Un test d’Inhibition (HI) hémagglutination optimisé pour quantifier les titres d’anticorps spécifiques à la grippe

Les protocoles présentés décrivent comment effectuer un test d’inhibition hémagglutination afin de quantifier les titres d’anticorps spécifiques à la grippe d’échantillons de sérum des destinataires de vaccin contre la grippe. Le premier dosage détermine la concentration optimale d’antigène viral par hémagglutination. Le deuxième essai quantifie les titres d’anticorps spécifiques à la grippe par l’inhibition de l’hémagglutination.

L’objectif global de ce test d’inhibition de l’hémagglutination est de mesurer les titres d’anticorps contre des virus d’intérêt spécifiques. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la vaccinologie sur l’immunité et la protection médiées par le vaccin au sein de différentes populations et de divers groupes d’âge et de patients. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est précise et qu’elle permet de déterminer rapidement le titre de la présence d’anticorps neutralisants.

Bien que cette méthode puisse donner un aperçu des titres d’anticorps humains, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes, tels que les titres d’anticorps pour le sérum de souris, ainsi que les surnageants de culture. Commencez par étiqueter les plaques de microtitration à 96 puits avec les informations expérimentales appropriées. Ensuite, tournez la plaque dans l’orientation verticale et utilisez une pipette multicanaux pour ajouter 25 microlitres de PBS à chaque puits, à l’exception du premier puits de la rangée de titrage inférieure arrière.

Ajoutez 50 microlitres de la solution d’antigène d’intérêt fraîchement préparée dans le premier puits de la rangée de titrage arrière, puis ajoutez 25 microlitres d’échantillons de sérum traités RDE dans les premiers puits des dix rangées supérieures. Ajoutez 25 microlitres de l’antisérum approprié dans le premier puits de la 11e rangée en tant que contrôle positif. Ils transfèrent 25 microlitres du premier puits de chaque rangée à leurs puits successifs pour effectuer des dilutions en série en deux parties.

Pipette de haut en bas 10 à 15 fois pour chaque étape de dilution, en jetant les 25 derniers microlitres des derniers puits. Ensuite, ajoutez 25 microlitres de solution d’antigène dans chaque puits des rangées un à 11 et 25 microlitres de PBS uniquement dans chaque puits de la rangée de titrage arrière. Tapotez soigneusement l’assiette 10 fois des quatre côtés pour mélanger.

Couvrir ensuite l’assiette pendant 30 minutes à température ambiante. À la fin de l’incubation, ajoutez 50 microlitres de solution de globules rouges dans chaque puits et mélangez la plaque avec plus de tapotement. Ensuite, couvrez à nouveau la plaque et incubez les globules rouges selon l’espèce utilisée, comme indiqué dans le tableau.

Après avoir ajouté les globules rouges dans la plaque, respectez le temps d’incubation approprié pour le type de sang utilisé dans le test. Une incubation trop courte ou trop longue entraînera une mauvaise interprétation des résultats. À la fin de l’incubation, évaluez l’hémagglutination en inclinant la plaque à 90 degrés pendant 25 secondes et marquez les résultats pour chaque puits, pendant que la plaque est encore inclinée, sur un schéma imprimé de la plaque à 96 puits.

Dans cette expérience, la réponse anticorps induite par le vaccin a été évaluée chez 26 volontaires en bonne santé qui ont reçu un vaccin antigrippal trivalent inactivé contenant les grippes A/H1N1/California/2009, A/H3N2/Texas/2012 et B/Massachusetts/O2/2012 avant la saison grippale du 24 2015. Une réponse immunitaire croisée pour les souches virales A/H3N2/Switzerland/2013 et A/H3N2/Texas/2012 a été observée, avec des titres d’inhibition de l’hémagglutination de la moyenne géométrique significativement plus faibles et une séroprotection induite contre la grippe A/H3N2/Switzerland/2013 par rapport à la grippe A/H3N2/Texas/2012. Après la vaccination, les titres d’anticorps contre les deux souches ont augmenté, même si la souche A/H3N2/Switzerland/2013 n’était pas présente dans le vaccin.

L’hémagglutinine virale démontre un potentiel dépendant de l’espèce pour l’hémagglutination des érythrocytes. Il est intéressant de noter que le sang de cobaye ne s’hémagglutine pas correctement avec la grippe B et que le sang de dinde présente un potentiel d’hémagglutination avec des titres élevés et une faible réactivité croisée. Une fois maîtrisée, cette technique peut être complétée en trois heures si elle est exécutée correctement.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de sérifier avec RDE pour inactiver tout inhibiteur non spécifique et liaison non spécifique pendant l’hémagglutination du virus. Après cette procédure, d’autres méthodes comme l’ELISA peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur le rôle des immunoglobulines spécifiques aux agents pathogènes. Après sa mise au point, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’immunologie virale pour approfondir notre compréhension de l’immunité liée au vaccin chez les patients en bonne santé et immunodéprimés de différents groupes d’âge.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer un test d’inhibition de l’hémagglutination pour quantifier les titres d’anticorps spécifiques de la souche grippale à grande échelle. N’oubliez pas que travailler avec des antigènes viraux, du sang animal et des échantillons de sérum humain peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que le travail dans un laboratoire BSL2 doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.