Dépistage des essais pour caractériser les nouveaux régulateurs endothéliales impliqués dans la réponse inflammatoire
15 septembre 2017
Endothélium vasculaire contrôle étroitement le recrutement des leucocytes. Extravasation de leucocyte inadéquate contribue aux maladies inflammatoires humaines. La recherche de nouveaux éléments régulateurs d’activation endothéliale est donc nécessaire de concevoir des traitements améliorés pour troubles inflammatoires. Nous décrivons ici une méthodologie globale afin de caractériser les nouveaux régulateurs endothéliales qui peuvent de modifier leucocytes traite au cours de l’inflammation.
L’objectif global de ce test de criblage est de caractériser de nouveaux régulateurs endothéliales impliqués dans la réponse inflammatoire d’intérêt pour concevoir de nouvelles stratégies thérapeutiques contre les troubles inflammatoires. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la pathologie, telles que la définition de nouveaux médicaments ciblant l’endothélium capables d’atténuer les maladies inflammatoires. Le principal avantage de ce protocole endothélial est qu’il décrit une technologie de dosage qui jette les bases de l’exploration de nouveaux mécanismes impliqués dans la régulation de la réponse inflammatoire. Maria Angeles Higueras, post-doc de notre laboratoire, et Sandra Herranz, technicienne de notre laboratoire, feront la démonstration de cette méthodologie. Pour commencer, cultivez les cellules MLEC-04 dans un milieu DMEM F12 complet complété par 10 % de FBS et Pen-Strep.Incuber les cellules dans un incubateur biologique à 37
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Aperçu
Cette étude porte sur le rôle de l'endothélium vasculaire dans la régulation du recrutement des leucocytes durant l'inflammation. Elle souligne l'importance de l'identification de nouveaux éléments régulateurs afin d'améliorer les thérapies contre les maladies inflammatoires.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Biologie vasculaire
- Inflammation
- Trafficking des leucocytes
Contexte
- L'endothélium vasculaire joue un rôle crucial dans le contrôle du recrutement des leucocytes.
- Une extravasation inadéquate des leucocytes est associée à diverses maladies inflammatoires.
- La compréhension de l'activation endothéliale peut conduire à de meilleures stratégies thérapeutiques.
- L'identification de nouveaux éléments régulateurs est essentielle pour améliorer les options de traitement.
Objectif de l'étude
- Caractériser de nouveaux régulateurs endothéliaux.
- Étudier leurs effets sur le trafic des leucocytes durant l'inflammation.
- Contribuer au développement de thérapies améliorées pour les troubles inflammatoires.
Méthodes utilisées
- Méthodologie complète pour la caractérisation des régulateurs endothéliaux.
- Approches expérimentales pour évaluer le trafic des leucocytes.
- Analyse des mécanismes d'activation endothéliale.
- Évaluation de cibles thérapeutiques potentielles.
Résultats principaux
- Identification de nouveaux éléments régulateurs dans les cellules endothéliales.
- Démonstration de leur impact sur l'extravasation des leucocytes.
- Éclairages sur les mécanismes d'activation endothéliale.
- Implications potentielles pour le développement thérapeutique dans les maladies inflammatoires.
Conclusions
- De nouveaux régulateurs endothéliaux jouent un rôle important dans le trafic des leucocytes.
- La compréhension de ces régulateurs peut orienter les stratégies thérapeutiques.
- Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour explorer leur potentiel complet dans le traitement de l'inflammation.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
La caractérisation efficace de nouveaux régulateurs endothéliaux est essentielle pour réduire les risques en phase précoce de découverte dans les portefeuilles de maladies inflammatoires. Les tests de criblage quantitatifs ciblant l'activation endothéliale et le recrutement des leucocytes offrent une confiance prédictive pour la validation des cibles et le tri mécanistique. Ces approches permettent aux équipes de biopharmacie de prioriser les cibles vasculaires possédant un potentiel translationnel pour les thérapeutiques des troubles inflammatoires.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmacie
Découverte précoce et validation de cibles
- Permet l'analyse de voies endothéliales centrales dans la régulation de l'inflammation.
- Permet la validation fonctionnelle de régulateurs candidats influant sur le recrutement des leucocytes.
- Facilite la détection mécanistique des risques en quantifiant l'expression des cytokines, chimioattractants et molécules d'adhérence.
- Fournit des données permettant une prédiction fiable dans le choix et le tri des cibles.
Élaboration de tests et criblage
- Établit des tests standardisés et quantitatifs utilisant la RT-qPCR, le western blot, la cytométrie en flux et les tests d'adhérence.
- Fournit des résultats reproductibles pour l'activation endothéliale et l'adhérence des leucocytes.
- Permet un criblage évolutif de nouveaux modulateurs affectant la signalisation inflammatoire.
- Prépare des systèmes biologiques validés pour l'évaluation de composés en aval.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne l'activation endothéliale in vitro avec les mécanismes inflammatoires pertinents pour la maladie.
- Permet une continuité allant de la découverte à la validation préclinique des cibles vasculaires.
- Éclaire les décisions d'avancement ajustées au risque pour les stratégies anti-inflammatoires.
- Offre des connaissances mécanistiques pour le développement de biomarqueurs translationnels.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ces tests de criblage placent la caractérisation des régulateurs endothéliaux à l'interface entre la phase de découverte précoce et la recherche préclinique, soutenant l'identification de candidats thérapeutiques et la continuité translationnelle dans les programmes de maladies inflammatoires.
- Biologie de la découverte : Quantifie la réponse endothéliale aux stimuli inflammatoires, précisant l'implication des voies et permettant une dé-risquebiologique.
- Écrantage : Fournit des tests standardisés et reproductibles pour évaluer les régulateurs et composés candidats.
- Analytique : Génère des données quantitatives sur l'expression des cytokines, chimioquines et molécules d'adhésion afin de comparer les conditions expérimentales.
- Recherche translationnelle : Relie les résultats in vitro aux mécanismes pertinents pour les maladies et aux stratégies de biomarqueurs.
- Réutilisation en entreprise : Offre une plateforme réutilisable pour les efforts continus de découverte et de validation de cibles vasculaires.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Augmente la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la validation des cibles.
- Valeur opérationnelle : Fournit des protocoles standardisés, évolutifs et reproductibles pour le criblage endothélial.
- Valeur stratégique : Améliore les décisions d'aller/arrêt et l'efficacité du capital en se concentrant sur des cibles vasculaires validées.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation et un développement adaptés au risque des candidats anti-inflammatoires.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en biologie endothéliale et dans les voies de signalisation inflammatoire.
- Suppose un accès à des infrastructures de RT-qPCR, de western blot, de cytométrie en flux et de tests d'adhésion cellulaire.
- Exige une standardisation interéquipes pour assurer la reproductibilité des tests et la comparabilité des données.
- Pourrait nécessiter des adaptations selon les modèles cellulaires endothéliaux ou les contextes inflammatoires.
- Dépend d'une analyse quantitative rigoureuse pour une interprétation fiable des résultats du criblage.
F.A.Q. sur la bio-industrie pharmaceutique
Chapters in this video
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Title
0:58
Endothelial Cell Culture and Tissue Culture Conditions
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Conclusion
9:59
Results: Activation Parameters of LPS-stimulated Endothelial Cells and Influence on Leukocyte Behavior
2:42
Evaluate Endothelial Factor Released on Leukocyte Activation by Adhesion Assays
4:12
Leukocyte Adhesion Assay
7:42
Test Endothelial Activation by Leukocyte Endothelium Co-adhesion Assay
