Évaluation de la procédure pour effectuer une cystéromie éveillée dans un modèle de souris

L’objectif global de cette procédure microchirurgicale est d’implanter un tube intravésical dans la vessie et d’enregistrer la fonction des voies urinaires inférieures chez une souris éveillée. Cette méthode peut aider à l’acquisition de données expérimentales reproductibles à partir de la cystométrie éveillée et à l’essai de la fonction de la vessie dans des modèles de souris saines et malades. L’objectif principal de cette technique est de fournir une méthode standardisée basée sur des données expérimentales pour effectuer une cystométrie de remplissage dans un modèle murin.

Pour préparer le tube à l’implantation, coupez d’abord un morceau de tube pe10 de sept centimètres et avancez lentement une extrémité vers une flamme nue pour créer une éruption, en retirant rapidement le tube dès que l’éruption se développe. Utilisez ensuite le réglage à basse température d’un pistolet à colle pour appliquer trois gouttes de colle chaude tout usage à 4,5, 5 et 5,5 centimètres de l’extrémité évasée du tube. Utilisez des ciseaux pour couper les irrégularités des bulles de colle.

Appliquez de la colle chaude à l’extrémité d’une aiguille de calibre 30, qui sera utilisée pour boucher le tube pe10 après son implantation. Ensuite, confirmez l’absence de réponse au pincement des orteils et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal. Après avoir stérilisé le haut du dos et le bas de l’abdomen avec de l’alcool et de la bétadine, faites une incision de 1,5 centimètre entre le scalpula et placez l’animal en position couchée sur un coussin chauffant à 37 degrés Celsius recouvert de champs stériles sous un microscope de dissection.

Faites maintenant une incision cutanée abdominale médiane inférieure de 1,5 centimètre. Suivi d’une incision correspondante à travers le fascia le long de la ligne blanche et du muscle pour exposer le dôme et la moitié supérieure de la vessie. En gardant les viscères abdominaux humides avec une solution saline physiologique chaude, faites pivoter l’animal sur le côté pour accéder à l’incision sur la nuque.

Poussez un hémostat étroit par voie sous-cutanée à travers l’incision pour commencer un canal sous-cutané sur le dos et continuer le long du côté de l’animal. Une fois que la pointe de l’instrument atteint le bas de la cage thoracique, tournez la pointe vers la ligne médiane à l’intérieur de l’abdomen et continuez à faire avancer l’hémostat jusqu’à ce que la pointe soit exposée au niveau de l’incision abdominale sous la couche musculaire. Une fois que l’extrémité de l’hémostat est à l’intérieur de l’incision, pincez la peau au-dessus de l’épaule et appliquez une traction pour aider à stabiliser l’animal jusqu’à ce que la pointe de l’instrument soit visible au niveau de l’incision abdominale.

Utilisez maintenant l’hémostat pour saisir l’extrémité non évasée du tube et rétractez lentement l’hémostat, en tirant l’extrémité du tube hors de l’incision à l’arrière du cou et en ajustant l’extrémité évasée du tube de sorte qu’elle se trouve directement au-dessus du dôme de la vessie. Stabilisez la vessie avec un petit rouleau de tissu non pelucheux. Placez une suture monofilament 6-O lâche et non résorbable sur le dessus du dôme de la vessie.

À l’aide de la main non dominante et de la micro-pince incurvée de Dumont numéro sept, saisissez le dôme de la vessie et utilisez une aiguille de calibre 21 dans la main dominante pour faire une cystotomie au sommet du dôme. Sondez doucement la cystotomie à l’aide d’une paire fermée de micro-pinces incurvées numéro cinq pour vous assurer que le cathéter peut facilement passer à travers le trou et placez l’extrémité évasée du cathéter pe10 dans la vessie, en poussant l’évasement vers le col de la vessie afin qu’il ne glisse pas pendant qu’il est fixé. Avec l’attache monofilament placée à l’avant de la tubulure, serrez la suture 6-O autour du dôme de la vessie et de la tubulure aussi haut que possible sur la vessie pour éviter de réduire artificiellement la capacité de la vessie.

Alternativement, placez une suture lâche sur le dôme de la vessie, faites une cystotomie comme nous venons de le démontrer, et insérez l’extrémité évasée du cathéter dans la ponction. Attachez ensuite la suture autour du dôme et du tube comme indiqué pour la suture plate. Dans les deux cas, prenez soin de fixer le tube sans causer de blessures graves à la paroi de la vessie.

Si trop de tissu est prélevé, la capacité de la vessie sera réduite. Si trop peu est pris, la connexion fuira. Pour tester l’étanchéité et la position du tube dans la vessie, fixez une seringue à insuline de 0,5 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 30 à l’extrémité distale du tube et remplissez lentement la vessie avec 0,1 à 0,2 millilitre de chlorure de sodium à 0,9 % jusqu’à ce qu’une goutte apparaisse à l’orifice urétral.

Si le joint n’est pas complet, faites une boucle de suture autour de la vessie et renouez-la. Videz ensuite la vessie par aspiration. S’il n’y a pas de fuites au niveau du dôme, calez la vessie à l’aide d’une paire de micro-pinces incurvées et tirez doucement sur le tube jusqu’à ce que l’évasement repose contre l’intérieur du dôme de la vessie.

Testez à nouveau le joint en utilisant la méthode décrite précédemment. Coupez la queue de la suture, retirez le rouleau de tissu et remettez la vessie dans sa position normale. Ensuite, utilisez une suture 6-O pour fermer la paroi abdominale en deux couches.

Et faites doucement pivoter l’animal sur son abdomen. Insérez la partie sous-cutanée de l’ancrage métallique dans l’incision intrascopulaire et utilisez un monofilament 6-O pour fixer le tube et l’ancrer avec une suture verticale du matelas. Vérifiez qu’une bulle de colle reste au-dessus et en dessous de la peau pour empêcher le tube de se retirer et coupez le tube à environ deux centimètres au-dessus de la peau.

Ensuite, insérez doucement un bouchon de calibre 30 à l’extrémité du tube pour empêcher l’urine de s’échapper. Avant d’effectuer la lecture, utilisez le tube pe50 pour connecter la pompe à perfusion, le transducteur de pression et l’émerillon de calibre 22. Placez ensuite l’animal de laboratoire anesthésié en position couchée et retirez le bouchon de calibre 30.

Connectez la sangle à l’ancrage, glissez le cathéter à vessie à l’extrémité du pe50 et utilisez de la colle chaude pour former un joint étanche. Placez la souris sur le sol grillagé. Et commencez l’enregistrement.

Ensuite, lorsque l’animal se remet de l’anesthésie et que la pression de la vessie se stabilise, commencez à injecter du chlorure de sodium à 0,9 % à raison de 0,6 millilitre par heure. En règle générale, le deuxième jour après l’insertion du cathéter, un gonflement sous-muqueux sévère qui occupe la moitié de la section transversale de la vessie se développe, entraînant une obstruction de la lumière. Le cinquième jour, l’œdème se résout complètement, laissant les zones sous-muqueuses infiltrées de cellules inflammatoires qui ont partiellement envahi la musculaire.

La plus grande étendue de gonflement des tissus observée les deuxième et troisième jours est en corrélation avec la miction comportementale correspondante, les animaux démontrant une fonction vésicale significativement altérée à ces moments. Comme prévu d’après les données histologiques, la fréquence mictionnelle se normalise au cinquième jour postopératoire. La pression intravésicale chez un animal éveillé et en mouvement libre avec des artefacts de mouvement minimaux est caractérisée par une pression de base de 10 à 15 centimètres d’eau qui peut rester inchangée ou augmenter progressivement de pas plus de 10 centimètres d’eau pendant le cycle de remplissage.

Suivi d’une augmentation et d’une baisse soudaines de la pression de type impulsion pendant la miction. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 30 minutes si elle est correctement exécutée. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de minimiser les dommages à la vessie pour préserver la physiologie des tissus.

Après cette procédure, d’autres méthodes, comme la cystométrie de remplissage en cycle unique, peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur la capacité fonctionnelle de la vessie. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’implanter microchirurgicalement un tube dans la vessie et d’utiliser le cystométrie de remplissage éveillé pour évaluer la fonction des voies urinaires inférieures chez la souris.