Maintenir les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia

L’objectif général de ce protocole est de décrire le maintien des moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia. Ces moustiques sont relâchés dans le monde entier pour supprimer la transmission de la dengue et d’autres virus. Notre protocole d’élevage des moustiques Aedes aegypti peut être utilisé par tous les chercheurs intéressés à utiliser les moustiques pour des expériences ou des programmes de contrôle des maladies.

Cette méthode peut également être utilisée pour l’élevage de moustiques génétiquement modifiés dans le cadre de programmes de contrôle des populations de moustiques, y compris ceux qui impliquent la libération d’insectes stériles. Les principes de cette approche peuvent également être appliqués à l’élevage d’autres espèces de vecteurs de maladies. Pour ce protocole, logez les moustiques à environ 26 degrés Celsius et à 50 à 70 % d’humidité relative avec une photopériode équatoriale.

S’ils sont élevés à des températures plus élevées, les infections à Wolbachia pourraient être perdues, alors ne surchauffez pas les colonies. Maintenir environ 500 moustiques par population pour minimiser la consanguinité. L’utilisation de ce protocole avec une nutrition adéquate produira des générations de 28 jours.

Commencez avec des œufs sur un substrat. Plongez-les dans des plateaux contenant trois litres d’eau avec environ 300 milligrammes de nourriture pour poissons et quelques grains de levure active et sèche pour provoquer l’éclosion. Un jour après l’éclosion, utilisez une pipette en verre pour transférer environ 500 larves dans des plateaux contenant quatre litres d’eau et de la nourriture fraîche pour poissons.

Vérifiez les plateaux tous les jours pour vous assurer que les larves ont suffisamment de nourriture. Ajoutez environ 600 milligrammes de nourriture pour poissons tous les deux jours pour maintenir un approvisionnement alimentaire optimal. Une suralimentation peut entraîner une opacification de l’eau et donc la mort, alors remplacez l’eau au besoin.

Si la nutrition et les températures sont maintenues correctement, les larves se nymphoseront cinq à sept jours après l’éclosion. Et les adultes émergeront environ deux jours plus tard. Sept jours après l’éclosion, versez tout le contenu du plateau à travers un maillage fin.

Conservez une partie de l’eau filtrée dans un récipient de cinq litres pour la position des ovules dans la même colonie. Ensuite, inversez le maillage et plongez-le dans un récipient en plastique avec 200 millilitres d’eau pour transférer les nymphes. Ajoutez la quantité appropriée de nourriture pour nourrir les larves restantes.

Maintenant, installez une cage d’émergence adulte avec deux tasses de solution de saccharose à 10 % et deux tasses de boules de coton humides pour éviter la dessiccation. Si les pupes n’ont pas besoin d’être triées par sexe, transférez le récipient de pupes dans une cage et laissez le couvercle légèrement entrouvert pour que les adultes puissent s’échapper et entrer dans la cage. Une fois que tous les adultes ont émergé, retirez le récipient de la cage.

Ne choisissez pas contre les développeurs lents en retirant le conteneur plus tôt. Pour collecter des moustiques vierges, transférez les pupes des plateaux d’élevage des larves dans des récipients en plastique avec 200 millilitres d’eau toutes les 24 heures. Triez les sexes par taille.

Les femelles sont plus grandes que les mâles. Et transférez-les dans des conteneurs séparés. Gardez les couvercles fermés sur les récipients afin que les adultes ne s’échappent pas.

Avant de relâcher les adultes émergents dans leurs cages, confirmez leur sexe. Les adultes dont la sexualité n’est pas correctement sexuée doivent être retirés à l’aide d’un aspirateur dans les 24 heures suivant l’émergence alors qu’ils sont encore sexuellement immatures. Pour que les colonies infectées par Wolbachia restent similaires à une population naturelle, croisez les femelles infectées du laboratoire avec des mâles sauvages non infectés.

Faites mûrir les mâles et les femelles séparément pendant deux jours. Et puis aspirez les femelles dans la cage des mâles. Idéalement, établissez un sex-ratio de un pour un avec une population d’environ 500 personnes.

Procédez au croisement avec les moustiques pendant au moins trois générations consécutives. Au moins trois jours après l’émergence des derniers adultes, et avant qu’ils n’aient deux semaines, nourrissez la colonie avec du sang avant qu’une mortalité excessive des femelles ne se produise. Ceci est particulièrement important pour les moustiques atteints d’infections à Wolbachia qui raccourcissent la durée de vie.

Les sucriers doivent être retirés la veille. Donnez aux moustiques l’accès à un avant-bras et portez un gant en latex pour protéger la main et le poignet. La plupart des femelles doivent être nourries dans les cinq minutes.

Mais cela peut prendre jusqu’à 15 minutes. Une fois que toutes les femelles sont visiblement engorgées, retirez l’avant-bras et replacez les sucriers. Deux jours après l’alimentation sanguine, placez deux gobelets en plastique remplis d’eau et tapissés d’une bande de papier de verre partiellement immergée dans la cage.

Ensuite, retirez toute autre source d’eau à l’exception de l’eau sucrée. Les femelles pondent sur le papier de verre juste au-dessus de la ligne de flottaison à partir de trois jours après l’alimentation sanguine. Ramassez et remplacez le papier de verre tous les jours jusqu’à ce qu’il n’y ait plus d’œufs pondus.

Si plus d’œufs sont nécessaires, l’alimentation sanguine peut être effectuée à intervalles hebdomadaires. Séchez partiellement le papier de verre avec environ 30 secondes de tamponnage doux à l’aide d’une serviette en papier. Ne délogez pas les œufs.

Ensuite, enveloppez les bandes dans une feuille d’essuie-tout sec et placez-la dans un sac en plastique refermable. Trois jours après la collecte, inspectez les œufs au microscope à dissection. Si le papier de verre est trop humide, les œufs peuvent éclore avant d’être immergés dans l’eau.

Mais s’il a séché trop durement, les œufs peuvent s’effondrer. Les œufs sont prêts à éclore trois jours après la collecte. Immergez tous les œufs de chaque colonie dans le même récipient d’eau pour produire un grand nombre d’individus pour la génération suivante.

En règle générale, les œufs peuvent être conservés dans un récipient scellé avec une humidité supérieure à 80 % à 20 degrés Celsius pendant plusieurs mois. Mais certaines infections à Wolbachia réduisent la viabilité, de sorte que ces œufs doivent éclore dans la semaine suivant la collecte. Lorsque les conteneurs de larves recevaient 0,25 milligramme de nourriture par larve par jour ou moins, le temps de développement augmentait chez les deux sexes et était moins synchrone que dans les conteneurs contenant plus de nourriture.

Si une nourriture adéquate n’est pas fournie pendant toute la durée du développement, cela aura un impact négatif sur le maintien de la colonie. Les individus à développement lent peuvent être sélectionnés contre et l’alimentation sanguine peut être retardée. Il peut même y avoir une augmentation de la mortalité des adultes avant la reproduction.

Une nutrition sous-optimale a affecté la morphologie des adultes. La longueur des ailes a considérablement diminué et a été corrélée aux niveaux de nutrition. Des tailles corporelles uniformes sont importantes pour les comparaisons expérimentales, car la taille corporelle est positivement associée à la fécondité, et les gros moustiques devraient être plus en forme dans des conditions de terrain.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de maintenir les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia. Le respect de notre protocole devrait garantir la production de moustiques sains et d’une qualité constante. Ces moustiques peuvent ensuite être relâchés sur le terrain pour des programmes de contrôle des maladies ou être utilisés pour des expériences.

Lorsque vous travaillez avec des moustiques infectés par Wolbachia, il est important de surveiller leur statut d’infection pour s’assurer que les colonies maintiennent leurs infections à Wolbachia.