990).</li>
<li>Chauzat, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+pesticide+residues+in+pollen+loads+collected+by+honey+bees+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">A survey of pesticide residues in pollen loads collected by honey bees in France.</a> J. Econ. Entomol. 99 (2), 253-262 (2006).</li>
<li>Bonzini, S., Tremolada, P., Bernardinelli, I., Colombo, M., Vighi, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s13592-011-0011-2">Predicting pesticide fate in the hive (part 1), experimentally determined τ-fluvalinate residues in bees, honey and wax.</a> Apidologie. 42 (3), 378(2011).</li>
<li>Sanchez-Bayo, F., Goka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pesticide+residues+and+bees-a+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pesticide residues and bees-a risk assessment.</a> PLoS One. 9 (4), e94482(2014).</li>
<li>Johnson, R. M., Ellis, M. D., Mullin, C. A., Frazier, M. <a target="_blank" href="http://www.apidologie.org/articles/apido/abs/2010/03/m09141/m09141.html">Pesticides and honey bee toxicity-USA.</a> Apidologie. 41, 312-331 (2010).</li>
<li>Yang, E. C., Chang, H. C., Wu, W. Y., Chen, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+olfactory+associative+behavior+of+honeybee+workers+due+to+contamination+of+imidacloprid+in+the+larval+stage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impaired olfactory associative behavior of honeybee workers due to contamination of imidacloprid in the larval stage.</a> PLoS One. 7, e49472(2012).</li>
<li>Urlacher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+chlorpyrifos+levels+in+forager+bees+and+comparison+with+levels+that+disrupt+honey+bee+odor-mediated+learning+under+laboratory+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Measurements of chlorpyrifos levels in forager bees and comparison with levels that disrupt honey bee odor-mediated learning under laboratory conditions.</a> J. Chem. Ecol. 42 (2), 127-138 (2016).</li>
<li>Chen, Y. W., Wu, P. S., Yang, E. C., Nai, Y. S., Huang, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1226861516300012">The impact of pyriproxyfen on the development of honey bee (Apis mellifera L.) colony in field.</a> J. Asia Pac. Entomol. 19 (3), 589-594 (2016).</li>
<li>Dennehy, T. J., DrGain, B. A., Harpold, V. S., Brink, S. A., Nichols, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDennehy%2C+TJ+%22Whitefly+Resistance+to+Insecticides+in+Arizona%3A+2002+and+2003+Results%22">Whitefly Resistance to Insecticides in Arizona: 2002 and 2003 Results</a>. , San Antonio, TX, USA. 
 <a target="_blank" href="http://ag.arizona.edu/crop/cotton/insects/wf/whiteflyresistance0204.pdf">http://ag.arizona.edu/crop/cotton/insects/wf/whiteflyresistance0204.pdf</a> 1926-1938 (2004).</li>
<li>Yang, E. C., Wu, P. S., Chang, H. C., Chen, Y. W. Effect of sub-lethal dosages of insecticides on honey bee behavior and physiology. Proceedings of international seminar on enhancement of functional biodiversity relevant to sustainable food production, ASPAC, Tsukuba, Japan, , 
 <a target="_blank" href="http://www.niaes.affrc.go.jp/sinfo/sympo/h22/1109/paper_06.pdf ">http://www.niaes.affrc.go.jp/sinfo/sympo/h22/1109/paper_06.pdf </a> (2010).</li>
<li>Fourrier, J., et al. <a target="_blank" href="http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0132985">Larval exposure to the juvenile hormone analog pyriproxyfen disrupts acceptance of and social behavior performance in adult honey bees.</a> PLoS One. 10, e0132985(2015).</li>
<li>Hanley, A. V., Huang, Z. Y., Pett, W. L. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.2003.11101097">Effects of dietary transgenic Bt corn pollen on larvae of Apis mellifera and Galleria mellonella.</a> J. Apicult.Res. 42 (4), 77-81 (2003).</li>
<li>Kaftanoglu, O., Linksvayer, T. A., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+honey+bees%2C+apis+mellifera%2C+in+vitro+1%2C+effects+of+sugar+concentrations+on+survival+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Rearing honey bees, apis mellifera, in vitro 1, effects of sugar concentrations on survival and development.</a> J. Insect Sci. 11 (96), 1-10 (2011).</li>
<li>Vandenberg, J. D., Shimanuki, H. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1987.11100743">Technique for rearing worker honey bees in the laboratory.</a> J. Apicult. Res. 26 (2), 90-97 (1987).</li>
<li>Peng, Y. S. C., Mussen, E., Fong, A., Montague, M. A., Tyler, T. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/002220119290085I">Effects of chlortetracycline on honey bee worker larvae reared in vitro.</a> J. Invertebr.Pathol. 60 (2), 127-133 (1992).</li>
<li>Bitondi, M. M., Mora, I. M., Simoes, Z. L., Figueiredo, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Apis+mellifera+pupal+melanization+program+is+affected+by+treatment+with+a+juvenile+hormone+analogue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Apis mellifera pupal melanization program is affected by treatment with a juvenile hormone analogue.</a> J. Insect Physiol. 44 (5-6), 499-507 (1998).</li>
<li>Zufelato, M. S., Bitondi, M. M., Simoes, Z. L., Hartfelder, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+juvenile+hormone+analog+pyriproxyfen+affects+ecdysteroid-dependent+cuticle+melanization+and+shifts+the+pupal+ecdysteroid+peak+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The juvenile hormone analog pyriproxyfen affects ecdysteroid-dependent cuticle melanization and shifts the pupal ecdysteroid peak in the honey bee (Apis mellifera).</a> Arthropod Struct. Dev. 29 (2), 111-119 (2000).</li>
<li>Santos, A. E., Bitondi, M. M., Simoes, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone-dependent+protein+patterns+in+integument+and+cuticular+pigmentation+in+Apis+mellifera+during+pharate+adult+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hormone-dependent protein patterns in integument and cuticular pigmentation in Apis mellifera during pharate adult development.</a> J. Insect Physiol. 47 (11), 1275-1282 (2001).</li>
<li>Brouwers, E. V. M. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1984.11100616">Glucose/Fructose ratio in the food of honeybee larvae during caste differentiation.</a> J. Apicult.Res. 23 (2), 94-101 (1984).</li>
<li>Howe, S. R., Dimick, P. S., Benton, A. W. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1985.11100649">Composition of freshly harvested and commercial royal jelly.</a> J. Apicult. Res. 24 (1), 52-61 (1985).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils ont pas d&#39;intérêts financiers concurrents.

La méthode de ponte reine limitée et la méthode queen-échange sont des étapes essentielles pour la mise en place des groupes d&#39;abeilles de miel pour les essais sur le terrain dans ce protocole. La méthode de ponte reine limitée permet la synchronisation du cycle de vie des abeilles. Par conséquent, les chercheurs peuvent choisir 1 jour larves âgées du même âge pour le traitement avec différentes doses de pesticides. Pour la méthode queen-échange, la reine a été échangée entre la partie A (4 cadres) et B (5 trames) p...

La présence de pesticides dans l&#39;environnement est l&#39; un des problèmes les plus graves qui influe sur la vie d&#39;une abeille 1, 2, 3. Plusieurs études ont démontré la présence commune des résidus de pesticides dans les colonies d&#39;abeilles et les produits apicoles. A Taiwan, l&#39;application moyenne des pesticides était 11-12 kg / ha chaque année (de 2005 à 2013). La quantité de pesticides utilisés à Taiwan est supérieure à celle des pays de l&#39; UE, et les pays d&#39; Amérique latine 4, 5. En d&#39;autres termes, l&#39;environnement apicole souffre de stress grave des pesticides, en particulier à Taiwan et peut-être dans d&#39;autres pays. L&#39;abeille Apis mellifera est l&#39; un des principaux insectes pollinisateurs dans les systèmes agricoles 6 et elle produit également des produits de valeur tels que le miel. Cependant, les abeilles sont Exposed à divers pesticides et ces pesticides peut être ramené à la recherche de nourriture après ruchers sur les fleurs qui ont été traitées avec des pesticides lors de la collecte nectar et de pollen 7, 8. Ils peuvent également être exposés aux pesticides par les apiculteurs eux - mêmes visant à contrôler les problèmes de ravageurs à l&#39; intérieur des ruches 9, 10, 11. Parce que les larves d&#39;abeilles sont alimentés par les abeilles nourrices pour leur développement, les larves, les drones et même la reine peut être exposé à ces nectars contaminées par les pesticides et le pollen 12. La toxicité des différents pesticides pour les abeilles doit être adressée 13. De nombreux efforts ont été faits pour évaluer les problèmes de résidus de pesticides sur l&#39;environnement. Yang et al. testé l&#39;influence de l&#39;insecticide imidaclopride neurotoxiques sur le développement des larves d&#39;abeilles dans leruche et a rapporté qu&#39;une dose sublétale de imidaclopride a donné lieu à un comportement associatif olfactif des abeilles adultes 14. En outre, Urlacher et al. a examiné les effets sublétaux d&#39;un pesticide organophosphoré, chlorpyrifos, sur la performance de l&#39; apprentissage d&#39;un travailleur d&#39;abeille de miel dans des conditions de laboratoire 15. Dans notre étude précédente, nous avons évalué l&#39;impact d&#39;un régulateur de croissance des insectes (IGR), pyriproxyfène (PPN), sur les abeilles larves 16. Dans cet article, nous présentons les méthodes d&#39;évaluation des impacts chimiques sur le développement des abeilles. méthodes d&#39;alimentation des abeilles au miel ont été décrits et appliqués soit à abeilles domestiques individuels ou à une colonie. Dans un premier temps , nous avons testé différentes concentrations de l&#39; alimentation des larves de base contaminées par des pesticides (BLD) sur les larves dans les colonies pour évaluer l&#39;impact des pesticides sur les abeilles individuelles in vivo. Nous avons ensuite simuler le Condit natureldes ions du pesticide à l&#39;aide de sirop contaminées par des pesticides à l&#39;intérieur des ruches. Dans cette méthode, PPN, qui est largement utilisé contre les insectes nuisibles 17 et est nocif pour le développement des larves d&#39;abeilles et pupes 16, 18, 19, sera un indicateur pour représenter l&#39;effet négatif du pesticide sur le terrain.

<table><tbody><tr><td>Boîte à abeilles</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>W1266</td><td>Éleveur d’abeilles</td></tr><tr><td>Exclusion de reine (entre les cadres)</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>I1575</td><td>Limitation de la reine&nbsp ;</td></tr><tr><td>Grille de grand lit (sur le dessus)</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>I1566</td><td>Limitation de la reine sur le dessus&nbsp ;</td></tr><tr><td>Brosse à abeilles</td><td>SAN-YI Honey Factory, Taiwan</td><td>W1414</td><td>nettoyez doucement les abeilles sur le cadre</td></tr><tr><td>Mangeoire à abeilles</td><td>SAN-YI Honey Factory, Taiwan</td><td>P0219</td><td>donnez du sirop de sucre à la colonie</td></tr><tr><td>Lame transparente</td><td>Wan-Shih-Chei, Taiwan (http://www.mbsc.com.tw/a01goods.asp?s_id=40)</td><td>1139</td><td>Marquez la zone larvaire sur les cadres (Matériel : Polyéthylène téréphtalate, PET) (Taille = Longueur*Largeur*épaisseur = 29,7 mm * 21 mm * 0,1 mm)</td></tr><tr><td>Plaque de culture de tissu 24 puits</td><td>Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd</td><td>TCP011024</td><td>Élevage de pupes à partir de l’extraction</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Tomin medical equipmenco., LTD.</td><td>TM-321</td><td>Fabriquer de l’eau déminéralisée distillée stérilisée (ddH2O)</td></tr><tr><td>P20 pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123600</td><td>Ajouter du PPN dans le bassin alimentaire des larves d’abeilles</td></tr><tr><td>Incubateur&nbsp ;</td><td>Yihder Co., Ltd.</td><td>LE-550RD</td><td>Élevage de pupes à partir de l’extraction</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>COW LUNG INSTRUMENT CO., LTD</td> KCS34155 <td></td><td>Élevage de pupes à partir de l’extraction</td></tr><tr><td>Gelée</td><td>royale Université nationale Ilan (NIU)</td><td>NIU</td><td>Préparer un régime larvaire de base (BLD)</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td>Préparer un régime larvaire de base (BLD)</td></tr><tr><td>D-(-)-Fructose</td><td>Sigma</td><td>F0127</td><td>Préparer un régime larvaire de base ( BLD)</td></tr><tr><td>Extrait de levure</td><td>CONDA, pronadisa</td><td>1702</td><td>Faire un régime larvaire de base (BLD)</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Taiwan E01071010</td><td></td><td>Fabriquer du sirop de sucre pour l’alimentation des abeilles</td></tr><tr><td>Pyriproxyfène (11 %)</td><td>LIH-NUNG CHEMICAL CO.. LTD.</td><td>N° d’enregistrement 1937</td><td>Régulateur de croissance des insectes (IGR) utilisé dans l’expérience</td></tr></tbody></table>

Évaluation de l&#39;incidence des produits chimiques sur l&#39;environnement miel de développement abeille de l&#39;individu à la colonie niveau

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

La présence de pesticides dans l’environnement apicole est l’un des problèmes les plus graves qui impactent la vie d’une abeille mellifère. Les pesticides peuvent être rapportés à la ruche après que les abeilles ont butiné sur les fleurs qui ont été pulvérisées avec des pesticides. Les aliments contaminés par les pesticides peuvent être échangés entre les ouvrières, qui nourrissent ensuite les larves, ce qui peut potentiellement affecter le développement des abeilles mellifères. Ainsi, les pesticides résiduels dans l’environnement peuvent devenir un facteur de dommages chroniques pour les populations d’abeilles mellifères et conduire progressivement à l’effondrement des colonies. Dans le protocole présenté, les méthodes d’alimentation des abeilles mellifères sont décrites et appliquées soit à une abeille mellifère individuelle, soit à une colonie. Ici, le régulateur de croissance des insectes (IGR) pyriproxyfène (PPN), qui est largement utilisé pour lutter contre les insectes nuisibles et est nuisible au développement des larves et des pupes d’abeilles mellifères, est utilisé comme pesticide. La procédure de présentation peut être appliquée à d’autres produits chimiques potentiellement nocifs ou à des agents pathogènes des abeilles pour des études plus approfondies.

Pour l&#39;essai sur le terrain de l&#39;abeille, une reine était limitée à la section 4 cadre pour la ponte des œufs. Cette étape pourrait augmenter la densité de géniteurs dans un cadre et faciliter les observations suivantes. Chaque traitement a été marqué, et le développement des abeilles a été clairement observée à travers une lame transparente. Dans l&#39; alimentation in vivo de PPN-BLD aux larves d&#39;abeilles dans la ruche a été réalisée pour évaluer avec préc...

Nous présentons ici un procédé pour alimenter des aliments contaminés par les pesticides à la fois une abeille individuelle et une colonie ruche. La procédure évalue l&#39;effet des pesticides sur les abeilles individuelles par l&#39; alimentation in vivo de l&#39; alimentation des larves de base et sur la condition naturelle de la colonie de ruche.

Évaluation de l&#39;incidence des produits chimiques sur l&#39;environnement Miel de développement Abeille de l&#39;individu à la colonie Niveau

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

L'objectif général de cette expérience est d'évaluer comment les résidus de pesticides dans l'environnement affectent les abeilles individuelles dans les conditions naturelles des colonies de ruches. Le principal avantage de cette méthode est qu'elle permet d'examiner les effets des pesticides ou d'autres contaminants d'intérêt tant sur les abeilles individuelles que sur l'ensemble des colonies. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car la manipulation des nymphes est délicate en raison de leur fragilité.Le démonstrateur de la procédure sera Ko Chong-Yu, un étudiant en doctorat de mon laboratoire. Avant l'expérience, nourrissez chaque colonie avec un litre de sirop de sucre à 50 %. Renouvelez le réservoir alimentaire chaque semaine ; une colonie en bonne santé possédera neuf cadres de rayons de miel et une reine pondant des œufs.Pour commencer, localisez la reine dans la colonie et remplacez au moins un cadre du côté où elle se trouve par un cadre vide. Insérez ensuite les grille-reaunes afin d'isoler la reine dans une section de quatre cadres contenant au moins un cadre vide. Le jour suivant, vérifiez la présence d'œufs fraîchement pondus sur les cadres et pl

evaluating-effect-environmental-chemicals-on-honey-bee-development

Research

Recherche

JoVE Journal

Environment

Environnement

Nous décrivons ici notre protocole détaillé pour la préparation de colonies d'abeilles seule cohorte - un outil utile pour analyser le travailleur physiologie rôle associé. Nous décrivons également des protocoles détaillés pour traiter les travailleurs avec l'hormone juvénile et ecdysone pour évaluer l'implication de ces hormones dans la régulation du comportement et / ou de la physiologie des travailleurs.

Préparation des colonies mono-cohorte et Traitement hormonal des travailleurs Honeybees à Analyser Physiologie Associé à Rôle et / ou le système endocrinien

Les consortiums microbiens dans les ruches de bourdons enrichissent et conserver le pollen pour les larves d’abeilles. Prochaine génération séquençage, ainsi que le laboratoire et les expériences sur le terrain, ce manuscrit décrit les protocoles utilisés pour vérifier l’hypothèse que des résidus de fongicide modifient le microbiome du pollen et la démographie de colonie, conduisant finalement à la colonie perte.

Techniques de calcul empirique et métagénomique éclairent les mécanismes de fongicides compromis Bee santé

Des doses sublétales de pesticides peuvent affecter colonies de manières qui sont difficiles à détecter en utilisant uniquement des méthodes périodiques ou visuels. Méthodes pour mesurer la masse totale abeille adulte, couvain et les ressources alimentaires de la pesée des ruches et des parties de la ruche, photographier les images et en installant des capteurs, sont fournis. Analyse des données est également abordée.

Surveiller les effets de la colonie-niveau d’exposition aux pesticides sublétale sur les abeilles à miel

Pulvérisations sur les plantes à fleurs peuvent vous exposer à de fortes concentrations de résidus de fongicide transmissibles par le pollen des abeilles solitaires. À l’aide d’expériences en laboratoire in vitro-larves d’abeilles élevés, cette étude examine les effets interactifs de consommer le pollen traitées par des fongicides dérivé de plantes hôte et non hôte.

In Vitro Élevage des abeilles solitaires : un outil pour évaluer les facteurs de risque larvaire

Ce protocole a été développé pour améliorer la compréhension de la façon dont les produits agrochimiques affectent la reproduction desabeilles mellifères (Apis mellifera)en établissant des méthodes pour exposer les reines des abeilles mellifères et leurs soignants travailleurs aux produits agrochimiques dans un laboratoire contrôlé et en surveillant attentivement leurs réponses pertinentes.

Évaluation du risque agrochimique pour les reines d’abeilles mellifères accouplées

Le présent protocole explique une méthode pour nourrir les larves des abeilles solitaires, Osmia excavata, contaminées par des pesticides. La procédure examine l’écotoxicité du pesticide pour les larves des abeilles solitaires.

Évaluation de l’effet des pesticides sur les larves des abeilles solitaires

Ce manuscrit décrit une approche automatisée de sélection de la taille du gel pour purifier les fragments d’ADN pour le séquençage de nouvelle génération. La technologie Ranger permet une automatisation complète de l’ensemble du processus de chargement de gel d’agarose, d’analyse électrophorétique et de récupération de fragments d’ADN ciblés, ce qui permet d’obtenir des bibliothèques de séquençage de nouvelle génération à haut débit et de haute qualité.

Sélection de la taille Gel automatisé pour améliorer la qualité des bibliothèques de séquençage de prochaine génération Préparé à partir d&#39;échantillons d&#39;eau de l&#39;environnement

Un protocole pour la conception et la construction d'un réservoir de sol relié à un petit climat contrôlé soufflerie pour étudier les effets des forçages atmosphériques sur l'évaporation est présenté. Tant le réservoir du sol et la soufflerie sont instrumentées avec des technologies de capteurs pour le continu la mesure in situ des conditions environnementales.

Explorer les effets des forçages atmosphériques sur évaporation: l&#39;intégration expérimentale de la couche limite atmosphérique et de subsurface

l’eau de saignement de production (PBW) a été traitée avec des nanoparticules d’oxyde cuivrique (CuO-NPs) et la toxicité cellulaire a été évaluée dans des cellules humaines en culture. L’objectif de ce protocole était d’intégrer l’échantillon environnemental natif dans un format de culture cellulaire évaluant les changements de toxicité dus au traitement CuO-NP.

Suppression des éléments traces par Cupric nanoparticules d&#39;oxyde de Uranium<em&gt; In Situ</em&gt; Récupération de l&#39;eau de ressuage et son effet sur la viabilité cellulaire

Un système d’exposition à circulation continue robuste et flexible conçu pour maintenir les sédiments en suspension est présenté. Le système est utilisé en laboratoire pour étudier les effets des sédiments en suspension sur diverses espèces aquatiques et à différents stades de leur vie.

Un système d&#39;exposition accréditives pour l&#39;évaluation de suspension Sédiments effets sur la vie aquatique

Découvrez une méthode d'évaluation des effets des pesticides sur les abeilles individuelles et les colonies entières. Cette approche in vivo utilise un régime larvaire pour étudier l'impact écotoxicologique sur Apis mellifera.

Évaluation de lincidence des produits chimiques sur lenvironnement Miel de développement Abeille de lindividu à la colonie Niveau (Vidéo) | JoVE Journal

Évaluation de l'incidence des produits chimiques sur l'environnement Miel de développement Abeille de l'individu à la colonie Niveau

Explorer plus de vidéos