Name: Création dun biorepository basé sur une clinique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Apprenez à créer un biorepository clinique pour les tumeurs cutanées en dermatologie. Cette méthode permet de collecter des échantillons excisés habituellement éliminés, facilitant la recherche biomédicale future sans perturber les opérations cliniques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ce travail a été soutenu par des fonds du Collège de l&#39;Université du Midwestern, Subvention de facilitation de la recherche en sciences de la santé, décerné à EEH, et Midwestern University, Bureau de la recherche et programmes sponsorisés Intramural Grant, décerné à KJL. Un soutien supplémentaire a été fourni par les Laboratoires Affiliés et la Dermatologie Affiliée. Nous remercions Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel et Ali Zaidi pour leur assistance technique.

Toutes les expérimentations sur des échantillons de tissus humains ont été approuvées par l&#39;IRB de l&#39;Ouest (protocole WIRB n ° 20142461). Le critère unique pour la collecte des tissus pour ces procédures est un diagnostic éprouvé par biopsie de SCC. Aucun critère d&#39;exclusion n&#39;a été décrit dans le protocole IRB original, mais les échantillons de patients atteints d&#39;une maladie transmissible transmissible par le sang connue n&#39;ont pas été utilisés. Le consentement éclairé a été obtenu avant la collecte des tissus cutanés, du sang et de la salive. Midwestern Institutional Review Board a approuvé le travail de validation avec des échantillons de biorepository basés sur la clinique à Midwestern University (AZ # 807). 1. Traitement des tissus tumoraux cutanés REMARQUE: ceci doit être réalisé par un histotecchiste de Mohs. <ol><li> Traitement du tissu de carcinome à cellules squameuses fraîches (SCC) pour l&#39;ARN et la culture explicite <ol><li> Une fois que le tissu a été excisé par le chirurgien Mohs, récoltez 10 à 50 mg (≥ 10 mm 3 </sup&gt;) Échantillon de tissu du centre du côté apical du tissu pendant la relaxation (qui est le processus de manipulation du tissu pour lui permettre de rester à plat sur la glissière) avant un traitement supplémentaire. NOTE: Ceci n&#39;est possible que si la tumeur est suffisamment grande pour permettre l&#39;élimination d&#39;un échantillon de 10 à 50 mg (≥ 10 mm 2 ) avant l&#39;évaluation histologique, qui fait partie de la procédure Mohs. Si la tumeur n&#39;est pas suffisamment grande pour permettre un retrait d&#39;au moins 2 mm 3 , ne pas procéder au traitement pour l&#39;ARN (passer l&#39;étape 5). </li><li> Transférer le tissu viable sur un tube de 1,5 ml étiqueté contenant un milieu de culture (mélange 1: 1 de DMEM: F-12 de jambon, 25 mM d&#39;HEPES, 100 UI / mL de pénicilline et 100 μg / mL de streptomycine) en utilisant une pince à épiler et assurez-vous que Le tissu est complètement immergé dans le milieu. Conservez ce tube à 4 ° C avant un traitement supplémentaire. </li><li> Utilisez le tissu pour l&#39;analyse de l&#39;isolement et de l&#39;expression de l&#39;ARN (voir étape 5) et / ou l&#39;établissementD&#39;une culture d&#39;explant (voir étape 6) dans les 24 h. </li><li> Placez le reste de l&#39;échantillon de tumeur qui a été retiré du patient (étape 1.1.1) sur un porte-tissu cryostat (ou &quot;mandrin&quot;). Incorporer le tissu dans un composé de température de coupe optimale (OCT), en gelant le tissu dans le support, pour permettre l&#39;achèvement de l&#39;histologie de Mohs et pour la préparation de diapositives histologiques supplémentaires pour l&#39;analyse expérimentale. </li></ol></li><li> Préparation des diapositives histologiques <ol><li> Couper les sections de tissu de 7 μm d&#39;épaisseur en utilisant un cryostat et créer deux (ou plus) diapositives pour chaque échantillon de tumeur. Assurez-vous que chaque diapositive contient jusqu&#39;à trois sections de la tumeur complète. REMARQUE: L&#39;une des deux diapositives sera colorée en utilisant H &amp; E par l&#39;auteur histotecnologique de Mohs, et la ou les glissières supplémentaires peuvent être traitées avec des analyses IF, IHC ou FISH. </li><li> Placez les lames dans de l&#39;acétone pendant 1-2 s pour réparer le tissu. Réglez ces glissières de côté pour sécher. Ne pas H &amp; ELa tache ou la lamelle couvre la diapositive pour être utilisée pour l&#39;immunofluorescence future (IF), l&#39;immunohistochimie (IHC) ou l&#39;analyse par hybridation in situ fluorescente (FISH), selon le protocole expérimental. </li></ol></li><li> Traitement du tissu post-Mohs <ol><li> Une fois que le traitement de Mohs a été complété (étapes 1.1-1.2), travaillez dans la chambre du cryostat et évacuez l&#39;échantillon à partir du milieu de cryo-incorporation et placez le tissu dans un tube cryogénique étiqueté. </li><li> Placez le flacon marqué dans de l&#39;azote liquide avant que le tissu ne soit décongelé. Si des échantillons doivent être utilisés pour des analyses de protéines et / ou d&#39;ADN, ils peuvent être transférés dans de l&#39;azote liquide ou un congélateur de -80 ° C en quelques minutes pour être stockés pour une future analyse de la protéine et de la mutation de l&#39;ADN (voir les étapes 4-5) . REMARQUE: Si l&#39;on désire l&#39;ARN intact à partir de l&#39;échantillon post-Mohs, il est essentiel de garder l&#39;échantillon congelé lors du retrait du milieu de cryo-incorporation. Si les soins extrêmes ne sont pas exercés àCette étape, l&#39;échantillon post-Mohs devrait être réservé pour l&#39;analyse des protéines et / ou de l&#39;ADN. </li></ol></li><li> Traitement de l&#39;ANT frais <ol><li> Au moment de la fermeture de Mohs, obtenez ANT du chirurgien Mohs. </li><li> Supprimez une quantité égale ou supérieure de ANT telle que récoltée à partir de l&#39;échantillon SCC (voir ci-dessus) du côté apical du tissu normal et transférez-le à un tube de 1,5 ml étiqueté contenant du milieu de culture (mélange 1: 1 de DMEM: Ham- 12 complété par 25 mM d&#39;HEPES, 100 UI / mL de pénicilline et 100 μg / mL de streptomycine) à l&#39;aide d&#39;une pince à épiler. </li><li> Plonger complètement le tissu dans le même milieu de culture et conserver à 4 ° C jusqu&#39;à un traitement ultérieur (voir étapes 4-6). </li></ol></li></ol> 2. Traitement du sang, de la salive et du prélèvement buccal <ol><li> Obtenir environ 10 ml de sang dans les tubes de collecte EDTA par ponction veineuse. </li><li> Transférer le sang des tubes de collecte vers un tube de centrifugeuse stérile de 15 ou 50 mL. Retirer environ 200 μL dans un tube cryogénique de 1,5 ml, en évitant les bulles; Conserver cet échantillon de sang entier à -80 ° C, pour être utilisé pour le génotypage futur et l&#39;appariement des tissus, si nécessaire. <ol><li> Faites passer le sang restant à 1000 xg pendant 30 minutes et suivez les procédures standard pour collecter la fraction plasmatique. </li><li> Aliquoter le plasma dans des incréments de 1 ml dans des tubes cryogéniques de 1,5 ml et stocker à -80 ° C pour une utilisation lors des futures analyses de biopsies liquides. </li></ol></li><li> Utilisez un écouvillon stérile pour obtenir un échantillon d&#39;écouvillon buccal et rangez l&#39;écouvillon dans un tube stérile à température ambiante. </li><li> Si nécessaire, obtenir un échantillon de salive et stocker dans un tube stérile à température ambiante. REMARQUE: Ces échantillons peuvent être utilisés pour le génotypage futur et l&#39;appariement des tissus, si nécessaire. </li></ol> 3. Conservation des échantillons <ol><li> Transférer les informations de la liste de contrôle des échantillons de patients à la base de données biorepository. Inclure l&#39;information du patient et le diagnosticNosis du tableau des patients. </li><li> Imprimez les étiquettes avec un code à barres pour chaque échantillon et enregistrez chacun dans la base de données pour lier chaque échantillon collecté aux données du patient. </li><li> Enregistrez la distribution des échantillons identifiés dans la base de données biorepository avant de transférer les échantillons au laboratoire de recherche. </li></ol> 4. Isolation des protéines et analyse Western Blot <ol><li> Placez chaque échantillon de tissu (SCC et / ou ANT) dans un flacon contenant 500 μL de tampon de lyse cellulaire contenant des inhibiteurs de protéase par 100 mg de tissu pour lyser le tissu. NOTE: Nous avons utilisé un tampon de dosage de radioimmunoprécipitation (RIPA), composé de 50 mM de Tris pH 8,0, 150 mM de NaCl, 0,5% de désoxycholate de sodium, 1,0% de NP-40 et 0,1% de SDS. D&#39;autres tampons de lyse cellulaire peuvent être utilisés. </li><li> Homogénéiser les tissus en utilisant un homogénéisateur de tissu pendant 5 min dans des intervalles de 20 s à 4 ° C. Faire passer les échantillons à 21 000 xg et 4 ° C pendant 20 min et collecter le surnageant contenant de la protéine dans un tu fraisêtre. Ré-tourner le surnageant en utilisant les mêmes conditions et collecter le surnageant final dans un tube frais. </li><li> Electrophorèse 30-50 μg de protéines de chaque échantillon en utilisant un gel gradient SDS-polyacrylamide à 4-20%. Tenez le gel avec Coomassie Blue pour visualiser les bandes de protéines, si désiré. </li><li> Si l&#39;analyse Western Blot des protéines exprimées est nécessaire, transférez les protéines du gel à une membrane de difluorure de polyvinylidène (PVDF) en suivant des protocoles standard. Après le transfert, Ponceau tache la membrane PVDF pour visualiser les bandes de protéines, si désiré. </li><li> Bloquer la membrane et la sonde PVDF pour détecter les protéines d&#39;intérêt suivant les protocoles standard. Utiliser des anticorps primaires spécifiques à la (des) protéine (s) d&#39;intérêt, ainsi que des anticorps secondaires correspondants spécifiques aux anticorps primaires, aux concentrations recommandées par le fabricant pour l&#39;analyse Western Blot. </li><li> Exposer la membrane sondée à l&#39;aide d&#39;un substrat chimioluminescent et image de la membrane à l&#39;aide d&#39;une imagiSystème ng. </li></ol> 5. Isolation de l&#39;ARN et réaction en chaîne quantitative de la polymérase (qPCR) <ol><li> Préparer immédiatement des échantillons de tissus frais (SCC et / ou ANT) dans un tube de 1,5 mL contenant une solution de stabilisation d&#39;ARN et placer des échantillons de tissus post-Mohs dans un tube de 1,5 ml contenant une solution de transition de tissu congelé, conformément aux recommandations du fabricant. Assurez-vous que le tissu est complètement immergé. Conservez ces échantillons à -80 ° C jusqu&#39;à l&#39;utilisation. </li><li> Retirez les échantillons d&#39;ARN de -80 ° C et décongélation sur de la glace. Transférer le tissu à un nouveau tube de 1,5 ml contenant 1 ml de tampon d&#39;extraction d&#39;ARN (phénol / thiocyanate de guanidine) par 50 à 100 mg de tissu. </li><li> Lyse les tissus en utilisant un homogénéisateur de tissu. Effectuer six cycles d&#39;homogénéisation, suivis d&#39;une période de refroidissement de l&#39;échantillon; Chaque cycle se compose de 20 s d&#39;homogénéisation à 4 ° C et d&#39;une période de refroidissement de 40 s. Après homogénéisation, incuber l&#39;échantillon pendant 5 minutes à température ambiante. </li><li> Ajouter 0,2Ml de chloroforme pour 1 ml de tampon d&#39;extraction d&#39;ARN et agiter vigoureusement le tube à la main pendant 15 s. Incuber pendant 2 à 3 minutes à température ambiante. </li><li> Faire passer les échantillons à 12 000 xg et 4 ° C pendant 15 min. Retirer la phase aqueuse de l&#39;échantillon et la placer dans un nouveau tube de 1,5 ml. </li><li> Ajouter 0,5 ml d&#39;isopropanol à 100% pour 1 ml du tampon d&#39;extraction d&#39;ARN utilisé à l&#39;étape 5.2 à la phase aqueuse et incuber pendant 10 minutes à température ambiante. NOTE: Si les rendements d&#39;ARN sont prévus pour être faibles ( c.-à-d., Le volume de tissus de départ est inférieur à 10 mg), les échantillons peuvent être précipités pendant une nuit à -80 ° C. De plus, 5 pg de glycogène sans RNase par 500 μL de tampon d&#39;extraction d&#39;ARN peuvent être ajoutés pendant l&#39;étape de précipitation d&#39;isopropanol pour améliorer les rendements d&#39;ARN. </li><li> Faire tourner l&#39;échantillon à 12 000 xg à 4 ° C pendant 10 min. Retirer le surnageant et laver le culot avec 1 ml d&#39;éthanol à 75%. </li><li> Vortez l&#39;échantillon brièvement, puis tournez-le à 7 500 xg et 4 °C pendant 5 min. Jeter le lavage et sécher à l&#39;air la pastille pendant 5-10 min. </li><li> Remettre en suspension la pastille d&#39;ARN dans 20 μL d&#39;eau sans RNase. <ol><li> Si désiré, purifiez chaque échantillon d&#39;ARN en utilisant un kit de nettoyage d&#39;ARN suivant les recommandations du fabricant. REMARQUE: Les petits ARN seront perdus de l&#39;échantillon si cette étape est effectuée. </li></ol></li><li> Électrophorèse un échantillon de 1 μg en utilisant un gel d&#39;agarose à 1,2% de formaldéhyde-MOPS pour analyser la qualité de l&#39;ARN. NOTE: En variante, analysez les échantillons en utilisant un bioanalyseur pour obtenir un numéro RIN 13 . </li><li> Inverser la transcription de l&#39;ARN à l&#39;ADNc en utilisant un protocole de transcription inverse pour l&#39;analyse qPCR des ARNm cibles (ou des miRNA) d&#39;intérêt. </li></ol> 6. Les cultures sensibles aux tissus <ol><li> Stériliser le tissu excisé avant la culture en immergeant le tissu en 70% d&#39;éthanol. </li><li> Placez le tissu sur une lame ou un plat et ajoutez suffisamment de milieu de culture (mélange 1: 1 de DMEM: Ham &amp; #F-12 F-12 complété par 10% de FBS, 25 mM d&#39;HEPES, 100 UI / mL de pénicilline et 100 μg / ml de streptomycine) pour couvrir le tissu (pour éviter que le tissu ne se séche). Coupez soigneusement le tissu en fragments (&lt;1 mm 3 ) en utilisant une lame de scalpel. </li><li> Transférer les fragments de tissu dans un plat de culture tissulaire de 35 mm et ajouter environ 20 μL de sérum bovin fœtal (FBS) au-dessus de chaque fragment. </li><li> Laisser le plat ouvert dans un capot de culture pendant 20 à 30 minutes, ou jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit presque sec. </li><li> Ajouter 1 ml de milieu de culture (mélange 1: 1 de DMEM: F-12 de jambon supplémenté avec 10% de FBS, 25 mM d&#39;HEPES, 100 UI / mL de pénicilline et 100 μg / ml de streptomycine) à chaque plat et incuber à 37 ° C dans 5% de CO 2 . Sous-culture ou sous-clone les cultures si nécessaire. </li></ol>

<ol><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biorepositories%3A+Building+better+biobanks%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biorepositories: Building better biobanks.</a> Nature. 486, 141-146 (2012).</li>
<li>Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+cancer+center+data+bank+and+biorepository+for+multidisciplinary+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15, 1575-1577 (2006).</li>
<li>Baird, P. M., Gunter, E. W., Vaught, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26974264">Building a biobank.</a> Biopreserv Biobank. 14, 87-88 (2016).</li>
<li>National Cancer Institute. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://biospecimens.cancer.gov/practices">http://biospecimens.cancer.gov/practices</a> (2016).</li>
<li>Caixeiro, N. J., Lai, K., Lee, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+assessment+and+preservation+of+RNA+from+biobank+tissue+specimens%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Quality assessment and preservation of RNA from biobank tissue specimens: a systematic review.</a> J Clin Pathol. 69, 260-265 (2016).</li>
<li>Campbell, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+ISBER+best+practices+for+repositories%3A+Collection%2C+storage%2C+retrieval+and+distribution+of+biological+materials+for+research%5BTitle%5D)+AND+%22Biopreserv+Biobank%22%5BJournal%5D)">Development of the ISBER best practices for repositories: Collection, storage, retrieval and distribution of biological materials for research.</a> Biopreserv Biobank. 10, 232-233 (2012).</li>
<li>Neumeister, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tools+to+assess+tissue+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Tools to assess tissue quality.</a> Clin Biochem. 47, 280-287 (2014).</li>
<li>Vaught, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 2011, 1-7 (2011).</li>
<li>Fu, T., Aasi, S. Z., Hollmig, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+high-risk+squamous+cell+carcinoma+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Treat+Options+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of high-risk squamous cell carcinoma of the skin.</a> Curr Treat Options Oncol. 17, (2016).</li>
<li>Rasmussen, C., Thomas-Virnig, C., Allen-Hoffmann, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+human+epidermal+keratinocyte+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Classical human epidermal keratinocyte cell culture.</a> Methods Mol Biol. 945, 161-175 (2013).</li>
<li>Purdie, K. J., Pourreyron, C., South, A. P. Cancer cell culture: Methods and protocols. , Humana Press. 151-159 (2011).</li>
<li>Berglund, S. R., Schwietert, C. W., Jones, A. A., Stern, R. L., Lehman, J., Goldberg, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+methodology+for+sequential+extraction+of+RNA+and+protein+from+small+human+skin+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Optimized methodology for sequential extraction of RNA and protein from small human skin biopsies.</a> J Invest Dermatol. 127, 349-353 (2007).</li>
<li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RIN%3A+an+RNA+integrity+number+for+assigning+integrity+values+to+RNA+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The RIN: an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements.</a> BMC Mol Biol. 7, 1-14 (2006).</li>
<li>Cooper, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+glycosylation+of+MUC1+in+epidermolysis+bullosa-associated+and+sporadic+cutaneous+squamous+cell+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Expression and glycosylation of MUC1 in epidermolysis bullosa-associated and sporadic cutaneous squamous cell carcinomas.</a> Br J Dermatol. 151, 540-545 (2004).</li>
<li>Riihila, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+factor+H%3A+a+biomarker+for+progression+of+cutaneous+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Complement factor H: a biomarker for progression of cutaneous squamous cell carcinoma.</a> J Invest Dermatol. 134, 498-506 (2014).</li>
<li>Ha Lan, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+p40+isoform+of+p63+has+high+specificity+for+cutaneous+sarcomatoid+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cutan+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression of the p40 isoform of p63 has high specificity for cutaneous sarcomatoid squamous cell carcinoma.</a> J Cutan Pathol. 41, 831-838 (2014).</li>
<li>Alomari, A. K., Glusac, E. J., McNiff, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p40+is+a+more+specific+marker+than+p63+for+cutaneous+poorly+differentiated+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cutan+Pathol%22%5BJournal%5D)">p40 is a more specific marker than p63 for cutaneous poorly differentiated squamous cell carcinoma.</a> J Cutan Pathol. 41, 839-845 (2014).</li>
<li>Qiao, B., Johnson, N. W., Gao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+transition+in+oral+squamous+cell+carcinoma+triggered+by+transforming+growth+factor-beta1+is+Snail+family-dependent+and+correlates+with+matrix+metalloproteinase-2+and+-9+expressions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal transition in oral squamous cell carcinoma triggered by transforming growth factor-beta1 is Snail family-dependent and correlates with matrix metalloproteinase-2 and -9 expressions.</a> Int J Oncol. 37, 663-668 (2010).</li>
<li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+in+biospecimen+research%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Developments in biospecimen research.</a> Br Med Bull. 114, 29-38 (2015).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à dévoiler.

Pour la connaissance de l&#39;auteur, ce protocole est le premier de son genre qui se concentre sur l&#39;achat clinique d&#39;échantillons de tissus cutanés dans une approche rentable et rapide. Les patients subissant une microchirurgie Mohs sont généralement programmés pendant des blocs de temps spécifiques, et la collecte est limitée à ces périodes. La collecte d&#39;échantillons implique l&#39;effort de l&#39;assistant médical impliqué dans les soins aux patients, l&#39;histotechnologue de Mohs qui traite les échant...

La recherche sur le cancer et les biomarqueurs repose sur une offre d&#39;échantillons de tissus humains de qualité, et une offre limitée a entravé la recherche 1 , 2 . De nombreuses études dermatologiques sont limitées par l&#39;offre insuffisante, la qualité variable et les coûts associés à l&#39;utilisation du tissu humain. Le coût de l&#39;établissement d&#39;une importante biobanche dédiée a été estimé à environ deux millions de dollars 3 , et ces coûts mettent l&#39;utilisation des tissus humains hors de la portée de nombreux chercheurs. En outre, le processus de génération et de stockage d&#39;échantillons de recherche pose le risque d&#39;affecter les opérations cliniques et de retarder les soins aux patients, si cela n&#39;est pas soigneusement exécuté. Un biorepository basé sur une clinique rentable a été établi qui se concentre sur les échantillons de cancer de la peau selon les meilleures pratiques recommandées et la validation des échantillons 4 , 5 , 6 . <pClass = &quot;jove_content&quot;&gt; Ce protocole a été développé dans une clinique de dermatologie qui effectue un grand volume de chirurgies micrographiques de Mohs pour éliminer le carcinome épidermoïde (SCC), le cancer de base (BCC) et les cancers de la peau du mélanome. Les bailleurs de fonds volontaires peuvent être recrutés auprès de cette population de patients. Il est important d&#39;établir le biorepository sur le site de collecte pour capturer rapidement les tissus et le sang des patients consentis sans délai de traitement. La collecte d&#39;échantillons de la même clinique minimise les variations dans les techniques de collecte et minimise les variations de la qualité des échantillons, ce qui peut poser problème aux applications en aval 7 , 8 . L&#39;objectif de la technique de la chirurgie micrographique de Mohs est de s&#39;assurer que tout le tissu cancéreux est éliminé tout en préservant autant de tissus sains que possible. La procédure implique l&#39;élimination progressive de couches minces de tissu tumoral. Chaque couche successive est son(Après avoir critisé le tissu tumoral et réalisé une coloration H &amp; E) par un dermatologue pour déterminer si tous les tissus cancéreux ont été enlevés. L&#39;excision et l&#39;examen des couches subséquentes de tissus sont exécutés alors que le patient reste dans le bureau. Cette technique est considérée comme la meilleure option de traitement pour SCC 9 . À ce stade, la plaie est fermée et, pour améliorer la guérison et l&#39;apparence esthétique, le tissu normal adjacent (ANT) est souvent excisé. Ainsi, cette procédure chirurgicale pour éliminer une tumeur est idéale pour la collecte de tissu histologiquement caractérisé pour des études futures. La procédure de passation des marchés pour l&#39;obtention de tissus tumoraux, des tissus normaux adjacents, de la salive et du sang a été conçue pour avoir un impact minimal sur les tâches normales du personnel ( figure 1 ). Les assistants médicaux effectuent les tirages sanguins tout en préparant le patient pour la procédure. Après l&#39;achèvement de la procédure Mohs, le M<html> Oh histotechnologist prépare des diapositives histologiques supplémentaires du spécimen et transfère le tissu au biorepository. Les coûts associés à l&#39;établissement du biorepository comprennent l&#39;achat de congélateurs à cryoconservation, la création d&#39;un espace de laboratoire clinique modeste et le développement d&#39;un programme de suivi des stocks. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig1.jpg" /> Figure 1: Séquence de la collecte des échantillons et du personnel responsable. Lors de l&#39;enregistrement des patients et de l&#39;obtention du consentement du patient, l&#39;assistant médical collecte un prélèvement buccal et effectue un prélèvement sanguin. Le dermatologue et l&#39;assistant médical excises la tumeur et ferment la plaie, au cours duquel les échantillons SCC et ANT sont collectés, respectivement. Un technicien de laboratoire spécialisé traite le sang et les sections des spécimens SCC et ANT pour la culture tissulaire, la préservation et l&#39;entrée dans le biorepository.Ftp_upload / 55583 / 55583fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. La diversité des échantillons collectés permet une variété d&#39;approches expérimentales ( figure 2 ). Les échantillons recueillis auprès du patient sont des écouvillons buccaux (la salive peut également être recueillie si nécessaire), du sang entier et du tissu excisé. Les écouvillons buccaux et un échantillon de sang entier sont sauvegardés, sans traitement, pour le génotypage et l&#39;appariement des tissus. Le sang entier est séparé en globules blancs (WBC) et les fractions de plasma pour des analyses futures. Après le traitement de Mohs, la tumeur congelée est placée directement dans de l&#39;azote liquide et transférée à un congélateur de -80 ° C. Les tissus tumoraux frais et viables et les échantillons ANT sont cultivés en utilisant des modifications des techniques précédentes 10 , 11 puis cryoconservées. Pendant la collecte, le nombre de chaque type d&#39;échantillon est enregistré sur une feuille de calcul avant l&#39;entrée dans<html> Le programme de suivi des stocks pour faciliter un traitement précis ( tableau 1 ). <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig2.jpg" /> Figure 2: Résumé de la collecte et du traitement des échantillons biologiques à base de clinique. Un prélèvement buccal et un échantillon de sang sont recueillis auprès du patient et stockés pour le génotypage en aval et l&#39;appariement des tissus. Le sang entier est ensuite traité pour l&#39;isolement des globules blancs (WBC) et l&#39;analyse CTC, ainsi que pour la collecte plasma et l&#39;analyse de la biopsie liquide. Le tissu excisé pendant la procédure Mohs est traité histologiquement à des fins diagnostiques, après quoi les diapositives histologiques peuvent être utilisées expérimentalement pour d&#39;autres analyses immunohistochimiques. Pourvu que l&#39;échantillon de tissu excisé soit suffisamment grand, une partie de tissu frais est enlevée et sectionnée pour l&#39;isolement de protéines et d&#39;ARN et pour l&#39;établissement de lignées cellulaires cultivées.55583 / 55583fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Date de collecte: </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> Patient 1 </td><td> Patient 2 </td><td> Patient 3 </td><td> Patient 4 </td><td> Patient 5 </td></tr><tr><td> Initiales et date de naissance </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Couleur des yeux </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Échantillon type </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Emplacement de l&#39;échantillon </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Salive </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> WTrou sang </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Plasma </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tumoral viable </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tissu Normal Viable </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tumeur Mohs Nitrogen Liquide </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tissue Normal Nitrogen Liquide </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diapositives </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau 1: Liste de contrôle pour enregistrer les collections d&#39;échantillons. Les données suivies et enregistrées avec chaque échantillon recueilli comprennent les initiales du patient, la date de naissance et la couleur des yeux (pour la typage de la peau), ainsi que la localisationSur l&#39;enlèvement de l&#39;échantillon. Le nombre d&#39;échantillons de salive, les volumes de collecte de sang et le nombre de spécimens de tissus viables et conservés collectés sont également consignés comme références pour les allocations aux utilisations ultérieures. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55583/Table1.xlsx">Cliquez ici pour télécharger ce fichier.</a> Pour valider les procédures de collecte des échantillons, chaque type d&#39;échantillon a été testé dans les applications en aval. En utilisant des modifications des techniques précédentes 12 , la tumeur et l&#39;ANT ont été utilisés avec succès dans l&#39;isolement des protéines et de l&#39;ARN et peuvent éventuellement être utilisés pour l&#39;isolement de l&#39;ADN. Les explants viables établis à partir des sections de tissu ont été évalués par microscopie, tandis que des diapositives histologiques stockées ont été utilisées pour l&#39;immunohistochimie et l&#39;immunofluorescence. En suivant le protocole décrit ici, il est possible d&#39;étendre ce modèle à d&#39;autres cliniques de dermatologie, à d&#39;autres types de tumeurs (comme le mélanome), Et d&#39;autres spécialités et pratiques chirurgicales pour fournir des échantillons de tissus humains pour la recherche à multiples facettes sur les cancers humains. De légères modifications de ce protocole sont susceptibles d&#39;être nécessaires pour d&#39;autres pratiques, mais, en principe, ce protocole s&#39;applique à toute pratique chirurgicale qui répète systématiquement les échantillons de patients recueillis au cours du traitement du patient.

<table><tbody><tr><td>BD Vacutainer Tubes de prélèvement sanguin en plastique avec K3EDTA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>02-685-2B</td><td></td></tr><tr><td>Microscopie électronique Sciences Lames à double tranchant</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-949-411</td><td></td></tr><tr><td>Pince à usage général incurvée à pointe moyenne</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>16-100-110</td><td></td></tr><tr><td>Tubes</td> <td>de microcentrifugation de qualité supérieureThermoFisher Scientific</td><td>05-408-138</td><td></td></tr><tr><td>Lonza Walkersville KGM Kératinocytes Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NC9791321</td><td></td></tr><tr><td>Microscopie électronique Sciences Tissu TEK OCT Compound</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-363-579</td><td></td></tr><tr><td>Leica CM1950 Cryostat</td><td>Leica Biosystems</td><td>14047743909</td><td></td></tr><tr><td>Lames de microscope givrées</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12-550-343</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Rapid-Chrome H& E Kit de coloration de section congelée</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>99-900-01</td><td></td></tr><tr><td>Tubes cryogéniques de stockage à long terme Nalgene</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>03-337-7X</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 15 mL Tubes à centrifuger coniques</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>Boca Scientific BuccalT-Swabsp ;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NC9679349</td><td></td></tr><tr><td>Cell Signaling Technology 10x RIPA Buffer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-195-822</td><td></td></tr><tr><td>Arrêt Cocktail d’inhibiteurs de protéase et de phosphatase</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PI78443</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5424R Microcentrifugeuse</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>05-401-203</td><td></td></tr><tr><td>Mormortier à granulés Homogénéisateur</td> <td>sans filThermoFisher Scientific</td><td>12-141-3</td><td></td></tr><tr><td>Pilon à granulés sans RNAse</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>121-141-364</td><td></td></tr><tr><td>Forma SteriCycle CO2</td><td>Incubateur ThermoFisher Scientific</td><td>13-998-089</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Sérum de veau fœtal</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>SH30071.02</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Advanced DMEM/F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12-634-028</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Pénicilline-Streptomycine</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140148</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 1 M</td><td>Hepes ThermoFisher Scientific</td><td>15-630-130</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Culture cellulaire 35 mm avec évent</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1256591 Clone d’anticorps</td><td></td></tr><tr><td>monoclonal anti-CFH OX-24</td><td>Abnova</td><td>MAB12583</td><td></td></tr><tr><td>Anti-p40 (p63 delta) anticorps</td><td>Abnova</td><td>ABX-144A</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti MUC-1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-7313</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Escargot + Limace (phospho S246)</td><td>Abcam</td><td>Ab63568</td><td></td></tr><tr><td>Chèvre anti-lapin IgG, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-11034</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Sondes moléculaires Phallodin</td><td>&nbsp ;</td><td>A12380</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Montage anti-effacement avec</td><td>sondes moléculaires DAPI&nbsp ;</td><td>P36941</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Zeiss Axio Imager Z1 avec caméra Axiocam Contraste</td> de phase <td>Zeiss</td><td>4300009901</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX51 avec caméra DP72</td><td>Olympus</td><td>IX511F3</td><td></td></tr></tbody></table>

création d&#39;un biorepository basé sur une clinique

Establishment of a Clinic-based Biorepository

L&#39;incidence du cancer de la peau ( p. Ex., Carcinome épidermoïde, carcinome basocellulaire et mélanome) a augmenté au cours des dernières années. On s&#39;attend à ce qu&#39;il y ait une demande parallèle pour les échantillons de tumeurs cutanées pour des études de recherche biomédicales. La disponibilité des tissus, cependant, est limitée en raison du coût de l&#39;établissement d&#39;un biorepository et du manque de protocoles disponibles pour l&#39;obtention d&#39;échantillons cliniques qui n&#39;interfèrent pas avec les opérations cliniques. Un protocole a été établi pour collecter et traiter la tumeur cutanée et les échantillons de sang et de salive associés qui ont un impact minimal sur les procédures cliniques de routine à la date de la chirurgie de Mohs. Les échantillons de tumeurs sont recueillis et traités à partir de patients subissant leur première couche de chirurgie de Mohs pour des tumeurs malignes cutanées éprouvées par biopsie par l&#39;histotechnologiste de Mohs. Le tissu normal adjacent est recueilli au moment de la fermeture chirurgicale. Des échantillons supplémentaires qui peuvent être collectés sont des écouvillons sanguins et buccales. En utilisant des échantillons de tissus qui sont normalement rejetés, un biorepository a été généré qui offre plusieurs avantages clés en étant basé dans la clinique par rapport au paramètre de laboratoire. Ceux-ci incluent une large gamme d&#39;échantillons collectés; Accès aux dossiers de patients identifiés, y compris les rapports de pathologie; Et, pour le donneur typique, accéder à des échantillons supplémentaires lors des visites de suivi.

La tumeur et l&#39;ANT ont été utilisés avec succès dans l&#39;isolement des protéines et testés par Western Blot. Comme le montre la figure 3 , les marqueurs de carcinomes épidermiques cutanés (Muc1 14 , FHL-1 15 et p40 16 , 17 ) peuvent être détectés dans des échantillons de patients collectés et stockés dans notre biorepository basé sur la clinique. <p class=...

Les tumeurs cutanées sont souvent éliminées suite à la chirurgie micrographique de Mohs. Un protocole est décrit ici qui permet au personnel de soutien clinique de traiter et de stocker efficacement les échantillons de tumeur cutanée ( p. Ex., Carcinome épidermoïde, carcinome basique et mélanome) pour des applications en laboratoire en aval sans interférer avec les opérations cliniques.

Création d&#39;un biorepository basé sur une clinique

The incidence of skin cancer (e.g., squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, and melanoma) has been increasing over the past several years. It is ...

L'objectif général de ce protocole est de permettre au personnel de soutien clinique dans une pratique de dermatologie de traiter et de stocker efficacement des échantillons de tumeurs cutanées pour des applications de laboratoire ultérieures, sans perturber les opérations cliniques habituelles. Ce protocole a été conçu pour permettre aux assistants médicaux et aux histotechniciens de Mohs de collecter et de conserver des échantillons de tumeurs cutanées à des fins de recherche biomédicale future, dans le cadre de leurs activités cliniques quotidiennes. Le principal avantage de ce protocole est que les tissus excisés, normalement jetés et détruits, sont plutôt collectés et préservés à des fins de recherche, au moyen de procédures ayant un impact minimal sur les opérations cliniques courantes.La variété des échantillons recueillis permet d'établir des corrélations entre les biomarqueurs protéiques et ARN présents dans les échantillons tissulaires et plasmatiques et les données d'issue chez les patients. En principe, ce protocole, une fois légèrement modifié, peut s'appliquer à toute pratique chirurgicale qui jette systématiquement des échantillons de patients prélevés au cours du traitement. La procédure sera démontrée par Stefani Fawks, histotechnicienne en chirurgie de Mohs, et le Dr Mitchell Manway, chercheur associé dans notre établissement.Pour commencer, utilisez le tissu reçu du chirurgien de Mohs et, à l’aide d’un scalpel, prélève un échantillon de 10 à 50 milligrammes au centre de la face apicale du tissu. À l’aide de pinces, transférez le tissu viable dans un tube étiqueté de 1,5 millilitre, prérempli de milieu de culture. Veillez à ce que le tissu soit entièrement immergé dans le milieu.Placer l'échantillon dans un réfrigérateur et le conserver à quatre degrés Celsius, pendant une durée maximale de 24 heures avant un traitement ultérieur. Prélever au moins un fragment de tissu de 10 millimètres cubes du côté apical du tissu excisé, lorsque l'échantillon tumoral est suffisamment volumineux et que ce prélèvement ne gênera pas le traitement de routine par la technique de Mohs. Ensuite, placer l'échantillon tumoral restant non traité sur un porte-échantillon de cryostat.Incorporez le tissu dans un composé de température de coupe optimale et congélez-le dans le porte-échantillon afin de préparer des lames histologiques. À l’aide d’un cryostat, découpez le tissu en sections de sept micromètres d’épaisseur et déposez jusqu’à trois sections sur une lame. Après la coupe, fixez le tissu en immergeant les lames dans de l’acétone pendant une à deux secondes.Ensuite, laissez sécher les lames à l'air libre. En conservant l'échantillon restant dans une chambre de cryostat, détachez le tissu du milieu d'inclusion cryogénique et transférez-le dans un tube cryogénique étiqueté. Transférez immédiatement le tube étiqueté dans de l'azote liquide.Le transfert du tissu dans un flacon cryogénique après le traitement par chirurgie de Mohs doit être effectué dans la chambre du cryostat à moins 20 degrés Celsius. Si cette étape est correctement réalisée et que le tissu reste congelé, elle permettra d'extraire avec succès l'ARN à partir d'échantillons de tissu post-Mohs. Ensuite, prélevez un tissu normal adjacent auprès du chirurgien pratiquant la chirurgie de Mohs.Prélèvez un échantillon à partir de la face apicale du tissu normal adjacent. Ensuite, à l’aide de pinces, transférez l’échantillon prélevé dans un tube de 1,5 millilitre étiqueté contenant du milieu de culture. Immergez le tissu dans le même milieu de culture.Placez-le dans un sachet échantillon approprié et conservez-le à quatre degrés Celsius jusqu'au traitement ultérieur. Prélève environ 10 millilitres de sang veineux dans des tubes de collecte revêtus d'EDTA. Mélangez les échantillons sanguins dans un tube de centrifugation stérile de 15 millilitres.Ensuite, transférez environ un millilitre de l'échantillon de sang dans un tube cryogénique de 1,5 millilitre, en évitant les bulles. Conservez cet échantillon de sang total à moins 80 degrés Celsius jusqu'aux analyses ultérieures de génotypage et de correspondance tissulaire. Puis, centrifugez l'échantillon de sang restant à 1000 ×g pendant 30 minutes afin d'obtenir le plasma sanguin.Après centrifugation, recueillir et diviser le plasma en aliquotes d'un millilitre dans des tubes cryogéniques de 1,5 millilitre. Conserver les échantillons à moins 80 degrés Celsius en vue de futures analyses de biopsie liquide. Saisir les données issues de la liste de contrôle des échantillons de patients, ainsi que les informations et le diagnostic du patient extraits du dossier médical, dans la base de données de la biobanque.Enfin, enregistrez la localisation des échantillons désidentifiés dans la base de données de la biobanque et transférez les échantillons vers le laboratoire de recherche. Immédiatement après, transférez les échantillons de tissu dans des tubes de 1,5 millilitre préremplis avec des solutions d'extraction appropriées, en veillant à ce que le tissu soit complètement immergé. Conservez les échantillons à moins 80 degrés Celsius jusqu'à un traitement ultérieur.Les images de blots de type Western représentatifs de marqueurs connus du carcinome épidermoïde, la mucine un, FHL-un et p40, obtenues à partir de tissu normal adjacent et d'un échantillon tumoral, sont présentées ici. La qualité de l'ARN isolé à partir des échantillons de Mohs a d'abord été évaluée par électrophorèse sur gel, suivie d'une analyse de l'intégrité de l'ARN. Les valeurs du nombre d'intégrité de l'ARN obtenues pour les échantillons normaux et tumoraux indiquent que l'ARN obtenu était de haute qualité et intact.Les profils de cytométrie des bandes ont été tracés en unités de fluorescence en fonction du nombre de nucléotides pour des échantillons d'ARN représentatifs provenant de tissus tumoraux et normaux de patients. Un explant de tissu de carcinome épidermoïde a été observé en microscopie de contraste de phase et s'est révélé être une culture mixte de kératinocytes et de fibroblastes, pouvant être repiquée ou utilisée pour le développement futur d'une lignée cellulaire. Enfin, dans les coupes de tissu de carcinome épidermoïde, une coloration positive pour le marqueur de transition épithélio-mésenchymateuse a été observée.Une fois maîtrisé, ce protocole permettra de réduire le flux de travail standard du personnel clinique à moins de 30 minutes, à condition qu'il soit correctement appliqué. La majorité des étapes sont réalisées par le personnel clinique existant une fois les soins prodigués au patient terminés. Lors de la mise en œuvre de ce protocole, il est essentiel de tenir des registres précis, en reliant les échantillons à l'historique médical et au diagnostic du patient.Cette information étant souvent nécessaire pour des applications ultérieures, cette technique aidera à ouvrir la voie aux chercheurs dans le domaine de la dermatologie pour le développement de biopsies liquides et de biomarqueurs dans les carcinomes spinocellulaires et le mélanome. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la mise en œuvre d'une biobanque clinique pour des échantillons de cancers cutanés, générés dans le cadre de la pratique quotidienne.

establishment-of-a-clinic-based-biorepository

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Nous décrivons une méthode pour établir des entéroïdes humains à partir de cryptes intestinales grêles et des colonoïdes à partir de cryptes du côlon prélevés à partir de tissus chirurgicaux et de biopsies. Dans cet article méthodologique, nous présentons les modalités de culture qui sont essentielles à la croissance et au maintien réussis des entéroïdes et des colonoïdes humains.

Mise en place d&#39;épithéliales humaines Enteroids et Colonoids de tout le tissu et la biopsie

Cette méthode implique l'utilisation de données diagnostiques cliniques pour les patients atteints de cancer de la prostate afin de guider les procédures d'échantillonnage, lorsque le tissu biobancaire suivant la prostatectomie radicale. Cela permet de surmonter les problèmes avec des méthodes publiées précédemment autour de l'efficacité et la disponibilité de tissus frais pour un plus large éventail d'applications en aval.

Utilisation des données d'imagerie par résonance magnétique et de biopsie pour orienter les procédures d'échantillonnage pour la biobanque du cancer de la prostate

Dans les travaux suivants, nous décrivons les étapes consécutives nécessaires à l'établissement d'une grande biobanque de cancer colorectal et pancréatique.

Création et entretien d&apos;une biobanque vivante - Comment nous le faisons

Les biobanques sont des ressources cruciales pour la recherche biomédicale et l’unité Biobanque de médecine translationnelle et numérique de l’Institut européen d’oncologie est un modèle dans ce domaine. Nous fournissons ici une description détaillée des procédures opérationnelles normalisées des biobanques pour la gestion de différents types d’échantillons biologiques humains.

Biobanque de médecine translationnelle : Modes opératoires normalisés pour une gestion optimale des échantillons

Ce protocole décrit une méthode pour faciliter le prélèvement d’échantillons de prostatectomie radicale. L’objectif est de cartographier, caractériser et micro-macro disséquer des échantillons de tissus à partir des échantillons sur la base de critères anatomopathologiques avant de les stocker dans une biobanque.

Amélioration de la fiabilité des biobanques de tumeurs de la prostate grâce à une technique d’échantillonnage et une caractérisation histologique améliorées

Ce protocole présente une plate-forme de bioréférentiel intégrée pour la collecte, l’annotation et la biobanque normalisées de biopsies de l’humeur aqueuse humaine et du liquide vitreux de haute qualité pour les analyses moléculaires en aval, y compris la protéomique, la métabolomique et la glycomique.

Biobanque de biopsies liquides aqueuses et vitrées humaines pour analyses moléculaires

Ce protocole offre un cadre systématique pour l’établissement d’organoïdes du cancer de l’ovaire à différents stades de la maladie et relève les défis de la variabilité spécifique à la patiente pour augmenter le rendement et permettre une expansion robuste à long terme pour des applications ultérieures. Il comprend des étapes détaillées pour le traitement des tissus, l’ensemencement, l’ajustement des exigences en matière de milieux et la coloration par immunofluorescence.

Stratégie de mise en banque d’organoïdes du cancer de l’ovaire : Aborder l’hétérogénéité interpatiente entre les sous-types histologiques et les stades de la maladie

Cet article présente un protocole détaillé pour la collecte d’échantillons de cancer du sein, conçu pour optimiser leur utilité pour les biobanques, la médecine personnalisée et d’autres applications de recherche. Le flux de travail pour le prélèvement d’échantillons, y compris les procédures de biopsie mammaire et de mastectomie, est décrit en détail, en mettant l’accent sur la minimisation des lésions tissulaires et l’optimisation de la qualité des échantillons.

Optimisation des procédures de prélèvement d’échantillons de biopsie mammaire et de mastectomie pour les applications de biobanque, de médecine personnalisée et de recherche

La technique établie pour inoculer des xénogreffes invasifs primaires de cancer de la vessie orthotopique nécessite une laparotomie et de mobilisation de la vessie. Cette procédure inflige une morbidité importante sur les souris, est techniquement difficile et de longue haleine. Nous avons donc développé une haute précision, approche percutanée utilisant un guidage échographique.

Minimalement invasive Création d&#39;murin orthotopique de la vessie xénogreffes

La capacité à modéliser les infections des voies urinaires (IVU) est cruciale pour pouvoir comprendre la pathogenèse bactérienne et favoriser le développement de nouvelles thérapies. L’objectif de ce travail est de démontrer des modèles murins d’infections urinaires expérimentales et d’infections urinaires associées à un cathéter qui récapitulent et prédisent les résultats observés chez l’homme.

Création et caractérisation de l&#39;UTI et Cauti dans un modèle de souris

Apprenez à créer un biorepository clinique pour les tumeurs cutanées en dermatologie. Cette méthode permet de collecter des échantillons excisés habituellement éliminés, facilitant la recherche biomédicale future sans perturber les opérations cliniques.

Création d'un biorepository basé sur une clinique

Explorer plus de vidéos