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DOI: 10.3791/56011-v
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This article presents an optimized mRNA interactome capture protocol for isolating and identifying mRNA-binding proteins from Arabidopsis thaliana leaf mesophyll protoplasts. The method utilizes in vivo UV crosslinking to analyze the mRNA-bound proteome in a physiological context.
Ici, nous présentons un protocole de capture interactif appliqué aux protoplastes de mésophylle de la feuille d' Arabidopsis thaliana . Cette méthode repose de manière critique sur la réticulation UV in vivo et permet l'isolement et l'identification des protéines de liaison de l'ARNm de la plante à partir d'un environnement physiologique.
L’objectif global de cette capture optimisée de l’interactome de l’ARNm est d’isoler et d’identifier un protéome lié à l’ARNm à partir de cellules végétales. Cette méthode est appliquée aux protoplastes du mésophile des feuilles d’arabidopsis thaliana, un type de cellule utilisé comme outil polyvalent dans divers essais cellulaires. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des implants de régulation génique post-transcriptionnelle, telles que la découverte et la compréhension du rôle des messagers végétaux des protéines de liaison à l’ARN.
Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet d’isoler et d’identifier un messager végétal sur un protéome lié directement à partir de l’environnement physiologique. Ainsi, cette méthode peut fournir un aperçu de la protéine liée à l’ARN messager des protoplastes de mésophile de la feuille d’aribidopsis. Il peut également être appliqué à d’autres systèmes comme les protoplastes ou les tissus d’autres plantes.
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