Name: À l’aide de Laser Doppler d’imagerie et de surveillance pour analyser la Microcirculation de la moelle épinière chez le Rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Découvrez l'imagerie et la surveillance Laser Doppler pour analyser la microcirculation de la moelle épinière chez le rat. Cette méthode permet de mesurer les flux sanguins locaux et la saturation en oxygène après traumatisme.

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Les auteurs n’ont aucun remerciements.

Les protocoles animales impliquant des animaux de laboratoire suivi les lignes directrices établies par le National Institutes of Health (NIH) et ont été approuvés par le Comité utilisation de Capital Medical University et animalier.
Les procédures d’introduction de SCI et mesure BF de la moelle épinière à l’aide de laser Doppler matériel décrite ci-dessous ont été utilisés dans une étude publiée1.
1. préparation de l’intervention chirurgicale
<ol><li>Préparer le pentobarbital sodium solution à 3 % (p/v) dans une solution saline et d’administrer à la dose de 35 mg/kg. ATTENTION : le pentobarbital sodium est une substance contrôlée. Dossiers détaillés devraient être conservés et solutions conservées dans un endroit sûr et verrouillé.</li>
	<li>Stérilisation de l’équipement et préparer le domaine de la chirurgie.<ol>
<li>Nettoyer le matériel de chirurgie avec les étapes suivantes : 75 % éthanol, nettoyage, puis à l’autoclave à 121 ° C pendant 30 min, puis sécher au four à 60 ° C pendant la nuit. Stériliser le domaine de la chirurgie avec 75 % d’alcool.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. préparation du Rat pour la chirurgie
<ol><li>Anesthésier le rat avec une injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique (35 mg/kg). L’ensemble de la procédure devrait prendre 30 à 40 min, y compris la chirurgie, des mesures de BF et sutures.</li>
	<li>Raser la région dorsale du rat du bas du dos jusqu’au cou. Les cheveux doivent être coupée aussi court que possible. Placez le rat sur un 40 ° C chauffage pad pour maintenir une température corporelle constante.</li>
</ol>3. laminectomie et la commotion cérébrale à la moelle épinière
Remarque : Pour effectuer une laminectomie uniquement pour le groupe fictif, suivez les étapes 3.1 à 3.6.
<ol><li>Positionner la face dorsale animale vers le haut. Stérilisez la partie rasée avec de l’iode, suivie de 75 % d’alcool à l’aide de boules de coton stérile. Faire une incision de la peau (4 cm) avec le scalpel sur le site de laminectomie couvrant les vertèbres thoraciques T7 à T11.</li>
	<li>Couper les muscles attenants sur les deux côtés du T8 à T10 pour exposer les apophyses épineuses, les limbes et les articulations facettaires.</li>
	<li>Utiliser le scalpel pour faire des incisions que déconnecter la jonction entre T10 et T11. Plus exposer la jonction par soigneusement en disséquant la couche musculaire pour exposer l’OS.</li>
	<li>Utilisez les ciseaux pour effacer plus musculaire de la lamina et autour du pédicule avec petite Cisaille de ferblantier. Ceci ouvrira un petit espace entre les vertèbres à T10 et T11 (Figure 1 a). Lentement et délicatement insérer une pince hémostatique dans cette lacune et briser le pédicule (Figure 1 b). Assurez-vous que la courbure de la pince est toujours positionnée latéralement, éloigner le cordon. Répétez de l’autre côté.</li>
	<li>Exposer la moelle épinière (Figure 1) et soulevez lentement et se détachent du limbe. Être sûr de ne pas laisser des fragments d’OS libre ou en escalier.</li>
	<li>Répétez le processus pour enlever plus loin les limbes T9 et T8.</li>
	<li>Déplacer l’animal à la table du matériel de frappe et la paire de pinces Adson attaché à la table permet de stabiliser la colonne vertébrale de l’animal par serrage sur l’apophyse épineuse de T7 et T11, puis ajustez la pince pour redresser la colonne vertébrale (Figure 1).</li>
	<li>Mettre l’animal sous l’élément de frappe, viser la tige de la grève au centre de la moelle épinière exposée et abaissez la tige à 3-5 mm de la surface de la moelle épinière.</li>
	<li>Définir les paramètres d’impact tels que la force d’impact (160 KD) et temps de pause (1 s)<ol>
<li>Induire la SCI en cliquant sur le bouton « Commencer l’expérience » sur l’interface du logiciel, puis cliquez sur « Oui » sur l’interface suivante pour démarrer l’effet automatiquement. Après l’impact, le logiciel affiche les données réelles de l’impact en regard des paramètres de réglage, vérifier les données pour s’assurer que c’était près du point de réglage (Figure 1E). NOTE : Un signe typique pour la réussite de l’expérience a été une courte période de mouvement de swing et de la branche queue involontaires après l’impact. Des stimuli à la queue pour vérifier la réflexion de la branche pourraient aussi être faits. Cependant, locomotrice évaluation tels que l’échelle locomotrice22,Basso, Beattie et Bresnahan (BBB)23 est nécessaire pour déterminer l’efficacité des lésions induites.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. laser Doppler analyse
<ol><li>Voir la Table des matières pour les détails du scanner laser Doppler utilisé dans cette étude. Pour analyser l’exposés de la moelle épinière, placer la face dorsale du rat vers le haut sur un fond noir, non réfléchissante.</li>
	<li>
Mis en place les paramètres de numérisation : Ouvrez le logiciel de numérisation, cliquez sur « Mesure » pour accéder à l’interface d’utilisateur graphique mesure et cliquez sur le bouton « Configuration du Scanner » pour ouvrir l’interface de configuration de numérisation. Pour analyser les petites zones comme dans cette expérience, sélectionnez « Haute résolution » sous le « Scan dimensions et Options d’affichage » pour un mode de balayage fin avec une résolution supérieure (256 × 256 points couvrant 4 × 10 cm2) (Figure 2 a). Cliquez sur l’option « Image Scan » pour vérifier les périmètres de balayage (Figure 2 b).</li>
	<li>Cliquez sur l’option « Vidéo et Distance » pour vérifier l’image vidéo en direct. Placez le scanner 10-13 cm au-dessus de la fenêtre chirurgicale et déplacer l’arrière-plan avec l’animal au centre de la moelle épinière exposée sur la fenêtre de numérisation (Figure 2).</li>
	<li>Utilisez la fonction « auto lointain » à bien régler la hauteur de balayage, Notez que la hauteur de la numérisation doit être cohérente dans l’ensemble de toutes les mesures dans l’expérience de la Figure 2.</li>
	<li>Utilisez une couverture antireflets avec une fenêtre pour exposer uniquement la zone chirurgicale pour réduire au minimum le fond et marquer la direction de l’animal.</li>
	<li>Cliquez sur le « Scan de répéter », le nombre d’analyses (nous utilisons 8 scans de répéter dans ce cas) puis cliquez sur « OK » pour ouvrir l’interface de numérisation répéter. Cliquez sur le bouton Démarrer pour lancer la numérisation et l’ensemble du processus prendra environ 3-4 min (Figure 2D).</li>
</ol>5. laser Doppler surveillance
<ol><li>Nous avons utilisé un moniteur scanner avec VP3 émoussé sonde de livraison fin aiguille moniteur BF et SO2 au fil du temps. Fixer la sonde Doppler Laser perpendiculairement à un instrument stéréotaxique à mettre en place les équipements de surveillance.</li>
	<li>Conditionnés le rat sur la face dorsale de l’appareil stéréotaxique, sous-tendent l’animal avec un petit morceau de mousse de styrol lorsque cela est nécessaire au niveau de la moelle épinière exposée.</li>
	<li>Descendre la sonde jusqu'à la moelle épinière au moniteur BF. Remarque : L’étape 5.3 est cruciale pour la reproductibilité de la mesure, car les lectures de données sont sensibles à la pression appliquée à la pince, redoublez de prudence est donc nécessaire pour ne plus - ou moins - position la sonde.<ol>
<li>Examiner l’incision et supprimer n’importe quel liquide excessive ou sang à l’aide d’un tampon de coton stérile.</li>
		<li>Axes X et Y de l’appareil permet de localiser la sonde à 2 mm rostrale jusqu’au centre de la moelle épinière exposée ou lésion point et éviter de la veine centrale.</li>
		<li>Utilisez l’axe Z pour abaisser doucement la sonde au niveau juste toucher la surface de la moelle épinière. La sonde doit toucher la surface de la moelle épinière, mais pas tellement lâche pour permettre toute lumière vive s’échapper du côté de l’interlocuteur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Enregistrement des données
	<ol>
<li>Ouvrez le logiciel d’acquisition de données, cliquez sur le bouton « nouvelle expérience » pour ouvrir l’interface de configuration. Sous l’option « General », vérifiez la configuration système et cliquez sur « Suivant » (Figure 3 a), dans la configuration de l’affichage, sélectionnez la chaîne BF et SO2 et cliquez sur « Suivant » (Figure 3 b).</li>
		<li>Informations sur les fichiers d’entrée, puis cliquez sur « Suivant » (Figure 3) pour accéder à l’interface d’enregistrement de données, cliquez sur le bouton triangle vert pour commencer l’enregistrement des données de la sonde (Figure 3D).</li>
		<li>Une fois que le signal est stables, enregistrements des données pendant 8 min consécutives. Ensuite, soulevez la sonde et retirer l’animal appareil stéréotaxique de suture de l’incision et mettre l’animal en soins postopératoires.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. les sutures et les soins après l’opération
<ol><li>Suture de l’incision : insérer une aiguille dans le muscle des deux côtés de l’incision. Tirer le fil à travers, rassemblant les tissus, couvrant ainsi la moelle épinière exposée sur le site de limbes supprimés. En utilisant le porte-aiguille, écouler l’ensemble, forme trois noeuds de square et couper le fil comme à proximité des noeuds que possible.</li>
	<li>Suture de la peau avec 3-4 square noeuds à l’instar de suture de l’incision, puis couper le filet environ 1 cm les noeuds.</li>
	<li>Posez le rat sur son flanc dans sa cage, évitant tout contact entre le site de la chirurgie et le fond de la cage. Des cages doivent être placés sur les coussins chauffants.</li>
	<li>Surveiller l’animal jusqu'à ce qu’il se réveille de l’anesthésie pour n’assurer aucun saignement après la chirurgie et que les sutures restent fermés.</li>
	<li>Par voie sous-cutanée, injecter Benzyl pénicilline Sodium en rat pendant 3 jours après la chirurgie, 120 mg/kg / jour. Par voie intrapéritonéale injecter buprénorphine (0,05 mg/kg) immédiatement après la chirurgie et chaque post-chirurgie 6 heures pendant 1 nuit.</li>
	<li>Pour s’assurer que les animaux ont accès à suffisamment de nourriture et d’eau, fit des bouteilles d’eau avec becs étendus et mettre la nourriture à proximité de l’animal dans la cage. NOTE : Nous avons procédé à échelle de notation BBB pour évaluer la fonction locomotrice du membre postérieur de la lésion après 24h animale d’exclure les animaux avec un score de BBB au-dessus de 0, donc veiller à ce que l’animal a été paralysé par la blessure induite.</li>
	<li>Après la chirurgie, fournir le vide manuelle de vessie en appliquant doucement la pression sur l’abdomen deux fois par jour, si nécessaire.</li>
</ol>

<ol><li>Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meliorating+microcirculatory+with+melatonin+in+rat+model+of+spinal+cord+injury+using+laser+Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Meliorating microcirculatory with melatonin in rat model of spinal cord injury using laser Doppler flowmetry.</a> Neuroreport. 27 (17), 1248-1255 (2016).</li>
<li>Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+prevents+blood+vessel+loss+and+neurological+impairment+induced+by+spinal+cord+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Spinal+Cord+Med%22%5BJournal%5D)">Melatonin prevents blood vessel loss and neurological impairment induced by spinal cord injury in rats.</a> J Spinal Cord Med. , 1-8 (2016).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescuing+vasculature+with+intravenous+angiopoietin-1+and+alpha+v+beta+3+integrin+peptide+is+protective+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Rescuing vasculature with intravenous angiopoietin-1 and alpha v beta 3 integrin peptide is protective after spinal cord injury.</a> Brain. 133 (Pt 4), 1026-1042 (2010).</li>
<li>Gerzanich, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+expression+of+Trpm4+initiates+secondary+hemorrhage+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">De novo expression of Trpm4 initiates secondary hemorrhage in spinal cord injury.</a> Nat Med. 15 (2), 185-191 (2009).</li>
<li>Phillips, J. P., Cibert-Goton, V., Langford, R. M., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+assessment+in+rat+spinal+cord+tissue+using+photoplethysmography+and+laser+Doppler+flux+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Perfusion assessment in rat spinal cord tissue using photoplethysmography and laser Doppler flux measurements.</a> Journal of Biomedical Optics. 18 (3), 037005(2013).</li>
<li>Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+injury+changes+the+disposition+of+some%2C+but+not+all+drugs+given+intravenously%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously.</a> Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).</li>
<li>Brown, A., Nabel, A., Oh, W., Etlinger, J. D., Zeman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+imaging+of+spinal+cord+contusion%3A+injury-induced+blockade+and+partial+reversal+by+%CE%B22-agonist+treatment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery-Spine%22%5BJournal%5D)">Perfusion imaging of spinal cord contusion: injury-induced blockade and partial reversal by β2-agonist treatment in rats.</a> Journal of Neurosurgery-Spine. 20 (2), 164-171 (2014).</li>
<li>Olive, J. L., McCully, K. K., Dudley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+response+in+individuals+with+incomplete+spinal+cord+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Blood flow response in individuals with incomplete spinal cord injuries.</a> Spinal Cord. 40 (12), 639-645 (2002).</li>
<li>Yamada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+blood+flow+and+pathophysiological+changes+after+transient+spinal+cord+ischemia+in+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Spinal cord blood flow and pathophysiological changes after transient spinal cord ischemia in cats.</a> Neurosurgery. 42 (3), 626-634 (1998).</li>
<li>Gordeeva, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Pathology+of+Ischemia%2FReperfusion+Injury+of+Rat+Small+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Vascular Pathology of Ischemia/Reperfusion Injury of Rat Small Intestine.</a> Cells Tissues Organs. , (2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+treatment+restores+islet+microvascular+vasomotion+function+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin treatment restores islet microvascular vasomotion function in diabetic mice.</a> J Diabetes. , (2016).</li>
<li>Drain, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDrain%2C+L+%22The+laser+Doppler+technique%22">The laser Doppler technique</a>. , Wiley, USA. (1980).</li>
<li>Rajan, V., Varghese, B., van Leeuwen, T. G., Steenbergen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+methodological+developments+in+laser+Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Review of methodological developments in laser Doppler flowmetry.</a> Lasers Med Sci. 24 (2), 269-283 (2009).</li>
<li>Dohare, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroprotective+properties+of+the+superoxide+dismutase+mimetic+tempol+correlate+with+its+ability+to+reduce+pathological+glutamate+release+in+a+rodent+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">The neuroprotective properties of the superoxide dismutase mimetic tempol correlate with its ability to reduce pathological glutamate release in a rodent model of stroke.</a> Free Radic Biol Med. 77, 168-182 (2014).</li>
<li>Bai, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-treatment+with+LCZ696%2C+an+orally+active+angiotensin+receptor+neprilysin+inhibitor%2C+prevents+ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pre-treatment with LCZ696, an orally active angiotensin receptor neprilysin inhibitor, prevents ischemic brain damage.</a> Eur J Pharmacol. 762, 293-298 (2015).</li>
<li>Vertiz-Hernandez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-arginine+reverses+alterations+in+drug+disposition+induced+by+spinal+cord+injury+by+increasing+hepatic+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">L-arginine reverses alterations in drug disposition induced by spinal cord injury by increasing hepatic blood flow.</a> J Neurotrauma. 24 (12), 1855-1862 (2007).</li>
<li>Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+injury+changes+the+disposition+of+some%2C+but+not+all+drugs+given+intravenously%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously.</a> Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+pressure+response+of+skin+blood+flowmotions+in+anesthetized+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury.</a> Microvasc Res. 78 (1), 20-24 (2009).</li>
<li>Boyle, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+laser+Doppler+is+a+useful+technique+to+assess+foot+cutaneous+perfusion+during+femoral+artery+cannulation%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Scanning laser Doppler is a useful technique to assess foot cutaneous perfusion during femoral artery cannulation.</a> Critical Care. 3 (4), 95-100 (1999).</li>
<li>Emmanuel, A. V., Chung, E. A. L., Kamm, M. A., Middleton, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+gut-specific+autonomic+testing+and+bowel+dysfunction+in+spinal+cord+injury+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Relationship between gut-specific autonomic testing and bowel dysfunction in spinal cord injury patients.</a> Spinal Cord. 47 (8), 623-627 (2009).</li>
<li>Sheu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+cilostazol+and+clopidogrel+attenuates+rat+critical+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Combination of cilostazol and clopidogrel attenuates rat critical limb ischemia.</a> J Transl Med. 10, 164(2012).</li>
<li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graded+histological+and+locomotor+outcomes+after+spinal+cord+contusion+using+the+NYU+weight-drop+device+versus+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection.</a> Experimental Neurology. 139 (2), 244-256 (1996).</li>
<li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Sensitive+and+Reliable+Locomotor+Rating-Scale+for+Open-Field+Testing+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A Sensitive and Reliable Locomotor Rating-Scale for Open-Field Testing in Rats.</a> Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).</li>
<li>Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+motion--a+disturbance+in+the+laser-Doppler+blood+flow+signal%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Health+Care%22%5BJournal%5D)">Tissue motion--a disturbance in the laser-Doppler blood flow signal?</a> Technol Health Care. 7 (2-3), 185-192 (1999).</li>
<li>Tenland, T., Salerud, E. G., Nilsson, G. E., Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+variations+in+human+skin+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microcirc+Clin+Exp%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal variations in human skin blood flow.</a> Int J Microcirc Clin Exp. 2 (2), 81-90 (1983).</li>
<li>Kernick, D. P., Tooke, J. E., Shore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+zero+signal+in+laser+Doppler+fluximetry+-+origins+and+practical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">The biological zero signal in laser Doppler fluximetry - origins and practical implications.</a> Pflugers Arch. 437 (4), 624-631 (1999).</li>
<li>Rudolph, A. M., Heymann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+circulation+of+the+fetus+in+utero.+Methods+for+studying+distribution+of+blood+flow%2C+cardiac+output+and+organ+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">The circulation of the fetus in utero. Methods for studying distribution of blood flow, cardiac output and organ blood flow.</a> Circ Res. 21 (2), 163-184 (1967).</li>
<li>Dubory, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrast+Enhanced+Ultrasound+Imaging+for+Assessment+of+Spinal+Cord+Blood+Flow+in+Experimental+Spinal+Cord+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Jove-Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Contrast Enhanced Ultrasound Imaging for Assessment of Spinal Cord Blood Flow in Experimental Spinal Cord Injury.</a> Jove-Journal of Visualized Experiments. (99), e52536(2015).</li>
<li>Kuliga, K. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Microvascular+Blood+Flow+and+Oxygenation+Measured+Simultaneously+in+Human+Skin%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Microvascular Blood Flow and Oxygenation Measured Simultaneously in Human Skin.</a> Microcirculation. 21 (6), 562-573 (2014).</li>
<li>Li, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+pressure+response+of+skin+blood+flowmotions+in+anesthetized+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury.</a> Microvascular Research. 78 (1), 20-24 (2009).</li>
<li>Muck-Weymann, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory-dependent+laser-Doppler+flux+motion+in+different+skin+areas+and+its+meaning+to+autonomic+nervous+control+of+the+vessels+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Respiratory-dependent laser-Doppler flux motion in different skin areas and its meaning to autonomic nervous control of the vessels of the skin.</a> Microvasc Res. 52 (1), 69-78 (1996).</li>
<li>Stefanovska, A., Bracic, M., Kvernmo, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wavelet+analysis+of+oscillations+in+the+peripheral+blood+circulation+measured+by+laser+Doppler+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Ieee+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Wavelet analysis of oscillations in the peripheral blood circulation measured by laser Doppler technique.</a> Ieee Transactions on Biomedical Engineering. 46 (10), 1230-1239 (1999).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Quelques détails devraient être remarqué lors de l’exécution de ce protocole. Tout d’abord, le processus de l’anesthésie et la chirurgie doit être réalisée aussi rapidement et élégamment que possible afin de minimiser le stress introduit à l’animal. Pour réduire les perturbations aux résultats, garder l’animal dans un état relativement stable et paisible. Deuxièmement, plus d’attention devrait être accordée aux saignement lors de la mesure à l’aide de laser Doppler matériel, étant donné que le sang pourrait potentielleme...

Les tissus de la moelle épinière sont fortement vascularisé et extrêmement sensible à l’hypoxie induite par la moelle épinière (SCI). Nos études précédentes ont montré que la circulation sanguine de la moelle épinière a été sensiblement diminuée après une commotion cérébrale lésion1,2, qui pourrait être liée au déficit de la fonction motrice. Des études récentes ont montré que l’intégrité des vaisseaux sanguins suite SCI est bien corrélée avec l’amélioration des fonctions motrices sensorielles3. Il a été signalé que meilleure vascularisation pourrait sauver la substance blanche, indirectement menant à l’amélioration de la fonction4. Par conséquent, le maintien de la perfusion après lésion de la moelle épinière semble être d’une importance primordiale pour la préservation de la viabilité et la fonctionnalité.
Les effets des différents traitements sur la perfusion après la SCI ont étudié de nombreux chercheurs en utilisant une variété de techniques dans des modèles expérimentaux de SCI5,6,7. Laser Doppler, comme une technique bien établie, a été sans aucun doute une méthode utile pour quantifier la perfusion dans plusieurs études animales et humaines8,9,10,11. La technique est basée sur la mesure de l' effet Doppler12 induite par le déplacement des globules rouges à la lumière éclairante. Depuis la commercialisation de la technique dans les années 1980, beaucoup de progrès a été déposée dans la technologie laser, fibre optique et traitement du signal pour la perfusion de mesure par laser Doppler instruments13, lequel LDF à confectionner une technologie fiable.
Dans la présente étude, les deux méthodes de laser Doppler mesure ont été appliquées pour évaluer le débit sanguin (BF) dans les moelles épinières de rats incapacitants. En raison du caractère non invasif de la technologie et sa configuration simple, notre protocole fournit une méthode sensible, rapide et fiable pour les mesures de la BF de la moelle épinière. Plus important encore, cette méthode permet une étude longitudinale de BF SCI post choc sans sacrifice animal à chaque instant.
En raison de la capacité d’évaluer la BF du tissu et des changements rapides de perfusion durant la stimulation, il est possible d’appliquer ce protocole pour évaluer cérébrale de14,BF15 ainsi que de mesurer d’autres tissus tels que foie16, 17,18,de peau19et de l’intestin20. Dans un modèle de rat de transitoire occlusion de l’artère cérébrale moyenne, les lectures de Doppler laser ont été utilisés afin d’assurer une réduction appropriée du taux à des niveaux qui sont attendus dans la pénombre ischémique14BF. Chez les rats ayant subi l’induction (CLI) de l’ischémie critique limb, laser à balayage Doppler a été appliqué pour observer le membre postérieur BF avant et après l’intervention de la CLI et différentes époques après traitement21. En outre, la biodisponibilité et la clairance métabolique de certains médicaments dépendaient BF hépatique, qui a été détecté par le LDF16. Par conséquent, LDF pourrait être largement utilisé dans un modèle expérimental, pharmacodynamiques et pharmacocinétiques evaluation.

<table><tbody><tr><td>Scanner de ligne laser Doppler</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDLS2</td><td></td></tr><tr><td>Moniteur Doppler laser</td><td>Moor Instruments</td><td>moorSonde VMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>pour moniteur</td><td>Moor Instruments</td><td>VP3</td><td>Sonde à extrémité d’aiguille émoussée</td></tr><tr><td>Impactor</td><td>Precision Systems and Instrumentation</td><td>IH-0400</td><td></td></tr><tr><td>Phénobarbital sodique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Buprénorphine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-908</td><td></td></tr><tr><td>Seringue</td><td>Becton Dickinson Medica (s) Pte.Ltd 300841</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles de suture chirurgicale avec fil</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd</td><td></td><td>18T0329 (numéro de lot) /4-0</td></tr><tr><td>Usine d’instruments d’opération de scalpel de Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td></td><td>J11030 4 #</td><td></td></tr> <tr><td>Lame de scalpel</td><td>Opération usine d’instruments de Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J12130 20#</td><td></td></tr><tr><td>Pince ophtalmique</td><td>Opération usine d’instruments de Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>JD1040</td><td></td></tr><tr><td>Pince hémostatique</td><td>Usine d’instruments de fonctionnement de Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J31050</td><td></td></tr><tr><td>Benzyl pénicilline sodique</td><td>North China Pharmaceutical Co., Ltd</td><td></td><td>F6072116 (numéro de lot)</td></tr><tr><td>75 % d’alcool</td><td>Dezhou Anjie Gaoke produits de désinfection Co., Ltd</td><td></td><td>150421R (numéro de lot)</td></tr><tr><td>Iode</td><td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd</td><td></td><td>20170102 (numéro de lot)</td></tr><tr><td></td><td>Rat Laboratory Animal Center, The Academy of Millitery Medical Sciences</td><td></td><td>Sprague-Dawly (souche de rat)</td></tr></tbody></table>

À l’aide de laser doppler d’imagerie et de surveillance pour analyser la microcirculation de la moelle épinière chez le rat

Using Laser Doppler Imaging and Monitoring to Analyze Spinal Cord Microcirculation in Rat

Débitmétrie Doppler laser (LDF) est une méthode non invasive pour mesure de débit (BF) de sang, ce qui le rend préférable pour la mesure des altérations microcirculatoires de la moelle épinière. Dans cet article, notre objectif était d’utiliser l’imagerie Laser Doppler et surveillance pour analyser le changement de BF après une lésion de la moelle épinière. L’imageur Doppler laser tant la sonde/moniteur ont été utilisées pour obtenir chaque lecture. Les données du LDPI fournies une distribution locale de BF, qui donnait une vue d’ensemble de perfusion autour du site de la lésion et rend accessible aux fins d’analyse comparative des BF entre les différents sites. En mesurant intensément la zone Poussée sur une période de temps, une sonde combinée a été utilisée pour mesurer simultanément la saturation BF et l’oxygène de la moelle épinière, montrant la perfusion globale de la moelle épinière et l’apport d’oxygène. LDF lui-même a quelques limitations, telles que les flux relative, sensibilité au mouvement et zéro biologique du signal. Cependant, la technologie a été appliquée dans l’étude clinique et expérimentale en raison de sa configuration simple et rapide mesure de BF.

LDPI servait à mesurer la BF dans la moelle épinière, qui a été quantifiée le long de l’axe rostral caudal de la moelle épinière en extrayant les profils linéaires (Figure 4). Figure 5 a et 5 b Figure représentent respectivement l’imagerie de flux de la moelle épinière du groupe SCI et groupe fictif. Figure 5 et Figure 5 représentent le BF a...

Ici nous présentons une combinaison de laser Doppler l’imagerie de perfusion (LDPI) et laser Doppler perfusion surveillance (LDPM) pour mesurer la colonne vertébrale du cordon débits sanguins locaux et la saturation en oxygène (SO2), ainsi qu’une procédure normalisée pour l’introduction de la moelle épinière traumatisme chez le rat.

À l’aide de Laser Doppler d’imagerie et de surveillance pour analyser la Microcirculation de la moelle épinière chez le Rat

Laser Doppler flowmetry (LDF) is a noninvasive method for blood flow (BF) measurement, which makes it preferable for measuring microcirculatory ...

L'objectif général de cette procédure est de présenter une combinaison d'imagerie par effet Doppler laser et de surveillance pour mesurer les débits sanguins locaux et la saturation en oxygène de la moelle épinière, ainsi qu'une procédure standardisée pour induire un traumatisme médullaire chez le rat. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la microcirculation, telles que la redistribution du flux sanguin au fil du temps et son impact sur la zone environnante après une lésion de la moelle épinière. Le principal avantage de cette technique réside dans l'utilisation conjointe de l'imagerie par effet Doppler laser et d'un dispositif de surveillance, ce qui permet d'obtenir rapidement des données sur la distribution locale du flux sanguin ainsi que sur ses variations au cours du temps, autorisant ainsi une analyse plus poussée du flux sanguin dans la zone problématique.Commencez par vérifier chez le rat anesthésié l'absence de réaction à une pincée des orteils afin de confirmer un niveau chirurgical d'anesthésie. Rasez la région dorsale du rat, de la partie inférieure du dos jusqu'au cou. Ensuite, placez le rat en position dorsale sur un tapis chauf

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Cette vidéo montre le placement d’une sonde à aiguille laser Doppler dans la moelle épinière d’un modèle porcin. Cela aide à la quantification continue de l’apport sanguin à la moelle épinière, une évaluation importante dans les lésions de la moelle épinière.

Insertion d’une sonde à aiguille laser Doppler : une technique de quantification en temps réel du flux sanguin dans la moelle épinière dans un modèle porcin

Surveillance perfusion cérébrale a été démontré pour améliorer la précision dans ischémiques modèles d'AVC. Les difficultés techniques limitent souvent l'utilisation de cet outil essentiel pour la recherche vasculaire cérébral. Dans cette vidéo, un système optimisé est indiqué pour obtenir un contrôle simple ou multi-sites hémodynamique pendant intraluminale occlusion de l'artère cérébrale moyenne chez le rat.

Système optimisé pour la surveillance de la perfusion cérébrale chez le rat des maladies du intraluminale occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne

Contrast Enhanced Ultrasound imaging est un outil in vivo fiable pour quantifier le flux sanguin de la moelle épinière dans un modèle expérimental de lésion de la moelle épinière chez le rat. Cet article contient un protocole complet pour l’application de cette technique en association avec un modèle de contusion de lésion de la moelle épinière thoracique.

Contraste échographie amélioré pour l&#39;évaluation de la moelle épinière flux sanguin dans la partie expérimentale Traumatisme médullaire

Ce manuscrit décrit les protocoles de microscopie vidéo in vitro pour l’évaluation de la fonction vasculaire dans les artères de résistance cérébral de rat. Le manuscrit décrit également les techniques pour l’évaluation des microvaisseaux densité avec la perfusion lectine et tissu fluorescent étiquetée à l’aide de débitmétrie Doppler Laser.

Évaluation des mécanismes de contrôle vasculaire utilisant la microscopie vidéo des artères de résistance isolée de Rats

Cet article démontre l'utilisation de la fluidité de Doppler de laser pour évaluer la capacité de la circulation cérébrale pour autoréguler son flux sanguin pendant des réductions de la tension artérielle.

Évaluation de l'autorégulation du flux sanguin cérébral dans le Rat à l'aide de laser Doppler Flowmetry

La microcirculation de la moelle épinière joue un rôle central dans les lésions de la moelle épinière. La plupart des méthodes ne permettent pas d’évaluer en temps réel la microcirculation de la moelle épinière, ce qui est essentiel pour le développement de thérapies ciblées par microcirculation. Ici, nous proposons un protocole utilisant des sondes Laser-Doppler-Flow Needle dans un grand modèle animal d’ischémie/reperfusion.

Évaluation en temps réel de la microperfusion de la moelle épinière dans un modèle porcin d’ischémie/reperfusion

La perturbation de la barrière hémato-épinière (BSCB) peut être obtenue avec succès grâce à l’administration intraveineuse de microbulles et à l’application d’ultrasons focalisés de faible intensité (LIFU). Ce protocole détaille l’ouverture de la BSCB à l’aide de LIFU dans un modèle de rongeur, y compris la configuration de l’équipement, l’injection de microbulles, la localisation de la cible et la visualisation de la perturbation de la BSCB.

Perturbation de la barrière hémato-épinière à l’aide d’ultrasons focalisés de faible intensité dans un modèle de rat

Pour étudier la régulation du flux sanguin cérébral in vivo, les méthodes pharmacologiques traditionnelles sont invasives, endommageant souvent le crâne, la dure-mère et les leptoméninges. Dans ce travail, nous avons développé une technique mini-invasive qui combine l’injection intracisternale magna (ICM) guidée par nano-injecteur avec l’imagerie de contraste laser speckle, préservant ainsi l’intégrité du crâne et des leptoméninges.

Essai d’imagerie par nano-injection de citerne magna appariée et de contraste de chatoiement laser pour étudier la régulation du flux sanguin cérébral in vivo

Un système d’imagerie laser à contraste de tapets a été utilisé pour surveiller les changements du flux sanguin microvasculaire rénal lors de l’ischémie rénale unilatérale après la résection du rein droit chez la souris.

Perfusion microvasculaire surveillée par imagerie laser à contraste de speckles lors d’une lésion ischémie-rénale de réperfusion chez la souris

Cet article décrit comment enregistrer l'activité amygdale avec la magnétoencéphalographie (MEG). En outre cet article va décrire comment mener trace conditionnement de la peur sans conscience, une tâche qui active l'amygdale. Il portera sur 3 thèmes: 1) Conception d'un paradigme de conditionnement de trace à l'aide de masquage en arrière pour manipuler la conscience. 2) l'activité cérébrale d'enregistrement au cours de la tâche en utilisant la magnétoencéphalographie. 3) En utilisant...

Comment détecter amygdale activité avec magnétoencéphalographie utilisant l&#39;imagerie par Source

Découvrez l'imagerie et la surveillance Laser Doppler pour analyser la microcirculation de la moelle épinière chez le rat. Cette méthode permet de mesurer les flux sanguins locaux et la saturation en oxygène après traumatisme.

À l’aide de Laser Doppler d’imagerie et de surveillance pour analyser la Microcirculation de la moelle épinière chez le Rat

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