Test de reconnaissance d’objet nouveau pour la recherche sur l’apprentissage et la mémoire chez les souris

L’objectif global de cet essai comportemental est de tester divers aspects de l’apprentissage et de la mémoire chez la souris. Cette méthode peut aider à répondre à de nombreuses questions dans le domaine de la cognition des rongeurs, des bases du développement d’une compréhension plus profonde, pour certains aspects de l’apprentissage de la mémoire et des souris, ainsi que des problèmes plus complexes, tels que les troubles cognitifs, y compris les modèles de maladies, comme la maladie d’Alzheimer, à l’exploration de l’amélioration cognitive potentielle. Le principal avantage de l’ORT est sa simplicité, son efficacité et sa flexibilité et l’étude de l’apprentissage et de la mémoire chez la souris.

Andrei Jeltyi, un technicien de laboratoire de notre laboratoire, fera la démonstration de cette procédure. Commencez par sélectionner des objets de la taille d’une taupe qui peuvent être facilement discriminés par l’animal, mais qui ont un degré de complexité similaire dans les caractéristiques, telles que la texture, la forme ou la luminosité, afin de minimiser toute préférence d’objet induite potentielle qui pourrait biaiser les résultats. De plus, pour réduire davantage les préférences induites, assurez-vous que les souris sont capables de grimper sur les deux objets ou sur aucun des deux objets.

La capacité de grimper sur un objet peut augmenter l’intérêt pour l’exploration. Ensuite, pour minimiser le stress d’un éclairage vif, utilisez un éclairage faible désamorcé avec le centre du labyrinthe éclairé autour de 20 chances. Acclimatez les souris à toute nouvelle salle d’essai pendant au moins une heure avant de l’utiliser chaque jour et maintenez la température et l’humidité similaires aux conditions normales du logement.

Notez que les souris doivent être manipulées une à deux fois par jour pendant au moins une minute, au cours d’une à deux semaines avant le test. Enfin, pour l’arène principale, utilisez une chambre carrée en plastique non poreux blanc ou noir contrastant avec la couleur de la souris. Commencez par retirer la souris de sa cage d’accueil et placez-la au milieu de l’arène vide et ouverte.

Permettez d’explorer librement l’arène pendant cinq minutes. Une fois que la cage domestique est vide, conservez-la pour l’utiliser comme cage de stockage le lendemain. Au bout de cinq minutes, retirez la souris et placez-la dans une cage de maintien.

Ne remettez pas la souris dans sa cage d’origine, sinon cela pourrait affecter le comportement des souris restantes à tester. Ensuite, nettoyez soigneusement l’appareil entre les souris, en utilisant 70 % volume par volume d’éthanol. Ensuite, commencez la phase d’entraînement ou T1, en plaçant deux objets identiques dans des quadrions opposés de l’arène.

Par exemple, un dans le coin nord-ouest et un dans le coin sud-est. Fixez tous les objets trop légers au sol avec du mastic de montage de retrait. Contrebalancez l’utilisation de chaque ensemble d’objets ainsi que l’emplacement de l’objet romanesque à chacun des quatre coins de l’arène.

Assurez-vous de savoir quelle diagonale est utilisée pour quel animal, afin que la diagonale utilisée le jour de l’entraînement ait la forme de celle utilisée le jour du test pour chaque souris. 24 heures après l’accoutumance, retirez la souris de sa cage d’accueil et placez-la au centre de l’arène, à égale distance des deux objets identiques pour commencer l’entraînement. Permettez l’exploration libre pendant au moins cinq minutes, si vous fusionnez une souche de souris connue pour avoir une faible activité locomotrice ou d’exploration, prolongez l’essai à 10 minutes pour toutes les souris des cohortes.

À la fin de l’essai d’entraînement, retirez la souris et placez-la dans la cage de maintien. Une fois que la cage d’accueil est vide, conservez-la pour l’utiliser comme cage de stockage le jour du test. Assurez-vous de nettoyer l’appareil et les objets entre les souris.

Ensuite, commencez la phase de test ou T2, en plaçant l’objet familier utilisé pendant l’entraînement et un nouvel objet dans les quadrons opposés de l’arène. Utilisez les mêmes emplacements que ceux que vous utilisez pendant l’entraînement pour chaque souris. À l’intervalle T1 à T2 de votre choix, retirez la souris de sa cage d’accueil et placez-la dans l’arène centrale, à égale distance de l’objet familier et de l’objet nouveau.

Permettez l’exploration libre pendant 10 minutes. Enfin, à la fin de l’essai, retirez la souris et placez-la dans la cage de maintien. Pour l’analyse, l’exploration est définie comme le nez dirigé vers l’objet à moins de deux ou trois centimètres avec un balayage de vibration actif.

Cependant, la souris posée sur l’objet n’est pas prise en compte dans le temps d’exploration. Pour T1 et T2, notez les cinq premières minutes et calculez le temps total d’exploration des deux objets pour chaque session. Si la souris n’atteint pas le temps d’exploration minimum de 20 secondes pour les deux objets, continuez à marquer au-delà de cinq minutes jusqu’à ce que l’exploration totale dépasse 20 secondes.

Prolonger de cinq minutes les temps T1 et T2 pour les souches de souris dont l’exploration est faible et qui ne répondent pas à ce critère minimum, comme observé lors des essais pilotes. Enfin, si les souris n’atteignent pas un minimum de 20 secondes d’exploration pour les deux objets pour T1 ou T2 à 10 minutes, excluez-les de l’analyse car il ne peut pas être confirmé que l’animal a passé suffisamment de temps à explorer pour apprendre et discriminer. La tâche de reconnaissance d’objets est une méthode efficace et flexible pour étudier l’apprentissage et la mémoire chez la souris, dans laquelle il a été démontré que les inhibiteurs de la phosphodiestérase 2 s’améliorent au cours de cette tâche.

Par rapport à l’autovéhicule, l’administration des baies 60-7550 ou ND7001 inhibiteurs de la PDE2 a considérablement amélioré la mémoire de manière dose-dépendante, lorsqu’elle est administrée 30 minutes avant l’entraînement. Lorsqu’il est administré à différents moments, par rapport à l’entraînement et aux tests, l’inhibiteur de la PDE2 60-7550 a considérablement amélioré sa mémoire lorsqu’il a été administré 30 minutes avant l’entraînement, ainsi qu’immédiatement après l’entraînement et 30 minutes avant le rappel. Une fois maîtrisée, cette technique peut être complétée en deux à trois jours si elle est exécutée correctement.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de mener des études pilotes et de choisir soigneusement l’intervalle T1 à T2, car le choix d’un mauvais intervalle peut entraîner une mauvaise affectation. Suite à cette procédure, d’autres méthodes comme le labyrinthe de la grange peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires telles que les différences d’apprentissage, qui ne peuvent pas être entièrement résolues à l’aide des tests de reconnaissance d’objets. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’apprentissage et de la mémoire pour explorer les mécanismes biologiques de base de la mémoire, ainsi que pour explorer les mécanismes potentiels de divers déficits cognitifs chez les rongeurs.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de configurer et de concevoir une expérience appropriée à l’aide du test de reconnaissance d’objets, y compris l’exécution d’études pilotes, le choix d’objets et la sélection de l’intervalle T1 à T2 approprié. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.