Name: Técnicas para induzir e quantificar a senescência celular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-01T11:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Aprenda técnicas para induzir e quantificar senescência celular em diferentes modelos e tipos celulares. Estes métodos fornecem ferramentas essenciais para estudar os fatores biológicos que regulam o envelhecimento celular e organismal.

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Este estudo foi apoiado pelo Programa de Pesquisa Intramural dos Institutos Nacionais de Saúde, Instituto Nacional sobre Envelhecimento. Os autores agradecem a Myriam Gorospe e Kotb Abdelmohsen para muitas discussões úteis sobre senescência e Kotb Abdelmohsen para também leitura crítica do manuscrito. Agradecemos também a nossos membros de laboratório, especialmente Douglas Dluzen pela leitura crítica do manuscrito.

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<li>Dimri, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biomarker+that+identifies+senescent+human+cells+in+culture+and+in+aging+skin+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92, 9363-9367 (1995).</li>
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<li>Ben-Porath, I., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+signals+and+pathways+activating+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The signals and pathways activating cellular senescence.</a> Int J Biochem Cell Biol. 37 (5), 961-976 (2005).</li>
<li>Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+cells%2C+tumor+suppression%2C+and+organismal+aging%3A+good+citizens%2C+bad+neighbors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Senescent cells, tumor suppression, and organismal aging: good citizens, bad neighbors.</a> Cell. 120 (4), 513-522 (2005).</li>
<li>Coppe, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+secretory+phenotypes+reveal+cell-nonautonomous+functions+of+oncogenic+RAS+and+the+p53+tumor+suppressor%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor.</a> PLoS Biol. 6 (12), 2853-2868 (2008).</li>
<li>Tominaga-Yamanaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF90+coordinately+represses+the+senescence-associated+secretory+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">NF90 coordinately represses the senescence-associated secretory phenotype.</a> Aging (Albany NY). 4 (10), 695-708 (2012).</li>
<li>Wiley, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+Dysfunction+Induces+Senescence+with+a+Distinct+Secretory+Phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial Dysfunction Induces Senescence with a Distinct Secretory Phenotype.</a> Cell Metab. 23 (2), 303-314 (2016).</li>
<li>Hoare, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOTCH1+mediates+a+switch+between+two+distinct+secretomes+during+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">NOTCH1 mediates a switch between two distinct secretomes during senescence.</a> Nat Cell Biol. 18 (9), 979-992 (2016).</li>
<li>Rodier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+the+senescence-associated+secretory+phenotype+%28SASP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Detection of the senescence-associated secretory phenotype (SASP).</a> Methods Mol Biol. 965, 165-173 (2013).</li>
<li>Srikantan, S., Marasa, B. S., Becker, K. G., Gorospe, M., Abdelmohsen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradoxical+microRNAs%3A+individual+gene+repressors%2C+global+translation+enhancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Paradoxical microRNAs: individual gene repressors, global translation enhancers.</a> Cell Cycle. 10 (5), 751-759 (2011).</li>
<li>Abdelmohsen, K., Gorospe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noncoding+RNA+control+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+RNA%22%5BJournal%5D)">Noncoding RNA control of cellular senescence.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA. , (2015).</li>
<li>Bhaumik, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs+miR-146a%2Fb+negatively+modulate+the+senescence-associated+inflammatory+mediators+IL-6+and+IL-8%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs miR-146a/b negatively modulate the senescence-associated inflammatory mediators IL-6 and IL-8.</a> Aging. 1 (4), 402-411 (2009).</li>
<li>Rodier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-SCARS%3A+distinct+nuclear+structures+that+sustain+damage-induced+senescence+growth+arrest+and+inflammatory+cytokine+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">DNA-SCARS: distinct nuclear structures that sustain damage-induced senescence growth arrest and inflammatory cytokine secretion.</a> J Cell Sci. 124 (PT 1), 68-81 (2011).</li>
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<li>Rubio, M. A., Kim, S. -H., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+Manipulation+of+Telomerase+Expression+and+Telomere+Length%3A+implications+for+the+ionizing+radiation+response+and+replicative+senescence+of+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Reversible Manipulation of Telomerase Expression and Telomere Length: implications for the ionizing radiation response and replicative senescence of human cells.</a> J Biol Chem. 277 (32), 28609-28617 (2002).</li>
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<li>Dumont, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+replicative+senescence+biomarkers+by+sublethal+oxidative+stresses+in+normal+human+fibroblast%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Induction of replicative senescence biomarkers by sublethal oxidative stresses in normal human fibroblast.</a> Free Radic Biol Med. 28 (3), 361-373 (2000).</li>
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<li>Barzilai, N., Crandall, J. P., Kritchevsky, S. B., Espeland, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metformin+as+a+Tool+to+Target+Aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Metformin as a Tool to Target Aging.</a> Cell Metab. 23 (6), 1060-1065 (2016).</li>
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<li>Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocols+to+detect+senescence-associated+beta-galactosidase+%28SA-betagal%29+activity%2C+a+biomarker+of+senescent+cells+in+culture+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo.</a> Nat Protoc. 4 (12), 1798-1806 (2009).</li>
<li>Noppe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+flow+cytometric+method+for+measuring+senescence+associated+beta-galactosidase+activity+in+human+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Rapid flow cytometric method for measuring senescence associated beta-galactosidase activity in human fibroblasts.</a> Cytometry A. 75 (11), 910-916 (2009).</li>
<li>Bassaneze, V., Miyakawa, A. A., Krieger, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemiluminescent+detection+of+senescence-associated+beta+galactosidase%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemiluminescent detection of senescence-associated beta galactosidase.</a> Methods Mol Biol. 965, 157-163 (2013).</li>
<li>Redon, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((gamma-H2AX+detection+in+peripheral+blood+lymphocytes%2C+splenocytes%2C+bone+marrow%2C+xenografts%2C+and+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">gamma-H2AX detection in peripheral blood lymphocytes, splenocytes, bone marrow, xenografts, and skin.</a> Methods Mol Biol. 682, 249-270 (2011).</li>
<li>Kosar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+heterochromatin+foci+are+dispensable+for+cellular+senescence%2C+occur+in+a+cell+type-+and+insult-dependent+manner+and+follow+expression+of+p16%28ink4a%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated heterochromatin foci are dispensable for cellular senescence, occur in a cell type- and insult-dependent manner and follow expression of p16(ink4a).</a> Cell Cycle. 10 (3), 457-468 (2011).</li>
<li>Kennedy, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+mouse+cells+fail+to+overtly+regulate+the+HIRA+histone+chaperone+and+do+not+form+robust+Senescence+Associated+Heterochromatin+Foci%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Div%22%5BJournal%5D)">Senescent mouse cells fail to overtly regulate the HIRA histone chaperone and do not form robust Senescence Associated Heterochromatin Foci.</a> Cell Div. 5, 16(2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Aqui, nós descrevemos métodos para replicativa e a DNA-danos senesccia induzida utilizando fibroblastos diplóides humanos. Além disso, as técnicas para quantificar os níveis de mRNA de várias proteínas associadas com a senescência proteína e estão incluídos, bem como a coloração para SA-β-gal e para a ADN-danos marcador γ-H2AX. Estes protocolos podem ser amplamente utilizada para avaliar os fenótipos senescentes tanto in vitro como in vivo, embora existam muitas advertências para a caracterização i...

Mais de meio século atrás, Hayflick e colegas descreveram como células não transformadas proliferar em cultura, mas apenas por um período limitado de tempo 1. cultura de longo prazo de fibroblastos humanos causado as células para parar a proliferar; no entanto, eles foram metabolicamente ativo, e este foi chamado senescência celular. Senescência pode ser benéfica para inibir tumorigênese, mas também pode ser prejudicial, como é pensado para contribuir para a perda de capacidade de regeneração que ocorre com o envelhecimento 2, 3. As células senescentes foram mostrados a acumular-se em tecidos como os seres humanos 4 anos de idade e têm sido implicadas num certo número de processos biológicos, incluindo o desenvolvimento embrionário, a cicatrização de feridas, reparação de tecidos, e inflamação relacionada com a idade 2. passagem contínua de células em cultura induz a senescência replicativa, que tem sido associadapara telômero atrito e instabilidade genômica. Várias tensões de células, incluindo danos no DNA e oncogenes, pode também causar a senescência 3. Senescência causada por outros que o atrito dos telómeros factores é muitas vezes chamado induzida pelo stress ou senescência prematura e geralmente depende da INK4A p16 / Rb via da 5. Embora a proliferação, as células não transformadas geralmente aparecem eixo em forma, as células senescentes pode ser identificado como tendo certas características, incluindo um, grande morfologia plana e aumento da actividade β-galactosidase associada à senescência (SA-β-gal) (Figuras 1 e 2). As células senescentes também acumular marcadores de dano de ADN, incluindo γ-H2AX (Figura 3) 6, e, potencialmente, associada à senescência heterocromatina focos (SAHF) (Figura 4) 7. As células senescentes tem níveis mais elevados de reguladores do ciclo celular, incluindo p<html> 16 (INK4A p16) e / ou p21 e p53 (Figura 5) 8, 9. Além disso, dados recentes têm mostrado que as células senescentes pode ter efeitos não autónomos através da secreção de uma série de citoquinas pró-inflamatórias e quimiocinas chamado o associada à senescência secretora fenótipo (SASP) 10. Embora este fenómeno SASP pode variar de tipo de célula para tipo de célula, em geral, é demonstrado por um aumento da interleucina-6 (IL-6), IL-8, factor de estimulação de colónias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF), growth- α regulado oncogene (GRO-α), e GRO-β, entre outros (Figura 6). O esforço particular ou danos que induz senescência também pode influenciar o fenótipo secretor 11, 12, 13. SASP pode ser detectada através da medição dos níveis de proteínas segregadas utilizando ELISA ou matrizes de citoquinas / proteínass = &quot;xref&quot;&gt; 10, 14. Apesar de mecanismos de pós-transcricional pode regular os níveis de proteína SASP 11, 15, 16, 17, as alterações nos níveis de ARNm pode também ser detectada em muitos casos. Estas alterações são, geralmente, mais sensível e mais fácil de quantificar do que as medições de nível de proteína. Outros marcadores senescentes também pode ser avaliada, incluindo danos no DNA focos nuclear persistente, chamados segmentos de ADN com alterações na cromatina de reforço senescência (ADN-CICATRIZES) 18, e vários outros marcadores de 3, 19, 20. Aqui, nós descrevemos técnicas comuns para induzir a senescência em células em cultura e também para a medição de vários marcadores de senescência, incluindo SA-β-Gal, γ-H2AX, SAHF, e a proteína e ARNm de senescemoléculas dno-associado.

<table><tbody><tr><td>16% de géis de tris-glicina</td><td>Invitrogen</td><td>XP00160BOX</td><td></td></tr><tr><td>Acid-Phenol ChCl3</td><td>Ambion</td><td>AM9720</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-Fluor 568 anticorpo anti-camundongo de cabra</td><td>Invitrogen</td><td>A11031</td><td>Diluição 1:300</td></tr><tr><td>Elevadores de células</td><td>Corning Inc.</td><td>3008</td><td>Raspador de células</td></tr><tr><td>ECL anti-camundongo HRP anticorpo ligado</td><td>Amersham</td><td>NA931V</td><td></td></tr><tr><td>ECL Plus Western Blotting Substrate</td><td>Pierce</td><td>32132</td><td>ECL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Molecular Probes</td><td>MP01306</td><td>estoque 5 mg / mL em dH2O</td></tr><tr><td>GAPDH anticorpo Santa</td><td>Cruz</td><td>sc-32233</td><td>diluição 1:1.000 - 5.000</td></tr><tr><td>GlycoBlue</td><td>Ambion</td><td>AM9515</td><td></td></tr><tr><td>Histone H3 dimetil K9 monoclonal anticorpo</td><td>Abcam</td><td>1220</td><td>diluição 1:500</td></tr><tr><td>IL-6 Quantikine ELISA ensaio</td><td>R & D sistemas</td><td>D6050</td><td></td></tr><tr><td>Ensaio ELISA Quantikine IL-8 Humano</td><td>R& D systems</td><td>D8000C</td><td></td></tr><tr><td>Human GROa Quantikine ELISA ensaio</td><td>R& D systems</td><td>DRG00</td><td></td></tr><tr><td>N-N-dimetilformamida&nbsp;</td><td>Anticorpo</td> monoclonal Sigma <td>D4551</td><td>DMF</td></tr><tr><td>p16</td><td>BD Biosciences</td><td>51-1325gr</td> 1<td>:500 diluição</td></tr><tr><td>p21 anticorpo monoclonal</td><td>Millipore</td><td>05-345</td><td>diluição 1:750</td></tr><tr><td>anticorpo monoclonal p53</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-126</td><td>1:500 clone de diluição DO-1</td></tr><tr><td>fosfo-H2AX (Ser139) FITC anticorpo conjugado</td><td>Sinalização celular</td><td>9719</td><td>1:2.000 diluição</td></tr><tr><td>POWER SYBR-green PCR master mix&nbsp;</td><td>Applied Biosystems</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>Marcadores de peso molecular pré-coloridos</td><td>Biorad</td><td>161-0374</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade&nbsp;</td><td>Membrana PVDF Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Kit</td> de coloração de &beta;-galactosidase de senescência Thermo Scientific <td>88518</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sinalização celular</td><td>9860</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Ambion/Life Tech</td><td>10296028</td><td></td></tr></tbody></table>

técnicas para induzir e quantificar cellular senescence

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

Em resposta ao stress celular ou dano, as células em proliferação podem induzir um programa específico que inicia um estado de paragem do ciclo celular a longo prazo, denominado senescência celular. A acumulação de células senescentes ocorre com o envelhecimento do organismo e por meio de cultura contínua in vitro. As células senescentes influenciam diversos processos biológicos, incluindo o desenvolvimento embrionário, reparação e regeneração de tecidos, supressão de tumores, e o envelhecimento. Características das células senescentes incluem, mas não estão limitados a, um aumento da actividade β-galactosidase associada à senescência (SA-β-gal); p16 ink4a, p53, e p21 níveis; níveis mais elevados de danos no ADN, incluindo γ-H2AX; a formação de senesccia associada Heterocromatina Focos (SAHF); e a aquisição de um associado com a senescência secretora Fenótipo (SASP), um fenómeno caracterizado pela secreção de um número de citocinas pró-inflamatórias e as moléculas de sinalização. Aqui, descrevemos os protocolos tanto para replicativo esenescência danificam o ADN induzida em células de cultura. Além disso, podemos destacar as técnicas de controlo do fenótipo senescente utilizando vários marcadores associada com a senescência, incluindo SA-β-gal, γ-H2AX e coloração SAHF, e para quantificar os níveis de proteína e ARNm de reguladores do ciclo celular e factores de SASP. Estes métodos podem ser aplicados para a avaliação da senescência em vários modelos e tecidos.

As Figuras 2-6 mostram resultados representativos de colorao SA-β-gal; coloração para γ-H2AX e SAHF; avaliação dos níveis de proteína de INK4A p16, p21, e p53; e o ARNm e os níveis proteicos de moléculas senescentes-associado. O aumento da coloração SA-β-gal ocorre com replicativo e ADN senesccia induzida por danos. Além disso, observe as alterações morfológicas que ocorrem com a senescência. As células tornam-se alargada e plana em relação ao eixo aparência d...

A senescência celular, o estado irreversível de paragem do ciclo celular, pode ser induzida por vários stresses celulares. Aqui, descrevemos os protocolos para induzir a senescência e métodos celular para avaliar marcadores de senescência.

Técnicas para induzir e quantificar Cellular Senescence

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

O objetivo geral dessas técnicas é fornecer uma caixa de ferramentas para permitir a indução, monitoramento e quantificação da senescência celular. Esses métodos podem ajudar a responder a perguntas-chave sobre a identificação e quantificação da senescência celular e os fatores biológicos que regulam o envelhecimento celular e do organismo. A principal vantagem dessas técnicas é que elas abrangem uma variedade de métodos para monitorar a senescência celular em diferentes modelos, tecidos e tipos de células.Comece por plaquear as células proliferativas de interesse de passagem inicial a uma densidade esparsa na placa apropriada para a análise. E cultive as células durante a noite em uma incubadora de cultura de tecidos. Quando as células estiverem 50-60% confluentes, aspire o meio de crescimento e lave as células com PBS duas vezes.Após a segunda lavagem, cubra as células com uma fina camada de PBS. E expor as células a uma única dose de 10 graus de irradiação gama. Substitua o PBS por meio de crescimento.E retorne as células para a incubadora. Troca do meio a cada 48 a 72 horas com monitoramento diário de alterações morfológicas em microscópio óptico. Sete a 10 dias após a irradiaç

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Se senescência impede ou promove tumorigenesis permanece controverso. Desde agentes quimioterápicos podem induzir as células cancerosas senesce, estudando senescência é essencial para propor novas terapias. No entanto, o ensaio de β-galactosidase padrão e amplamente utilizado apresenta grandes inconvenientes. Propomos aqui um fluxo de ensaio baseado em citometria rápido e sensível para quantificar a senescência.

Um método sensível para quantificar células senescentes Câncer

Aqui nós apresentamos um protocolo detalhado para detectar ambos senescentes e células-tronco pluripotentes no músculo esquelético após lesões enquanto induzindo na vivo reprogramação. Este método é adequado para avaliar o papel da senescência celular durante a regeneração do tecido e reprogramação na vivo.

Avaliação da senescência induzida por lesão e na Vivo reprogramação no músculo esquelético

Aqui, vamos discutir uma série de protocolos para indução e validação da senescência celular em culturas de células. Podemos focar diferentes estímulos indutores senescência e descrever a quantificação de marcadores comuns associadas a senescência. Nós fornecemos detalhes técnicos utilizando fibroblastos como modelo, mas os protocolos podem ser adaptados para vários modelos de celulares.

Indução e validação da senescência celular em células humanas primárias

ROS intracelular foi mostrado para jogar um papel importante na indução da senescência celular. Aqui, descrevemos um ensaio sensível para quantificação dos níveis ROS durante a senescência celular. Nós também fornecemos protocolos para avaliar o fenótipo secretor associada a senescência, que alegadamente contribui para várias desordens relacionadas com a idade.

Uma medida quantitativa de espécies reativas de oxigênio e senescência-associado fenótipo secretor em fibroblastos humanos normais durante a senescência induzida pelo Oncogene

A senescência celular é o fator-chave no desenvolvimento de patologias crônicas relacionadas à idade. A identificação da terapêutica que visam as células senescentes mostra a promessa de estender o envelhecimento saudável. Aqui, nós apresentamos um ensaio novo à tela para a identificação do senotherapeutics baseado na medida da atividade associada da senescência β-galactosidase em únicas pilhas.

Ensaio de triagem à base de SA-β-galactosidase para a identificação de medicamentos Senoterapêuticos

Este protocolo descreve o fluxo de trabalho para rotulagem metabólica de células senescentes e não-divisórias com SILAC pulsado, análise de espectrometria de massa não-alvo, e um cálculo simplificado de meias-vidas proteicas.

Medição das Taxas de Rotatividade de Proteínas em Células Cultivadas Senescentes e Não-Divisórias com Rotulagem Metabólica e Espectrometria de Massa

Aqui apresentamos um método baseado em citometria de fluxo para visualização e quantificação de marcadores associados à senescência múltipla em células únicas.

Detecção simultânea baseada em imagens e flutometria de marcadores de senescência fluorescentes múltiplas em células cancerígenas senescentes induzidas por terapia

Um protocolo para quantificação citométrica de fluxo fluorescente de células cancerígenas senescentes induzidas por drogas quimioterápicas em cultura de células ou em modelos de tumores murinos é apresentado. Os procedimentos opcionais incluem co-imunocoloração, fixação de amostras para facilitar a análise de grandes lotes ou pontos de tempo e o enriquecimento de células senescentes viáveis por classificação citométrica de fluxo.

Sonda de β-Galactosidase Associada à Senescência Fluorescente Vermelha Distante para Identificação e Enriquecimento de Células Tumorais Senescentes por Citometria de Fluxo

A imunofluorescência multiplexada permite a marcação sequencial de múltiplos marcadores de anticorpos dentro de uma única seção de tecido para apoiar a análise espacial da arquitetura do tecido e das populações celulares. Aqui, é apresentado um fluxo de trabalho para a detecção multiplex de marcadores estruturais, estruturais e imunológicos associados à senescência, incluindo preparação manual e automatizada de lâminas, imagens iterativas e análise de células únicas usando software digital de...

Ensaio de Imunofluorescência Multiplexada para Avaliação Espacial de Marcadores de Senescência in vivo

Este artigo apresenta um protocolo LysoTracker de células vivas para medir a remodelação lisossômica durante a senescência em fibroblastos humanos IMR-90.

Perfil Lisossômico com LysoTracker para avaliação quantitativa da senescência celular em fibroblastos humanos

Esse método estuda como fibroblastos cutâneos senescentes afetam os saudáveis. A senescência é induzida por exposição à UVB, e o meio condicionado é aplicado aos fibroblastos normais. Ele ajuda a avaliar compostos bioativos que visam a comunicação celular alterada no envelhecimento da pele.

Nova combinação de antioxidantes para restaurar a comunicação intercelular saudável em um modelo in vitro usando meio condicionado de células senescentes

Aprenda técnicas para induzir e quantificar senescência celular em diferentes modelos e tipos celulares. Estes métodos fornecem ferramentas essenciais para estudar os fatores biológicos que regulam o envelhecimento celular e organismal.

Técnicas para induzir e quantificar Cellular Senescence

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