Évaluation des voies urinaires Junction Obstruction défauts par Injection de colorant de bleu de méthylène

L’objectif global de cette procédure est de déterminer les obstructions des jonctions des voies urinaires par injection de colorant méthylène dans les reins. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du développement des reins et des voies urinaires inférieures, telles que la connexion urétale de la vessie. Le principal avantage de cette technique est qu’elle fournit une méthode simple pour visualiser la structure des voies urinaires dans le pire des cas, le développement de la masse permettant l’analyse du développement des voies urinaires.

Pour commencer l’expérience, mesurez 0,1 gramme de poudre de bleu de méthylène. Dissoudre le bleu de méthylène dans 10 millilitres de solution saline tamponnée au phosphate ou PBS et agiter le mélange. Ensuite, filtrez la solution de bleu de méthylène de 10 milligrammes par millilitre avec un filtre à seringue pour éliminer le colmatage lors de l’injection.

Ensuite, assemblez un ensemble de veines du cuir chevelu stérile avec une seringue jetable de trois millilitres et remplissez la seringue avec trois millilitres de solution de bleu de méthylène filtrée. Nettoyez les ciseaux et les pinces de dissection avec de l’éthanol à 70 %. Pour prélever des embryons périnataux à E18.5 ou E19.5, euthanasiez d’abord des souris enceintes en utilisant l’inhalation de dioxyde de carbone.

Effectuez ensuite une luxation cervicale selon les directives du NIH. Vaporisez ensuite de l’éthanol à 70 % sur la surface abdominale ventrale de l’animal. Ensuite, à l’aide des ciseaux de dissection stériles et des pinces, ouvrez la cavité abdominale par voie ventrale.

Soulevez tout l’utérus et séparez-le du corps au bout des cornes utérines. Rincez ensuite tout l’utérus avec 1x PBS dans une boîte de Pétri. Coupez l’utérus segmentairement avec des ciseaux à dissection et retirez la décidue placentaire avec une pince à dissection pour exposer les embryons et les sacs vitellins.

Retirez d’abord le sac vitellin, puis retirez la membrane amniotique à l’aide d’une pince à dissection pour libérer les embryons périnataux. Décapitez l’embryon avec des ciseaux de dissection. Fixez l’embryon avec sa face ventrale vers le haut sur un microscope de dissection équipé d’une caméra numérique pour l’imagerie.

Recueillir sa queue pour le génotypage. À l’aide d’une pince, déchirez soigneusement la peau pour ouvrir la cavité abdominale de l’embryon. Ensuite, retirez soigneusement les organes et les tissus en excès tels que le foie, l’estomac et les intestins à l’aide d’une pince en les coupant ou en les tirant pour exposer les reins, les uretères et la vessie qui sont situés dorsalement.

Absorbez l’excès de sang de l’embryon disséqué à l’aide de compresses de gaze stériles, puis poursuivez l’injection de colorant. Éliminer les bulles dans l’aiguille et le tube en expulsant la solution de bleu de méthylène de la pointe de l’aiguille par pression hydrostatique. Soulevez la seringue contenant la solution de colorant au-dessus du niveau de la pointe de l’aiguille pour commencer l’écoulement.

Et puis abaissez la seringue pour arrêter l’écoulement. Ensuite, insérez l’aiguille dans le bassinet du rein près de l’uretère proximal en prenant soin de ne pas la déranger une fois placée. Effectuez l’injection de colorant dans un rein pour déterminer son obstruction des voies urinaires.

Après l’insertion d’une aiguille dans le bassinet du rein, le succès de ce test : une aiguille doit être insérée dans le bassinet du rein vers l’uretère, sans passer par le rein ni vers le vaisseau sanguin. Soulevez la seringue d’environ 20 centimètres pour fournir une pression hydrostatique et laissez couler 15 à 16 microlitres de solution de colorant. Ensuite, surveillez la couleur bleue du colorant en commençant d’abord dans le bassinet du rein, puis dans la longueur de l’uretère et enfin dans la lumière de la vessie.

Placez la seringue vers le bas pour arrêter l’écoulement du colorant et retirez l’aiguille du rein. Notez l’hydronéphrose du rein, de l’hydrouretère et la position finale de la solution de colorant dans un cahier de laboratoire. Enfin, effectuez l’injection du rein controlatéral et laissez le colorant s’écouler pendant 20 secondes au total.

Prenez des images du rein, de l’uretère et de la vessie tracées avec une solution de colorant à l’aide de la caméra et du programme d’imagerie reliés à un stéréomicroscope. Après l’injection dans un rein, le colorant bleu de méthylène s’écoule du bassinet du rein à travers l’uretère et dans la vessie, ce qui donne une couleur bleue visible dans l’uretère et la lumière de la vessie. Un bleu plus fort apparaît dans la lumière de la vessie en raison d’un flux plus long environ 20 secondes après l’injection des deux reins avec un colorant, indiquant l’absence d’obstruction de la jonction des voies urinaires dans le deuxième système urinaire.

Lors de l’injection d’un hydro-uretère anormalement dilaté, la position finale de la solution de colorant n’est pas claire. Et l’obstruction de la jonction urétéro-vésicale ou UVJO ne peut pas être vérifiée malgré l’absence de colorant dans la lumière de la vessie, car l’hydro-uretère anormal a été endommagé au milieu. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de calculer le sac de colorant des embryons périnataux pour obtenir un système urinaire intact.

Et retirez les bulles pour ne pas bloquer l’écoulement du colorant.