July 25th, 2017
בחנו שיטת ציטולוגית צינלית על ידי דגימה של צינור החצוצרה ישירות כריתה שלאחר הניתוח ככלי של סרטן השחלות איתור מוקדם. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאסוף תאים צינור החצוצרות מן הדגימות כירורגית קיבל.
המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לכוון את אפיתל החצוצרות הדגימה מדגימת כריתת השחלות של סלפינגו. לזיהוי מאפיינים ציטולוגיים ציטולוגיים של חצוצרות המאפשרים הבחנה של רקמה שפירה ממצבים ממאירים או טרום ממאירים. שיטה ציטולוגית זו תעזור לענות על כמה שאלות מפתח בתחום האונקולוגיה הגינקולוגית בנוגע לגילוי מוקדם של סרטן השחלות והחצוצרות.
היתרון בטכניקה זו הוא שהיא דורשת דגימה ישירה של תאי החצוצרה. יתרון נוסף של טכניקה זו הוא שמדובר בשיטה ישירה ופשוטה. בעתיד, זה עשוי להיות מיושם במהלך בדיקה לפרוסקופית לסרטן השחלות או החצוצרות בנשים שנמצאות בסיכון גבוה למחלות אלה.
הדגמה חזותית של שיטת האיסוף חשובה מכיוון ששלבי האיסוף יכולים להיות קשים ללמידה. אנו רוצים לוודא שיש הפרעה מינימלית לאפיתל החצוצרות מכיוון שהאבחנה ההיסטולוגית של החצוצרה חשובה בסופו של דבר, מה שישפיע על הניהול הקליני. מדגים הליך זה הוא ד"ר הווארד צ'ן, שכיום מתמחה בפתולוגיה בשנה הרביעית שלנו באוניברסיטת אריזונה.
מיד לאחר קבלת הרקמה, ודא כי הרחם, החצוצרות הדו-צדדיות והשחלות הדו-צדדיות שלמים. בעזרת מלקחיים קטנים, הכנס בזהירות את מברשת הציטו ללומן החצוצרה דרך הקצה וסובב לאט את המברשת בכיוון השעון. העברת המברשת לתוך הצינור, דרך אזורי האינפונדיבולרי והאמפולה.
כאשר המברשת מגיעה לאיסטמוס, התחל לאט לסובב את המברשת נגד כיוון השעון תוך משיכת המברשת חזרה מהחצוצרה. לאחר מכן, סובב וסובב את המברשת המצופה בתאי החצוצרה בתמיסה משמרת טרייה שהוכנה 10 פעמים. לאחר מכן מכסים היטב את בקבוקון הדגימה ומסמנים אותו עם פרטי המטופל והרוחביות של הדגימה.
לאחר מכן ניתן לאחסן את התאים בארבע מעלות צלזיוס למשך עד שישה חודשים. לפני צביעת התאים, טען את בקבוקון הדגימה למעבד אוטומטי להכנת שקופיות. כאשר השקופיות מוכנות, טבלו את הדגימות באתנול 95%, 10 פעמים למשך שנייה אחת לכל טבילה.
לאחר מכן 10 טבילות במים למשך שנייה אחת לכל טבילה. לאחר מכן, טבלו את המגלשות בהמטוקסילין למשך 10 עד 60 שניות, ולאחר מכן שטיפת אתנול מים שנייה. לאחר טבילת האתנול האחרונה, טבלו את השקופיות בתכלת אאוזין למשך דקה עד שלוש דקות.
ואחריו שטיפת אתנול מים נוספת. לאחר מכן טובלים את השקופיות בקסילן, עד שהדגימות מתבהרות. כדי להשיג ספינים של תאי החצוצרה שנקטפו, תחילה סמן שלוש שקופיות עבור כל דגימת תא עם המידע המתאים למטופל.
לאחר מכן, חבר פילטר ומשפך דגימה לכל שקופית, וגלול את תאי החצוצרות על ידי צנטריפוגה עליונה על הספסל. הסר כמחצית מהסופרנטנט והשהה מחדש את התאים עם פיפטינג עדין, ואז טען 200 מיקרוליטר של תרחיף התא הבודד לכל משפך דגימה וטען את מכלולי השקופיות לתוך הציטוצנטריפוגה. בתום הצנטריפוגה, נתק בזהירות את השקופיות מהמשפכים והמסננים וקבע את התאים הציטוספונים באתנול 95% למשך 30 שניות.
לצורך חיתוך וניתוח של הקצה המעוות של דגימת החצוצרה, יש לתקן תחילה את כל הדגימה למשך שעתיים עד ארבע שעות בפורמלין של 10%. לאחר מכן, השתמש במלקחיים קטנים ובמספריים כדי לנתק בזהירות את החצוצרות מהרחם באיסטמוס, אם קיימת הידבקות, השתמש במלקחיים ובמספריים כדי לנתח בזהירות את הקצה הפגום משטח השחלה. כרתו את קטע האינפונדיבולום והפימבריה בקצה הדיסטלי של סנטימטר עד שניים של החצוצרה וחתכו את האינפונדיבולום והפימבריה, לאורך במרווחים של שני מילימטרים.
הגש את כל קטעי האינפונדיבולום והפימבריה בסך הכל לבדיקה היסטולוגית. לאחר מכן חתכו את המצר והאמפולי, במרווחים של שלושה עד חמישה מילימטרים, והגישו ביחד את הדגימות בשלמותן. תמרון סיבוב המברשת מביא לדגימה נאותה של הדגימה וכתם ה-PAP המהיר הידני מספק רזולוציה טובה של הפרטים הגרעיניים והשקיפות הציטופלזמית.
שניהם חיוניים להערכה מדויקת של תאי הצינור. למרות שניתן להשיג תוצאות דומות על ידי ציטוצנטריפוגה, הליך צביעת ה-PAP המהיר מביא לרקע נקי יותר בסופו של דבר ורזולוציה חדה יותר בין הפרטים הגרעיניים בשקיפות הציטופלזמית. החץ המצביע על הריסים של האפיתל הריסי.
ניתן להשתמש בניתוח היסטולוגי של קטעי מקטע הפימבריה כדי לגשת למורפולוגיה של אוכלוסיות תאי המזכיר הקטנות והגדולות שאינן ריסניות. באזור האמפולה של אותו קטע ניתן להבחין בפמבריה דמוית אצבע, כמו גם הפרעה קלה במבנה הווילי. ניתן לקבוע את המראה הציטולוגי של ממאירות על ידי נוכחותם של אשכולות תלת מימדיים המורכבים מתאים עם גרעינים בולטים ואניזונוקלאוזיס.
ניתן להבחין גם בקבוצות תאים דמויות קרצינומה חמורה, כפי שמוצג בתוך המעגל. בתוך היריעות הזוויתיות של תאי אפיתל רגילים, כפי שמכוונים על ידי חצים. לאחר השליטה, ניתן להשלים הליך איסוף וצביעה זה תוך שעתיים אם מבוצע כראוי.
בזמן ניסיון הליך זה, חשוב להימנע מזיהום צולב עם רקמות אחרות שעלול לבלבל את התוצאות. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע ניתוח מולקולרי או אימונוהיסטוכימיה על התאים המזויפים, אם הממצאים הציטולוגיים אינם חד משמעיים. טכניקה זו מניחה את הבסיס ליישום עתידי בניתוחים לפרוסקופיים או זעיר פולשניים לבדיקת נשים בסיכון גבוה לסרטן השחלות והחצוצרות.
לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לך הבנה טובה כיצד לאסוף ולעבד אפיתל צינוריות מדגימות כריתת שחלות שנכרתו.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
המחקר הנוכחי מציג שיטה ציטולוגית חדשה לגילוי מוקדם של סרטן השחלה על ידי דגימת החצוצרה ישירות לאחר כריתה כירורגית. הפרוטוקול שואף להבדיל בין מצבים שפירים לבין מצבים ממאירים או טרום-ממאירים באמצעות ניתוח תאי החצוצרה.