Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Tom Shani; Moshe Levy; Adrian Israelson

doi:10.3791/55676

Essai pour mesurer le transport des nucléocytoplasmes en temps réel dans les cellules NSC-34 de t...

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Neuroscience

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Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Essai pour mesurer le transport des nucléocytoplasmes en temps réel dans les cellules NSC-34 de type Neuron moteur

Full Text

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08:53 min

May 16, 2017

DOI: 10.3791/55676-v

Tom Shani¹, Moshe Levy¹, Adrian Israelson^1,2

¹Department of Physiology and Cell Biology, Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, ²The Zlotowski Center for Neuroscience,Ben-Gurion University of the Negev

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes a sensitive method to measure the nucleocytoplasmic transport rate in motor neuron-like NSC-34 cells. It quantifies real-time changes in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein, aiding in the study of neurogenetic diseases like ALS.

Key Study Components

Area of Science

Neuroscience
Cell Biology
Neurogenetics

Background

Nucleocytoplasmic transport is crucial for cellular function.
ALS and other neurogenetic diseases may disrupt this transport.
Real-time measurement techniques enhance understanding of these processes.
NSC-34 cells serve as a model for studying motor neuron behavior.

Purpose of Study

To detect changes in nucleocytoplasmic transport rates.
To assess the impact of transport rate-suppressive molecules.
To provide insights into neurogenetic diseases like ALS.

Methods Used

Thawing mouse neuroblastoma spinal cord cells.
Centrifugation and resuspension in fresh medium.
Quantification of nuclear import of NLS-NES-GFP protein.
Real-time analysis of transport rates.

Main Results

Demonstrated high sensitivity and quantitative capability.
Real-time analysis revealed minute changes in transport rates.
Identified potential effects of suppressive molecules.
Provided a reliable method for studying nucleocytoplasmic transport.

Conclusions

This method is effective for studying nucleocytoplasmic transport.
It can help elucidate mechanisms underlying neurogenetic diseases.
Future applications may extend to other cell types and conditions.

Frequently Asked Questions

What is nucleocytoplasmic transport?

Nucleocytoplasmic transport is the process by which molecules move between the nucleus and the cytoplasm of a cell.

Why is this transport important?

It is essential for various cellular functions, including gene expression and protein synthesis.

How does ALS affect nucleocytoplasmic transport?

ALS may disrupt the transport process, leading to cellular dysfunction and neurodegeneration.

What are NLS and NES?

NLS (nuclear localization signal) and NES (nuclear export signal) are sequences that direct proteins to enter or exit the nucleus.

What are the advantages of this method?

It is highly sensitive, quantitative, and allows for real-time analysis of transport rates.

Who demonstrated the procedure?

The procedure was demonstrated by Tom Shani, a graduate student from the laboratory.

Ce protocole décrit un procédé pour mesurer de façon sensible le taux de transport nucléocytoplasmique dans les cellules NSC-34 de type neurone moteur en quantifiant le changement en temps réel de l'importation nucléaire d'une protéine NLS-NES-GFP.

L’objectif global de ce test est de détecter en temps réel des changements infimes dans le taux de transport nucléocytoplasmique des cellules en l’absence ou en présence de molécules potentiellement suppressives du taux de transport. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur des maladies neurogénétiques spécifiques telles que la SLA, qui ont été proposées pour avoir un impact négatif sur le transport nucléocytoplasmique. Certains avantages de cette technique sont qu’elle est très sensible et quantitative et qu’elle permet l’analyse en temps réel de changements infimes dans le taux de transport nucléocytoplasmique.

Tom Shani, un étudiant diplômé de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Commencez par décongeler environ une fois 10 à 10 à six cellules de la moelle épinière du neuroblastome de souris à partir d’un stockage d’azote liquide dans un bain d’eau à 37 degrés Celsius. Lorsque les cellules sont complètement décongelées, récupérez-les par centrifugation et remettez la pastille en suspension dans un millilitre de milieu frais.

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