Évaluation de la déficience de la mémoire spatiale dans un modèle de souris de lésions cérébrales traumatiques à l'aide d'un labyrinthe radial de la marche d'eau

L’objectif global de ce protocole Radial Water Tread Maze est de tester la mémoire spatiale dans un modèle murin de lésion cérébrale traumatique en utilisant une tâche cognitive centrée sur la souris qui ne nécessite pas de nager. Cette méthode peut être particulièrement utile pour tester la cognition dans des modèles murins, où les déficits moteurs et/ou un manque de motivation rendent les protocoles de test cognitif basés sur la natation tels que le labyrinthe d’eau Morris peu pratiques. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu des différences de groupe et de la cognition dans un modèle d’impact cortical contrôlé de lésions cérébrales traumatiques chez la souris, elle peut également être utile pour mesurer la cognition chez des modèles de souris âgées et transgéniques qui sont connus pour avoir de mauvais résultats dans les tests basés sur la natation.

Tous les jours de test, effectuez les étapes préparatoires suivantes. Tout d’abord, laissez les souris s’acclimater à la salle d’essai, pendant qu’elles sont dans leur cage domestique pendant au moins 30 minutes. Le labyrinthe rond comporte des repères visuels le long des murs intérieurs.

La boîte d’évacuation mobile positionnée à l’un des neuf trous de sortie différents. Pendant que les souris s’acclimatent, désinfectez les sorties et la boîte à l’aide d’un spray à 70 % d’éthanol. Ensuite, remplissez le labyrinthe avec environ un pouce d’eau froide.

Il est très important de maintenir la température de l’eau constante entre les essais. Mesurez donc avec précision et ajustez si nécessaire. Maintenant, positionnez la boîte d’évacuation sur l’un des neuf trous de sortie.

Utiliser une source de chaleur pour maintenir la boîte au chaud, idéalement à l’aide d’un coussin chauffant. Fermez également la boîte à l’abri de la lumière. La boîte d’évacuation doit toujours être sombre, chaude et relativement inodore.

La source lumineuse est également susceptible d’être un indice, alors ne changez pas de position entre les essais. Retirez doucement la souris de test de sa cage par la queue et placez-la au centre de l’appareil. Ensuite, commencez immédiatement à chronométrer le temps qu’il faut à la souris pour trouver la sortie.

Si une souris grimpe dans un trou de fin et ne rentre pas spontanément dans le labyrinthe après 20 secondes, n’arrêtez pas l’essai. Au lieu de cela, guidez la souris au centre du labyrinthe à la main et laissez-la terminer l’essai. Si, au bout de trois minutes, la souris n’est pas sortie du labyrinthe, notez l’essai comme un échec et notez le temps comme trois minutes.

Ensuite, à la main, guidez soigneusement l’animal le long du chemin le plus droit vers la sortie. Une fois dans la boîte d’échappement, laissez la souris y rester pendant une minute. Ensuite, transférez-le dans sa cage d’origine pendant que le labyrinthe se réinitialise.

Entre les essais, désinfectez soigneusement la boîte d’évacuation et les sorties avec un spray d’éthanol à 70 % pour éviter que la souris n’utilise de vieux repères d’usine pour localiser la bonne voie d’évacuation. Cela peut être fait assez rapidement. Maintenant, répétez l’essai sur la même souris deux fois de plus pour un total de trois essais consécutifs.

Chaque jour de test se compose de trois essais par souris. Ni plus, ni moins. En plus de désinfecter, videz le labyrinthe et rafraîchissez l’eau entre les tests de différentes souris.

Assurez-vous de maintenir la température de l’eau entre 12 et 14 degrés Celsius. Utilisez des récipients de glace ou d’eau chaude plus froide pour ajuster la température de l’eau du robinet dans cette plage. Entre les jours de test, il est important de s’assurer que les repères visuels dans le labyrinthe et dans l’espace entourant le labyrinthe restent cohérents.

Un régime de test complet comprend cinq jours de test consécutifs, tous effectués de la même manière. Le cinquième jour est considéré comme la mesure de la rétention de la mémoire. À condition qu’aucun test ne soit effectué entre le sixième et le 11e jour, un test le 12e jour peut être utilisé pour mesurer la mémoire à long terme.

Le labyrinthe d’eau radiale a été utilisé pour étudier les déficits de mémoire spatiale en fonction des blessures chez des souris recevant soit une lésion cérébrale traumatique induite par un impact cortical contrôlé, soit une blessure simulée. La chirurgie TCC est décrite en détail dans le protocole textuel et dans un article de JoVE de Romin, Gao et Chen de 2014. En bref, la blessure a été générée à l’aide d’un impact cortical entraîné par un solénoïde avec une pointe convexe de trois millimètres.

Les simulacres ont été opérés, mais impactés par l’appareil. 35 jours après l’opération, le régime de test décrit a été effectué. Toutes les souris ont réussi le test des critères de désir de s’échapper du labyrinthe.

Tous ont donc été inclus dans l’analyse. Les résultats montrent une nette différence entre les souris TBI et les témoins simulés. La latence d’évasion était significativement plus longue pour les souris blessées le premier jour de l’entraînement et les deux jours de test de mémoire.

Ainsi, le TCC décrit a affecté la capacité d’apprentissage de l’animal. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer correctement des tests de cognition à l’aide d’un test de cognition spatiale spécifique à la souris. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de 15 minutes par animal si elle est bien exécutée.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que le positionnement des repères visuels et la température de l’eau doivent rester cohérents dans tous les essais.