Une méthode pour tester l'efficacité du lavage des mains pour l'élimination des pathogènes infectieux émergents

L’objectif global de cette expérience est de tester l’efficacité comparative des options de lavage des mains sur des mains qui ont été inoculées expérimentalement avec un organisme d’intérêt. Cette méthode peut fournir des informations sur des questions clés pour aider à prévenir les maladies infectieuses. En permettant aux chercheurs d’étudier l’efficacité du lavage des mains pour des organismes d’intérêt particuliers.

Le principal avantage de cette technique est qu’elle est flexible et qu’elle peut être adaptée pour permettre l’étude de nombreux organismes différents. Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous avons réalisé que des solutions chlorées étaient utilisées pour le lavage des mains dans des contextes d’Ebola et qu’il n’y avait aucune preuve de son efficacité à l’époque. Après avoir recruté les sujets éligibles et préparé des solutions de lavage des mains conformément au protocole textuel, préparez les bactéries en striant un brin non pathogène d’E.Coli sur des plaques de gélose LB et incubez les cultures à 37 degrés Celsius pendant 24 heures pour obtenir des colonies uniques.

Un jour avant le début de l’expérience, utilisez un lubrifiant stérile pour prélever une seule colonie dans l’assiette et inoculez 10 millilitres de bouillon LB. Incuber les cultures à 37 degrés Celsius, en secouant, pendant la nuit. Le matin de l’expérience, ajoutez un millilitre de la culture de nuit à 20 millilitres de bouillon LB frais.

Incuber les cultures pendant environ deux heures et demie pour obtenir une densité de sel supérieure à 10 à la huitième UFC par millilitre. Ensuite, utilisez un spectrophotomètre pour estimer la concentration de la culture. Immédiatement avant l’essai, préparer un inoculum composé de 68 % de bactéries ou de suspension virale et de 32 % de chlorure de sodium ou de charge de sol.

Tourbillonnez ou tourbillonnez doucement pour mélanger. Après avoir préparé les volontaires selon le protocole textuel, testez le pH de la peau de chaque volontaire en plaçant une sonde de pH de peau à pointe plate dans l’espace palmé entre le pointeur et le majeur. Assurez-vous que l’électrode est à plat contre la peau et enregistrez la lecture du pH.

Ensuite, faites en sorte que le bénévole tasse les deux mains ensemble. Ensuite, pipetez soigneusement 750 microlitres de l’inoculat dans chaque paume pour piquer les mains. Lors de l’épilation des mains des volontaires, il est important qu’aucune partie de l’inoculum ne soit renversée.

Rappelez aux volontaires que c’est important et donnez-leur l’occasion de s’entraîner avec de l’eau avant de commencer la procédure. Demandez aux volontaires de se frotter doucement les mains jusqu’à ce que toutes les surfaces de la main soient codées avec l’inoculat, tout en soumettant les mains à aussi peu de friction que possible. Demandez aux volontaires de garder leurs mains immobiles et éloignées de leur corps pendant 30 secondes supplémentaires pour permettre à l’inoculat de sécher.

Lavez-vous ensuite les mains en utilisant l’une des méthodes décrites dans le protocole textuel. Pour le lavage des mains avec du savon, utilisez 10 millilitres d’eau ultrapure pour mouiller les mains. Demandez aux bénévoles de se savonner les mains, puis de se frotter les mains pendant 20 secondes supplémentaires.

Rincez les mains du volontaire en versant 500 millilitres d’eau ultrapure à température ambiante à travers un entonnoir à un débit de 1,5 litre par minute dans un grand sac de prélèvement d’échantillon et traitez l’échantillon dans les deux heures. Pour toutes les solutions de chlore, versez 200 millilitres de solution de chlore sur les mains du volontaire à travers un entonnoir à un débit de 1,5 litre par minute et demandez aux volontaires de se frotter soigneusement les mains. Comme autre méthode de lavage des mains, demandez aux bénévoles d’utiliser un désinfectant pour les mains pour se laver les mains.

Il est important que toutes les surfaces de la main soient frottées doucement, demandez aux participants de se concentrer sur chaque partie, paumes, ongles, entre les doigts pendant qu’ils frottent, puis assurez-vous que toute la main a été rincée. Pour le contrôle A, après l’inoculation, n’effectuez pas d’étape de lavage des mains. Pour le contrôle B, utilisez uniquement de l’eau ultrapure à température ambiante pour effectuer le lavage des mains à travers un entonnoir dont le débit est connu.

Après le lavage des mains, placez immédiatement la main de chaque volontaire sélectionnée pour le test dans un sac d’échantillonnage contenant 75 millilitres de Leeuwin jusqu’au poignet. Tenez fermement le haut du sac autour du poignet. Demandez aux volontaires de frotter doucement leur main dans la solution pendant 30 secondes, en prenant soin de passer la main entre les doigts et sous les ongles.

Massez doucement la main de l’extérieur du sac pendant 30 secondes pour vous assurer que toute la main est bien rincée dans le Leeuwin, jusqu’au poignet. Fermez le sac et traitez-le selon l’essai approprié. Avant de répéter le processus avec chaque méthode de lavage des mains, demandez aux volontaires d’utiliser du savon dans de l’eau tiède pour bien se laver les mains dans l’évier.

Enfin, utilisez de l’éthanol à 70 % pour vaporiser les mains du volontaire jusqu’à ce qu’elles soient enrobées des deux côtés, et laissez-les sécher. Pour analyser les échantillons, installez une flamme et un collecteur de filtration avec des entonnoirs de filtration stériles et un raccord à vide. Stérilisez les pinces en les trempant dans de l’éthanol et en les flamboyant.

À l’aide de la pince, placez un filtre de 0,45 micron sur le collecteur de filtration avec la grille vers le haut. Utilisez ensuite une petite quantité de PBS stérile pour mouiller le filtre. Placez l’entonnoir sur la base et pipetez ou versez l’échantillon directement sur le filtre.

Engagez le vide jusqu’à ce que l’échantillon entier ait traversé la membrane. Ensuite, utilisez du PBS stérile pour rincer les côtés de l’entonnoir et renouez l’aspirateur. Ensuite, retirez l’entonnoir, stérilisez à la flamme la pince et soulevez le filtre de la base.

Placez ensuite délicatement le filtre sur le support dans une boîte de Pétri avec la grille vers le haut, en veillant à ce que le filtre soit au ras de la surface. Retournez les plaques et incubez à 37 degrés Celsius pendant 24 heures. Après l’incubation, comptez les colonies d’E.Coli et enregistrez les données.

Effectuer l’analyse des données selon le protocole texte. Le protocole décrit dans cette vidéo a été complété avec 18 volontaires testés avec E.Coli et Phi6, pour E.Coli sans charge de sol, le lavage des mains avec HTH, NaDCC et NaOCl stabilisé, tous ont entraîné des réductions logarithmiques significativement plus importantes que le lavage des mains avec de l’eau seulement. Avec la charge de sol, HTH a entraîné une réduction significativement plus importante des logs d’E. Coli que le lavage des mains à l’eau uniquement avec du savon et de l’ABHS.

Il n’y avait pas de différence significative entre les méthodes pour Phi6 sans charge de sol. Cependant, pour Phi6 avec une charge de sol, l’eau seule a entraîné une réduction logarithmique plus importante que l’ABHS ou le NaOCl stabilisé, et le lavage des mains au savon une réduction logarithmique plus importante que l’ABHS, le NaOCl stabilisé et le NaOCl généré. Le HTH a également présenté une réduction logarithmique plus importante que l’ABHS et le NaOCl stabilisé ont entraîné une réduction logarithmique plus importante que le NaOCl stabilisé et l’ABHS.

Comme le montrent ces graphiques, le chlore a entraîné une réduction logarithmique significativement plus importante de la persistance d’E. coli dans l’eau de rinçage que le lavage des mains au savon. Enfin, le même schéma a été observé dans Phi6 sans charge de sol avec toutes les solutions chlorées, ce qui a entraîné une réduction significativement plus importante de Phi6 dans l’eau de rinçage que le lavage des mains au savon. Il n’y a pas eu de diminution significative de l’eau de rinçage avec Phi6 et de la charge de saleté.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que les résultats d’efficacité pour chaque condition sont calculés en comparant les résultats des deux témoins. Cela signifie qu’il est très important d’effectuer les étapes de manière cohérente pour chaque option de lavage des mains.