Name: Suraccumulation induite par le Ileectomy de Bile dans l’intestin de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Découvrez la résection iléale chez la souris pour étudier la malabsorption et la suraccumulation des acides biliaires. Cette méthode aide les chercheurs à comprendre la diarrhée aux acides biliaires et les maladies de l'iléum.

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Cette recherche est soutenue par Tom Peterson Fondation et accorder des NIH R01-HL119780 (Jain, MK).

protocole animale a été revu et approuvé par le Comité de l’urbanisme à la Case Western Reserve University School of Medicine et d’institutionnels animalier et a été menée conformément au Guide National Institutes of Health (NIH) pour le Care and Use of Laboratory Animals (8e édition, 2011). Souris ont été euthanasiés par des méthodes conformes avec les directives de l’American Veterinary Medical Association (AVMA) pour l’euthanasie des animaux (édition de 2013). Souris de 8-16 semaines de vieux mâles, C57BL/6J, ont été utilisés dans le présent protocole. Souris ont été logés dans un environnement sombre/clair cycle de 12 h.
 1. préparation préopératoire <ol><li>transfert de souris à une cage propre 24 h avant l’intervention. Permettre aux animaux libre accès à l’eau. Remplacer la nourriture chow avec des aliments mous (complément alimentaire gel) 4-6 h avant la chirurgie afin de réduire le contenu de l’intestin grêle pour chirurgie.</li>
	<li>Stériliser tous les instruments chirurgicaux et de préparer le matériel chirurgical stérile à usage unique. Nettoyer le domaine de la chirurgie et l’anesthésie coiffe avec l’éthanol à 70 %.</li>
	<li>Mis en place un microscope à dissection, isoflurane vaporisateur anesthésique, instruments et une température contrôlée petite animale table d’opération chirurgicale pour maintien en température corps. Organiser les instruments, les sutures et seringues dans un emplacement pour un accès gratuit pendant la chirurgie.</li>
	<li>Mis en place une source de lumière pour fournir assez de lumière pour la zone chirurgicale.</li>
	<li>Préparer la solution saline 0,9 % stérile dans la seringue de 5 mL pour un nettoyage intestinal et abdominale.</li>
</ol> 2. Ileectomy et anastomose <ol><li>souris anesthésier à l’isoflurane (2-3 %) dans une chambre de petit animal de l’incubation. Déterminer anesthetization adéquate en utilisant la technique de pincement d’orteil alors que l’animal est sur isoflurane.</li>
	<li>Enlever les poils abdominaux en appliquant le produit cheveux et essuyer les cheveux loin à l’aide de compresses tout en conservant l’anesthésie. Placez votre souris sur une température contrôlée petite animale table d’opération chirurgicale ( Figure 1 A) pour maintenir la température corporelle à 37 ° C. maintenir l’anesthésie à l’isoflurane (1-2 %) grâce à un masque facial. Traiter les yeux de la souris avec l’onguent oculaire.</li>
	<li>Nettoyer la peau à l’aide de povidone-iode et 70 % d’alcool et couvre la zone chirurgicale de l’abdomen avec de la gaze chirurgicale stérile ( Figure 1 B).</li>
	<li>Faire une incision abdominale médiane à l’aide d’un bistouri dès que l’anesthésie est en vigueur. Utilisez un coton-tige pour protéger le muscle abdominal souris intestin et tirez avec rétracteurs pour pleinement ouvert et exposer la cavité abdominale ( Figure 1 C).</li>
	<li>Localiser le caecum. À partir de caecum, déplacer délicatement l’iléon connecté et une partie du jéjunum hors de la cavité abdominale ( Figure 1 D). 
	Remarque : Le caecum peut facilement être identifié en raison de sa grande taille même après avoir jeûné.</li>
	<li>Ligaturer la branche supérieure de l’artère mésentérique supérieure avec une suture de soie de 7-0 d’occlure le sang fournissant le segment iléal qui consiste à être excisées. La couleur iléale passe du rose au violet foncé après ligature. (E - F de la figure 1).</li>
	<li>Selon le but de l’expérience, à l’aide de ciseaux, d’accise et enlever 50 % ou 90 % de l’iléon. 
	Remarque : Pour la chirurgie de l’imposture, n’effectuez pas la ligature de l’artère mésentérique supérieure et ne retirez pas l’iléon.</li>
	<li>Rincer la lumière des deux extrémités iléales avec sérum physiologique à 0,9 %. 
	NOTE : comme l’iléon intacte restante reçoit encore une circulation sanguine normale de l’artère mésentérique supérieure, une petite quantité de sang va être éliminée au cours du processus. Cela indique également que les réserves de sang aux extrémités iléales sont normal et qu’il n’assure aucune ischémie au cours de la procédure de l’anastomose ( Figure 1 G).</li>
	<li>Localiser les mésentères sur le côté de chaque extrémité iléale. Aligner les mésentères et suturer les extrémités iléales ensemble à l’aide de suture ( Figure 1 G - H) de la 8-0.</li>
	<li>Suture du côté controlatéral de l’iléon pour garder l’iléon anastomoser de manière naturelle ( Figure 1 I).</li>
	<li>Suture les côtés supérieures et inférieures, entre les deux sutures originales à bien joindre les deux iléale extrémités ensemble ( Figure 1 J).</li>
	<li>Confirme qu’il n’y a pas de fuite provenant du site de l’anastomose après avoir terminé la procédure suture en trois étapes ( Figure 1 G-I). Retourner le caecum et l’intestin grêle dans la cavité abdominale à l’emplacement d’origine anatomique. Laver la zone de chirurgie avec du sérum physiologique 0,9 % tiède à l’aide d’une aiguille émoussée. ( figure 1 K).</li>
	<li>Refermer l’incision de la couche de muscles abdominaux avec suture 6-0. Alignez l’incision cutanée abdominale à l’aide de pinces et suture de la peau abdominale afin de faciliter la cicatrisation optimale ( Figure 1 L).</li>
</ol> 3. Soins postopératoires souris <ol><li>transfert après l’intervention d’une unité de soins intensifs pour la récupération. Les loger dans une cage de papier-literie sur une garniture de chauffage à température contrôlée pour continuer la récupération post-opératoire du jour au lendemain. Fournir des souris avec des aliments mous, en plus de nourriture et d’eau.</li>
	<li>Administrer buprénorphine (0,05 - 0,1 mg/kg) par injection sous-cutanée tous les 8 à 12 h pour l’analgésie. 
	NOTE : Euthanasier souris par le CO 2 si gravement malade.</li>
	<li>à la fin, sacrifier la souris à l’aide de surdosé isoflurane et récolte des échantillons selon les besoins (section 4).</li>
</ol> 4. Évaluation de suraccumulation de Bile induite par le Ileectomy <ol><li>peser et disséquer les souris un jour après une résection de 0 % (sham), 50 % ou 90 % de l’iléon.</li>
	<li>Supprimer le tractus gastro-intestinal et pesez-le. Calculer le poids de la GI au rapport de poids de corps pour évaluer la sévérité de la malabsorption des sels biliaires et de suraccumulation.</li>
	<li>Transfert du tractus GI dans des tubes coniques 15 mL et les couper en segments courts à l’aide de ciseaux. Après la découpe, centrifuger à 3 000 x g pendant 10 min. transférer le surnageant (GI fluide contenant des sels biliaires) dans un tube propre.</li>
	<li>Mesurer le volume total et le poids du fluide de la GI et de calculer le poids de fluide GI tract rapport poids / afin d’évaluer davantage suraccumulation de bile dans le tractus gastro-intestinal.</li>
	<li>Déterminer le montant total de bile dans le surnageant par dosage de l’acide biliaire, comme décrit dans référence 8.</li>
</ol>

<ol><li>McLeod, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+for+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis%22%5BJournal%5D)">Surgery for inflammatory bowel diseases.</a> Dig Dis. 21, 168-179 (2003).</li>
<li>Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%3A+the+view+of+the+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Colorectal+Dis%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon.</a> Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).</li>
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<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+of+bile+acid+diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding of bile acid diarrhea.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).</li>
<li>Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+article%3A+bile+acid+diarrhoea+-+pathogenesis%2C+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Aliment+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management.</a> Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).</li>
<li>Rao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organic+solute+transporter+alpha-beta%2C+Ostalpha-Ostbeta%2C+is+essential+for+intestinal+bile+acid+transport+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).</li>
<li>Hofmann, A. F., Poley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholestyramine+treatment+of+diarrhea+associated+with+ileal+resection%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cholestyramine treatment of diarrhea associated with ileal resection.</a> N Engl J Med. 281, 397-402 (1969).</li>
<li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF19+as+a+postprandial%2C+insulin-independent+activator+of+hepatic+protein+and+glycogen+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">FGF19 as a postprandial, insulin-independent activator of hepatic protein and glycogen synthesis.</a> Science. 331, 1621-1624 (2011).</li>
<li>Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+intestinal+soap--bile+acids+in+metabolic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control.</a> Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).</li>
<li>Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AGA+technical+review+on+short+bowel+syndrome+and+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation.</a> Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Afin d’effectuer une ileectomy réussie, l’artère mésentérique supérieure doit être ligaturé à l’avance pour bloquer l’approvisionnement en sang au segment RESECTION. Le segment iléal ischémique s’éteindront violet foncé après ligature. Le segment iléal doit alors être complètement réséqué. Une irrigation sanguine normale doit être assurée pour les extrémités retenues. Cela est essentiel pour éviter les saignement et une mauvaise élimination, qui peut facilement cause échec chirurgical en raison de la nécrose ischémique a...

Dans la recherche biomédicale moderne, modèles animaux génétiquement manipulés sont largement utilisés pour glaner des aperçus de maladies humaines. En particulier, tissu ou spécifiques des cellules pertes et gain des fonctions des gènes ont été utilisées pour étudier la régulation moléculaire ainsi que des effets biologiques induits. Malgré les progrès de la manipulation des gènes cibles in vivo, il y a limitation persistante. Première, nombreux cellulaires ou tissulaires destructions spécifiques aura une incidence sur plusieurs organes. Par exemple, suppression de gène épithéliales éliminera expression dans l’épithélium de nombreux tissus. En outre, même si la suppression est restreinte à un tissu spécifique, contrôle spatial est rarement possible. Par exemple, dans un tissu comme l’intestin, segments distincts de réaliser des fonctions très spécifiques qui ne peuvent pas être manipulées avec précision en vivo. Dans ces situations, la résection des tissus contenant du gène on estime qu’une approche plus efficace d’étudie pour déterminer l’importance mécaniste et fonctionnel de la communication de tissu.
Ileectomy est surtout utilisé en patients atteints de maladie de Crohn et les maladies inflammatoires, impliquant l’iléon distal 1,2,3. L’iléon produit généralement plusieurs hormones de stockage énergétique comme facteur de croissance fibroblastique 15/19 (FGF15/19), peptide YY (PYY) et le glucagon-like peptide 1/2 (GLP1/2) ; ces hormones jouent un rôle local et endocrinien important dans plusieurs fonctions biologiques4,5,6. Parmi ces hormones, FGF15 a été identifié comme un inhibiteur endocrinien robuste de la synthèse des acides biliaires dans le foie. Une fois réabsorbé dans les entérocytes iléaux, acides biliaires activent le récepteur de farnesoid X de récepteurs nucléaires (FXR) pour stimuler l’expression de Fgf15 , qui par la suite conduit à rétro-inhibition de la synthèse hépatique des acides biliaires 7. Dans une étude récente, nous avons introduit le modèle ileectomy de la souris afin d’étudier l’iléale kruppel-like factor 15 (KLF15) -Fgf15 axe qui régule la production de circadienne des acides biliaires dans le foie 8de signalisation. Plus important encore, nous avons introduit une nouvelle famille, les facteurs de kruppel-like, particulièrement KLF15, en biologie de l’acide biliaire. Se fondant sur des études fonctionnelles, y compris une chirurgie ileectomy, nous avons déterminé que KLF15 augmente la synthèse d’acides biliaires via un mécanisme indirect de non hépatiques. Enfin, KLF15 iléale est également identifiée comme le premier régulateur négatif endogène de Fgf15.
Les segments intestinaux descendant de proximal à distales régions sont responsables de l’absorption des nutriments différents. L’iléon est le segment majeur responsable des acides biliaires et la vitamine B12 (VB12) absorption 9. Une étude antérieure a employé un modèle murin de résection intestinale proximale afin d’étudier le syndrome de l’intestin court ; diverses longueurs de résection, alimentation et types de suture ont été proposées pour maintenir un taux optimal de survie après la chirurgie 10. En outre, une étude plus récente indique que résection iléale entraîne généralement une maladie plus grave que les autres résections de segment gastro-intestinal (GI) en raison de la capacité d’adaptation une diminution des autres voies 11. Ce sujet a gagné intensives intérêts de groupes de recherche fondamentale et clinique, alors que la compréhension de la récupération et les approches thérapeutiques efficaces sont encore limitées.
Acide biliaire diarrhée provient de déséquilibres dans l’homéostasie des acides biliaires dans l’enterohepatic circulation 12,13. Il peut être une conséquence de la résection iléale, maladie gastro-intestinale ou un résultat de malabsorption des acides biliaires idiopathiques. Plus de 80 % des patients se présentent avec diarrhée après avoir subi une résection iléale 14. Ileectomy a le potentiel pour être un modèle de chirurgie importante pour l’étude des acides biliaires diarrhée. Dans cette étude, une série de résection iléale fournissent une évaluation dégradée de carence en FGF15 ainsi que la malabsorption intestinale des sels biliaires, suraccumulation et dommages toxiques.

<table><tbody><tr><td>Microscope de dissection</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Régulateur de température animale</td><td>Physitemp Instruments, Inc.</td><td>TCAT-2LV</td><td>Pour le contrôle de la température corporelle</td></tr><tr><td>Vaporisateur anesthésique Isoflurane</td><td>VetEquip</td><td>&nbsp ; 911104</td><td>Pour l’anesthésie Pince</td></tr><tr>de<td>dissection</td><td>&nbsp ; Outils de science fine, Inc.</td><td>11274-20</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>&nbsp ; Outils de science fine, Inc.</td><td>14084-08</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Porte-aiguille</td><td>&nbsp ; Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-7882</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Micro couteaux-lame d’aiguille</td><td>Fisher Scientific</td><td>10318-14</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Suture monofilament 6-0</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td>Pour la fermeture de la peau abdominale</td></tr><tr><td>Suture en soie 7-0</td><td>Ethicon</td><td>766G</td><td>Pour la ligature</td></tr><tr><td>Suture monofilament 8-0</td><td>Ethicon</td><td>1714G</td><td>Pour l’anastomose</td></tr><tr><td>Éponges chirurgicales</td><td>Dynarex Corp.</td><td>3333</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Petits applicateurs à embout de coton&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>Pour la chirurgie&nbsp ;</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>66794-013-25</td><td>Pour l’anesthésie Chlorhydrate</td></tr> de <tr><td>buprénorphine</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>12496-0757-1</td><td>Pour l’analgésie</td></tr><tr><td>0,9 % chlorure de sodium Injection</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>0264-7800-10</td><td>Pour lavage/injection</td></tr> Solution de <tr><td>préparation de povidone iodé</td><td>Dynarex Corp.</td><td>1413</td><td>Pour la préparation de la peau</td></tr><tr><td>Puralube pommade vétérinaire</td><td>Dechra Produits vétérinaires</td><td>17033-211-38</td><td>Pour la protection des yeux</td></tr><tr><td>Lotion dépilatoire</td><td>Church & Dwight Co., Inc.</td><td></td><td>Pour la préparation de la peau</td></tr><tr><td>Unité de soins intensifs</td><td>ThermoCare</td><td>FW-1</td><td>Pour la récupération post-opératoire</td></tr><tr><td>DietGel recovery</td><td>ClearH2O</td><td>72-06-5022</td><td>Pour la récupération post-opératoire</td></tr><tr><td>Kit pour les tissus adipeux et fibreux ARN total Aurum</td><td>Bio-Rad</td><td>7326830</td><td>Pour l’isolement de l’ARN</td></tr><tr><td>Transcription inverse iScript supermix pour RT-qPCR</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td>Pour test de transcription inverse</td></tr><tr><td>TaqMan fast advanced master mix</td><td>Applied Biosystems/Life Technologies</td><td>4444965</td><td>Pour l’analyse QPCR</td></tr><tr><td>Kit de dosage des acides biliaires totaux</td><td>Genzyme Diagnostic</td><td>DZ042A-K01</td><td>Pour le dosage des acides biliaires</td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp ;</td><td>Le Laboratoire</td><td></td><td></td> Jackson</tr></tbody></table>

suraccumulation induite par le ileectomy de bile dans l’intestin de souris

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Résection intestinale est une commune approche thérapeutique pour les maladies comme l’obésité, maladie inflammatoire de l’intestin, la maladie de Crohn et le cancer du côlon qui entraîne souvent des effets indésirables comme le syndrome sévère de l’intestin court y compris diarrhée acide biliaire, déshydratation, troubles électrolytiques et malabsorption des nutriments. Ici, nous présentons un modèle murin de résection iléale, appelé ileectomy, pour évaluer la communication de tissu et le maintien de l’homéostasie systémique. Après résection iléale, sang circulant est définitivement dépourvu le facteur de croissance de fibroblaste iléon spécifiques hormone endocrine 15 (FGF15), qui libère son endocrinienne inhibition de la synthèse des acides biliaires dans le foie. En combinaison avec l’augmentation de la production et aboli la réabsorption des acides biliaires après avoir enlevé l’iléon, la souris qui a été opéré souffrent de suraccumulation de sels biliaires dans l’intestin et de la diarrhée associée, la morbidité et la mortalité. Nouvelle utilisation du modèle chirurgie introduit dans cette étude peut-être donner un aperçu mécaniste et fonctionnel iléale contrôle de régulation métabolique systémique dans la physiologie et la maladie.

Les modalités d’ileectomy sont indiquées dans la Figure 1. La première étape comprend la préparation cutanée abdominale de souris, faire une incision abdominale et à l’aide de rétracteurs d’exposer pleinement l’intestin (Figure 1A-C). Ensuite, se trouvait le caecum de souris (Figure 1D) ; étant donné que sa taille et sa forme en font un point de repère facilement ide...

La réabsorption des acides biliaires dépendant de l’intestin grêle et rétro-inhibition de la synthèse hépatique des acides biliaires est important pour la santé et de l’homéostasie systémique. Dans cette étude, nous décrivons un modèle murin pour résection iléale évaluer la malabsorption induite par l’ileectomy de bile et suraccumulation toxicité dans l’intestin de souris.

Suraccumulation induite par le Ileectomy de Bile dans l’intestin de souris

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

L'objectif général de cette chirurgie est d'évaluer la malabsorption, l'accumulation excessive et la toxicité de la bile induites par une iléectomie dans l'intestin de la souris. Les maladies de l'iléon, qui se manifestent par des affections telles que la maladie de Crohn, le cancer, les troubles auto-immuns ou les infections, constituent des causes importantes de morbidité et de mortalité. Le développement de ce modèle, impliquant l'ablation segmentaire de l'iléon, selon nous, peut fournir des informations utiles tant sur le plan biologique que thérapeutique.Les implications de cette technique s'étendent à la thérapie de la diarrhée aux acides biliaires, car une iléectomie peut potentiellement induire une surproduction d'acides biliaires par le foie ainsi qu'une mauvaise absorption et une suraccumulation par l'intestin. En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés avec l'anastomose intestinale, qui constitue la partie la plus critique et la plus délicate de cette chirurgie. Commencez par confirmer le niveau approprié de sédation par une pression sur l'orteil et appliquez une crème dépilatoire sur l'abdomen de la souris.Retirer les poils avec des compresses chirurgicales et placer l'animal sur une table chirurgicale chauffante pour petit animal réglée à 37 degrés Celsius. Appliquer un onguent sur les yeux de l'animal et désinfecter la peau exposée par un nettoyage successif à la povidone-iodée et à l'éthanol 70 %. Recouvrir la zone chirurgicale de l'abdomen avec une gaze stérile et utiliser un scalpel pour pratiquer une incision médiane dans l'abdomen et traverser la couche musculaire.À l’aide d’un applicateur en coton pour protéger les intestins, écarter complètement les muscles abdominaux de la souris à l’aide de rétracteurs afin d’exposer la cavité abdominale. À partir du cæcum, déplacer soigneusement l’iléon connecté et une partie du jéjunum hors de la cavité abdominale, puis utiliser un fil de suture en soie 7-0 pour ligaturer la branche supérieure de l’artère mésentérique supérieure. Lorsque la couleur du tissu passe du rose au foncé, indiquant une occlusion complète, utiliser des ciseaux pour exciser 50 ou 90 % de l’iléon, selon les paramètres de l’expérience.Rincer la lumière des deux extrémités iléales avec du sérum physiologique à 0,9 %. Après avoir localisé le mésentère sur le côté des deux extrémités iléales, aligner les mésentères aux deux extrémités du tissu excisé et utiliser un point de suture 8-0 pour réunir les extrémités. Suturer le côté controlatéral de l'iléon afin de maintenir l'anastomose iléale de manière naturelle, puis suturer les côtés supérieur et inférieur entre les deux points de suture initiaux afin de joindre complètement les deux extrémités iléales.Après avoir confirmé l'absence de fuite au niveau du site d'anastomose, remettre le caecum et l'intestin grêle à leurs emplacements anatomiques d'origine et utiliser une aiguille émoussée pour laver la zone chirurgicale avec du sérum physiologique chaud à 0,9 %. Fermer la couche musculaire abdominale à l’aide d’un point de suture 6-0 et rapprocher l’incision cutanée abdominale afin de refermer la peau et favoriser une cicatrisation optimale de la plaie. Ensuite, transférer la souris dans une unité de soins intensifs, dans une cage avec de la litière en papier, sur un tapis chauffant à température contrôlée, pour une récupération nocturne, en lui fournissant de la nourriture molle en plus de la nourriture régulière et de l’eau.Un jour après la chirurgie, peser l'animal entier. Ensuite, prélever le tube digestif ou tractus gastro-intestinal (GI) et peser le tissu intestinal. Transférer le tissu GI dans un tube conique de 15 millilitres et utiliser des ciseaux pour couper le tissu en segments courts.Ensuite, faire un culot des morceaux de tissu par centrifugation et transférer le surnageant contenant les sels biliaires dans un nouveau tube. Une analyse par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel quantitative révèle une expression abondante du facteur de croissance des fibroblastes 15, du transporteur apical de sodium et d'acides biliaires, de la protéine de liaison des acides biliaires de l'iléon et de l'ARNm de la protéine de transport des solutés organiques bêta au niveau de l'iléon, avec une expression faible à extrêmement faible au niveau du jéjunum et du reste de l'intestin. Les niveaux d'ARNm de l'adénomatous polyposis coli, mesurés comme témoin négatif, restent similaires dans tout l'intestin.Après 24 heures, l'intestin provenant de la chirurgie factice est normal, présentant une taille et une morphologie similaires à celles des animaux non opérés. Les volumes de liquide montrent une augmentation graduelle allant de 0 % à 90 % d’iléectomie, ce qui correspond au rapport significativement accru entre le poids du tube digestif et le poids corporel observé après une résection de 90 %. Le liquide digestif recueilli à partir des tubes digestifs postopératoires ainsi que le rapport entre le poids du liquide digestif et le poids du tube digestif montrent également une augmentation progressive après la résection.En outre, le dosage des acides biliaires confirme que la quantité d'acides biliaires détectée dans le surnageant augmente avec l'importance de la résection iléale, suggérant que la résection de 50 % de l'iléon constitue un modèle de modèle de résection iléale chez la souris plus pertinent en raison de ses effets indésirables relativement plus modérés. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 30 minutes si elle est effectuée correctement. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la microchirurgie pour explorer la biologie de l'iléon ainsi que le syndrome biliaire chez les petits animaux.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'identifier et d'ablationner correctement le segment iléal, ainsi que de réaliser une anastomose intestinale.

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