Localisation des gènes des récepteurs odorants dans les antennes acridiennes par ARN In Situ Hybridation

L’objectif global de cette procédure est de localiser les gènes des récepteurs odorants exprimés de faible niveau ainsi que d’autres gènes dans les antennes des insectes à l’aide de sondes marquées à la digoxigénine ou à la biotine. Pour commencer cette procédure, sélectionnez les nouveaux criquets adultes en mue qui sont actifs et ont des antennes intactes, puis coupez les antennes en morceaux de deux à trois millimètres à l’aide de rasoirs stériles. Ensuite, appliquez le composé OCT sur un support de microtome congelé et placez les échantillons sur le composé horizontalement.

Transférez le support dans le microtome de congélation à moins 24 degrés Celsius pour équilibrer jusqu’à ce que le composé gèle. Ensuite, sortez le support et recouvrez les échantillons d’un peu de composé. Transférez à nouveau le support dans le microtome de congélation à moins 24 degrés Celsius pendant au moins 10 minutes, puis divisez les échantillons congelés en tranches de 12 micromètres d’épaisseur.