Une méthode pour tester l'efficacité du lavage des mains pour l'élimination des pathogènes infectieux émergents

L'objectif général de cette expérience est de tester l'efficacité comparative des différentes options de lavage des mains sur des mains qui ont été expérimentalement inoculées avec un organisme d'intérêt. Cette méthode peut fournir des informations sur des questions clés permettant de prévenir les maladies infectieuses, en permettant aux chercheurs d'évaluer l'efficacité du lavage des mains contre des organismes particuliers d'intérêt.

Le principal avantage de cette technique est qu'elle est souple et peut être adaptée pour permettre l'étude de nombreux organismes différents. Nous avons eu l'idée de cette méthode en réalisant que des solutions de chlore étaient utilisées pour le lavage des mains dans des contextes d'Ebola, sans qu'il existe à l'époque de preuves concernant leur efficacité. Après avoir recruté les sujets éligibles et préparé les solutions de lavage des mains conformément au protocole décrit, préparez les bactéries en étalant une souche non pathogène d'E. coli sur des géloses LB, puis incubez les cultures à 37 degrés Celsius pendant 24 heures afin d'obtenir des colonies isolées.

Un jour avant le début de l'expérience, utilisez un lubrifiant stérile pour prélever une colonie unique à partir de la boîte de Petri et ensemencer 10 millilitres de bouillon LB. Incubez les cultures à 37 degrés Celsius, sous agitation, pendant la nuit. Le matin de l'expérience, ajoutez un millilitre de la culture de nuit à 20 millilitres de bouillon LB frais.

Incubez les cultures pendant environ deux heures et demie afin d'obtenir une densité saline supérieure à 10 puissance huit UFC par millilitre. Ensuite, utilisez un spectrophotomètre pour estimer la concentration de la culture. Juste avant le test, préparez un inoculum composé de 68 % de suspension bactérienne ou virale et de 32 % de chlorure de sodium ou de charge de sol.

Agiter doucement ou faire tourbillonner pour mélanger. Après avoir préparé les volontaires conformément au protocole décrit dans le texte, mesurer le pH de la peau de chaque volontaire en plaçant la sonde plane de pH cutané dans l'espace interdigital entre l'index et le majeur. S'assurer que l'électrode est bien à plat contre la peau et enregistrer la valeur de pH obtenue.

Ensuite, demandez au volontaire de réunir ses deux mains en forme de cupule. Puis, pipetez soigneusement 750 microlitres de l'inoculum dans chaque paume afin de contaminer les mains. Lors de la contamination des mains des volontaires, il est important qu'aucun inoculum ne soit renversé.

Rappelez aux volontaires l'importance de cette étape et donnez-leur l'occasion de s'entraîner avec de l'eau avant de commencer la procédure. Demandez aux volontaires de frotter doucement leurs mains l'une contre l'autre jusqu'à ce que toutes les surfaces des mains soient recouvertes de l'inoculum, en exerçant le moins de friction possible. Instruisez les volontaires de maintenir leurs mains immobiles et éloignées de leur corps pendant encore 30 secondes afin de permettre au produit d'inoculation de sécher.

Ensuite, laver les mains en utilisant l'une des méthodes décrites dans le protocole écrit. Pour le lavage des mains avec du savon, utiliser 10 millilitres d'eau ultrapure pour mouiller les mains. Demander aux volontaires d'appliquer du savon et de frotter leurs mains ensemble pendant 20 secondes supplémentaires.

Rincez les mains du volontaire en versant 500 millilitres d'eau ultrapure à température ambiante à travers un entonnoir à un débit de 1,5 litre par minute dans un grand sac de collecte d'échantillon, puis traitez l'échantillon dans les deux heures. Pour toutes les solutions de chlore, versez 200 millilitres de solution de chlore sur les mains du volontaire à travers un entonnoir à un débit de 1,5 litre par minute et demandez aux volontaires de bien frotter leurs mains. Comme autre méthode de lavage des mains, demandez aux volontaires d'utiliser un désinfectant pour les mains afin de se laver les mains.

Il est important de frotter doucement toutes les surfaces des mains ; demandez aux participants de se concentrer sur chaque partie, les paumes, les ongles, les espaces entre les doigts pendant le frottement, puis assurez-vous que toute la main a été rincée. Pour le témoin A, après l'inoculation, ne pas effectuer d'étape de lavage des mains. Pour le témoin B, utiliser uniquement de l'eau ultrapure à température ambiante pour effectuer le lavage des mains à l’aide d’un entonnoir avec un débit connu.

Après le lavage des mains, placer immédiatement la main sélectionnée pour le test de chaque volontaire dans un sachet échantillon contenant 75 millilitres de Leeuwen jusqu'au poignet. Maintenir fermement le haut du sachet autour du poignet. Demander aux volontaires de frotter doucement leur main dans la solution pendant 30 secondes, en prenant soin d'atteindre les espaces entre les doigts et sous les ongles.

Massez doucement la main de l'extérieur du sac pendant 30 secondes afin de garantir un rinçage complet de toute la main dans le Leeuwin, jusqu'au poignet. Fermez le sac et traitez-le conformément au test approprié. Avant de répéter le processus avec chaque méthode de lavage des mains, demandez aux volontaires de se laver soigneusement les mains avec du savon dans de l'eau tiède au lavabo.

Enfin, utilisez de l’éthanol à 70 % pour vaporiser les mains du volontaire jusqu’à ce qu’elles soient recouvertes des deux côtés, puis laissez-les sécher. Pour analyser les échantillons, préparez une flamme et un système de filtration équipé d’entonnoirs de filtration stériles et d’une connexion sous vide. Stérilisez la pince en la trempant dans de l’éthanol puis en la passant à la flamme.

Utilisez la pince pour placer un filtre de 0,45 micron sur le support de filtration, avec la grille tournée vers le haut. Humidifiez ensuite le filtre avec une petite quantité de PBS stérile. Placez l'entonnoir sur la base et pipetez ou versez l'échantillon directement sur le filtre.

Activer le vide jusqu'à ce que tout l'échantillon ait traversé la membrane. Ensuite, rincer les parois de l'entonnoir avec du PBS stérile et réactiver le vide. Puis, retirer l'entonnoir, stériliser la pince à la flamme et soulever le filtre de la base.

Ensuite, placez délicatement le filtre sur le milieu dans une boîte de Pétri, la grille tournée vers le haut, en veillant à ce que le filtre adhère bien à la surface. Retournez les boîtes et incubez à 37 degrés Celsius pendant 24 heures. Après l'incubation, comptez les colonies d'E. coli et enregistrez les données.

Effectuez l'analyse des données conformément au protocole écrit. Le protocole décrit dans cette vidéo a été réalisé avec 18 volontaires testés avec E. coli et Phi6 ; pour E. coli sans charge en sol, le lavage des mains avec HTH, NaDCC et NaOCl stabilisé a donné des réductions logarithmiques significativement plus élevées que le lavage à l'eau seule. En présence de charge en sol, l'HTH a entraîné une réduction logarithmique d'E. coli significativement plus importante que le lavage à l'eau seule, le lavage avec savon et les solutions hydroalcooliques.

Il n'y avait aucune différence significative entre les méthodes pour Phi6 sans charge de sol. Toutefois, pour Phi6 avec charge de sol, l'eau seule a entraîné une réduction logarithmique supérieure à celle de l'ABHS ou de l'NaOCl stabilisé, et le lavage des mains avec du savon a entraîné une réduction logarithmique supérieure à celle de l'ABHS, de l'NaOCl stabilisé et de l'NaOCl généré. Le HTH a également montré une réduction logarithmique supérieure à celle de l'ABHS et de l'NaOCl stabilisé, et l'NaDCC a donné une réduction logarithmique supérieure à celle de l'NaOCl stabilisé et de l'ABHS.

Comme le montrent ces graphiques, le chlore a entraîné une réduction logarithmique significativement plus importante d’E. coli persistant dans l’eau de rinçage que le lavage des mains au savon. Enfin, le même schéma a été observé avec Phi6 en l’absence de charge organique, toutes les solutions de chlore conduisant à une réduction significativement plus importante de Phi6 dans l’eau de rinçage que le lavage des mains au savon. Aucune diminution significative n’a été observée dans l’eau de rinçage contenant Phi6 en présence de charge organique.

Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler que les résultats d'efficacité pour chaque condition sont calculés en comparant les résultats des deux témoins. Cela signifie qu'il est très important d'effectuer les étapes de manière cohérente pour chaque méthode de lavage des mains.