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DOI: 10.3791/55465-v
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Nous décrivons un procédé pour générer des tranches de poumon couper avec précision (PCLS) et les immunocoloration pour visualiser la localisation de divers types de cellules immunitaires dans le poumon. Notre protocole peut être étendu pour visualiser l'emplacement et la fonction de différents types de cellules dans une variété de conditions.
L’objectif global de cette méthode est d’utiliser des coupes pulmonaires coupées avec précision, ou PCLS, pour visualiser la localisation et le trafic de divers types de cellules immunitaires dans les poumons. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’immunologie, telles que la localisation et les schémas de migration des cellules immunitaires dans les poumons. Le principal avantage de cette technique est que plusieurs interactions peuvent être visualisées dans le tissu vivant ex vivo qui maintient l’architecture tridimensionnelle du poumon.
Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la localisation et le trafic des cellules immunitaires pendant l’inflammation, elle peut également être utilisée pour visualiser la contraction des voies respiratoires et des tissus musculaires lisses. Pour prélever le tissu pulmonaire, utilisez d’abord des ciseaux pour ouvrir la peau et le péritoine du milieu de l’abdomen jusqu’à la mâchoire d’une souris âgée de six à 12 semaines, puis déplacez les intestins sur le côté de la cavité abdominale. Coupez la veine cave inférieure pour drainer le sang des poumons et utilisez la pointe pointue des ciseaux pour percer le diaphragme afin de permettre l’expansion de la cage thoracique.
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