Dissection du pancréas de souris pour faire une analyse histologique et profilage métabolique

L'objectif principal de cet article vidéo est de fournir des instructions visuelles détaillées sur la dissection d'un pancréas de souris. Ces instructions seront utiles aux chercheurs qui étudient les modèles murins de maladies pancréatiques humaines et qui doivent prélever le pancréas de souris par dissection pour une analyse histologique ou un profil métabolique. L'article vidéo fournit également des instructions détaillées pour réaliser un prélèvement sanguin terminal par ponction cardiaque.

Voici une table d'opération avec le matériel nécessaire. Celui-ci comprend un bocal en verre avec couvercle, un tube Falcon de 15 mL, une paire de ciseaux chirurgicaux, un flacon pulvérisateur d'éthanol à 70 %, deux planchettes en mousse, deux pincettes, deux seringues de 1 mL à aiguille de calibre 21, deux tubes Falcon de 50 mL, un tube de centrifugeuse, un cryotube, quatre champs opératoires, dix épingles, un distributeur de lingettes désinfectantes et un conteneur pour objets tranchants. Voici la table postopératoire avec le matériel nécessaire.

Ce matériel comprend une balance analytique, un Dewar de quatre litres d'azote liquide, un Dewar à large ouverture peu profond, un support flottant pour microtubes, une paire de ciseaux chirurgicaux, deux pincettes, cinq cryotubes et un distributeur de lingettes stériles. Pour réaliser l'euthanasie, la souris est d'abord placée dans un bocal en verre contenant un tampon de gaze imprégné de quelques gouttes d'isoflurane, puis le bocal est recouvert de son couvercle jusqu'à ce que la souris perde connaissance, ce qui prend généralement environ une minute. La souris est ensuite retirée du bocal en verre et un test de pincement du pied est effectué afin de s'assurer qu'elle ne peut pas ressentir de gêne.

Si le test de pincement de la patte échoue, la souris est remise dans le bocal en verre et le couvercle est replacé jusqu'à ce que le test de pincement de la patte puisse être effectué avec succès. Placez la souris sur le dos et fixez ses membres sur la plaque de mousse chirurgicale, puis humidifiez la face ventrale de la souris avec de l'éthanol à 70 %. Pincez les poils près de l'orifice urétral avec la pince et tirez légèrement vers le haut.

Pratiquer une incision à travers la cavité abdominale, en partant de l'orifice urétral, remontant en ligne médiane et se terminant au niveau du menton. Près du point de départ de l'incision initiale, saisir un côté du pelage et pratiquer une autre incision vers le bas et en diagonale en direction de la patte arrière. Répéter cette opération de la même manière sur le côté opposé.

Localisez le cœur pour effectuer la ponction cardiaque terminale. Pour ce faire, saisissez le sternum avec la pince et incisez le diaphragme. Coupez rapidement vers le haut à travers la cage thoracique et retirez la partie incisée afin d'exposer le cœur battant.

Une fois le cœur localisé, retirez le péricarde et effectuez la ponction cardiaque terminale à l’aide de la seringue. Pour une collecte optimale du sang, utilisez le piston de la seringue afin d’imiter l’action de pompage du cœur et évitez de tirer trop rapidement. Transférez le sang dans l’éprouvette de centrifugation et jetez la seringue dans le conteneur pour objets tranchants.

Après la ponction cardiaque, l'euthanasie est réalisée en sectionant les attaches reliant le cœur. Localisez l'estomac du côté gauche de la souris. Le pancréas présente l'aspect d'un tissu diffus de couleur plus claire qui est relié à l'estomac et au duodénum, tout le long de l'intestin grêle et du gros intestin, et qui est attaché à la rate.

Commencez à séparer délicatement le pancréas de l'estomac et du duodénum à l'aide de la pince. Poursuivez la séparation du pancréas par rapport à l'intestin grêle en continuant depuis les sections du jéjunum et de l'iléon, puis jusqu'au caecum et au gros intestin. Au niveau du caecum, repositionnez la pince et poursuivez la dissociation du pancréas le long du colon restant en direction du rectum.

À ce stade, il est pratique de découper et d'enlever la section allant de l'estomac à la région du côlon située immédiatement avant le rectum. Localisez le pancréas ainsi que la rate qui y est attachée. Faites glisser le pancréas vers le côté droit de la souris.

Couper les connexions restantes entre le pancréas et la cavité thoracique afin de détacher complètement le pancréas ainsi que la rate adjacente. Retirer le pancréas et l’étaler pour l’examiner. Si souhaité, d'autres organes peuvent être retirés à ce stade.

Après l'extraction, les échantillons sont transférés vers la zone postopératoire. Chaque organe sera pesé, puis placé dans son cryotube respectif. Notez toute irrégularité observée.

Une fois les organes placés dans les cryotubes, mettez-les dans la grille flottante pour microtubes, puis dans le Dewar contenant de l'azote liquide. Après la congélation rapide, l'organe doit être conservé à moins 80 degrés Celsius pour une conservation à long terme. Tous les outils de dissection utilisés doivent être désinfectés à l’aide de lingettes stérilisantes.

Le tube Falcon doublé du tampon chirurgical imprégné d'isoflurane doit être refermé avec son bouchon. Le tampon chirurgical sur la plaque de mousse doit être remplacé par un tampon chirurgical neuf. Les parties de la souris qui n'ont pas été prélevées doivent être éliminées conformément à la politique d'élimination des animaux du laboratoire.

Les éléments suivants doivent être manipulés en conséquence. Une fois que ces éléments sont correctement stockés, une multitude d'expériences peuvent être réalisées, notamment la microscopie de fluorescence, l'histologie à l'hématoxyline et à l'éosine, l'immunohistochimie, la spectrométrie de masse et la spectroscopie de résonance magnétique nucléaire. Le pancréas étant un organe principal impliqué dans l'activité métabolique et la production d'insuline, cette procédure permet de préserver les caractéristiques physiologiques.

En isolant le pancréas, des analyses futures peuvent être réalisées sur l'échantillon. Cette procédure permet la comparaison et l'étude des interactions provenant d'autres tissus au sein du même organisme, dans le même laps de temps.