Name: Personnalisés de microéchantillons de peptides pour la détection des allo-anticorps HLA dans la Transplantation d’organes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Découvrez une méthode de microéchantillons de peptides personnalisés pour détecter les allo-anticorps HLA dans la transplantation d'organes. Cette technique améliore la compréhension des réponses immunitaires et du rejet.

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Nous remercions les Drs Shawn Li et Li Xing de Western University au Canada pour leur aimable collaboration avec SPOT array production. Nous sommes reconnaissants aux membres du personnel, au cœur d’histocompatibilité et à la complète Transplant Center de l’Université Northwestern de fournir des services de l’échantillon. Ce travail a été en partie soutenu par le Conseil d’administration auxiliaire de Northwestern Memorial Hospital et par un fonds de démarrage Faculté fournies par la Northwestern University à J.J..

<ol><li>Bradshaw, R. A., Dunn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unambiguous+high+resolution+genotyping+of+human+leukocyte+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Unambiguous high resolution genotyping of human leukocyte antigens.</a> J Immunol Methods. , (2017).</li>
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<li>Gebel, H. M., Bray, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA+antibody+detection+with+solid+phase+assays%3A+great+expectations+or+expectations+too+great%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">HLA antibody detection with solid phase assays: great expectations or expectations too great?</a> Am J Transplant. 14 (9), 1964-1975 (2014).</li>
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<li>Duquesnoy, R. J., Marrari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLAMatchmaker-based+definition+of+structural+human+leukocyte+antigen+epitopes+detected+by+alloantibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">HLAMatchmaker-based definition of structural human leukocyte antigen epitopes detected by alloantibodies.</a> Curr Opin Organ Transplant. 14 (4), 403-409 (2009).</li>
<li>Wedel, J., Bruneau, S., Kochupurakkal, N., Boneschansker, L., Briscoe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+allograft+rejection%3A+a+fresh+look%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Chronic allograft rejection: a fresh look.</a> Curr Opin Organ Transplant. 20 (1), 13-20 (2015).</li>
<li>Rostaing, L. P., Malvezzi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA-Incompatible+Kidney+Transplantation--Worth+the+Risk%3F%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">HLA-Incompatible Kidney Transplantation--Worth the Risk?</a> N Engl J Med. 374 (10), 982-984 (2016).</li>
<li>Gebel, H. M., Bray, R. A., Nickerson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-transplant+assessment+of+donor-reactive%2C+HLA-specific+antibodies+in+renal+transplantation%3A+contraindication+vs.+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Pre-transplant assessment of donor-reactive, HLA-specific antibodies in renal transplantation: contraindication vs. risk.</a> Am J Transplant. 3 (12), 1488-1500 (2003).</li>
<li>Haas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+Banff+schema+for+diagnosis+of+antibody-mediated+rejection+in+renal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">An updated Banff schema for diagnosis of antibody-mediated rejection in renal allografts.</a> Curr Opin Organ Transplant. 19 (3), 315-322 (2014).</li>
<li>Cecka, J. M., Reed, E. F., Zachary, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA+high-resolution+typing+for+sensitized+patients%3A+a+solution+in+search+of+a+problem%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">HLA high-resolution typing for sensitized patients: a solution in search of a problem?</a> Am J Transplant. 15 (4), 855-856 (2015).</li>
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<li>Robinson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+IPD+and+IMGT%2FHLA+database%3A+allele+variant+databases%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The IPD and IMGT/HLA database: allele variant databases.</a> Nucleic Acids Res. 43, D423-D431 (2015).</li>
<li>Gabriel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA+typing+by+next-generation+sequencing+-+getting+closer+to+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Antigens%22%5BJournal%5D)">HLA typing by next-generation sequencing - getting closer to reality.</a> Tissue Antigens. 83 (2), 65-75 (2014).</li>
<li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Method+for+Anti-HLA+Antibody+Detection+Using+Personalized+Peptide+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Direct%22%5BJournal%5D)">A Novel Method for Anti-HLA Antibody Detection Using Personalized Peptide Arrays.</a> Transplant Direct. 2 (11), (2016).</li>
<li>Frank, R., Overwin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPOT+synthesis.+Epitope+analysis+with+arrays+of+synthetic+peptides+prepared+on+cellulose+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">SPOT synthesis. Epitope analysis with arrays of synthetic peptides prepared on cellulose membranes.</a> Methods Mol Biol. 66, 149-169 (1996).</li>
<li>Frank, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+SPOT-synthesis+technique.+Synthetic+peptide+arrays+on+membrane+supports--principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">The SPOT-synthesis technique. Synthetic peptide arrays on membrane supports--principles and applications.</a> J Immunol Methods. 267 (1), 13-26 (2002).</li>
<li>Amartely, H., Iosub-Amir, A., Friedler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+protein-protein+interaction+sites+using+peptide+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Identifying protein-protein interaction sites using peptide arrays.</a> J Vis Exp. (93), (2014).</li>
<li>Kudithipudi, S., Kusevic, D., Weirich, S., Jeltsch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+analysis+of+protein+lysine+methyltransferases+using+SPOT+peptide+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Specificity analysis of protein lysine methyltransferases using SPOT peptide arrays.</a> J Vis Exp. (93), e52203(2014).</li>
<li>Hilpert, K., Winkler, D. F., Hancock, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+arrays+on+cellulose+support%3A+SPOT+synthesis%2C+a+time+and+cost+efficient+method+for+synthesis+of+large+numbers+of+peptides+in+a+parallel+and+addressable+fashion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Peptide arrays on cellulose support: SPOT synthesis, a time and cost efficient method for synthesis of large numbers of peptides in a parallel and addressable fashion.</a> Nat Protoc. 2 (6), 1333-1349 (2007).</li>
<li>McBride, R., Head, S. R., Ordoukhanian, P., Law, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-Cost+Peptide+Microarrays+for+Mapping+Continuous+Antibody+Epitopes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-Cost Peptide Microarrays for Mapping Continuous Antibody Epitopes.</a> Methods Mol Biol. 1352, 67-83 (2016).</li>
<li>Li, S. S., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+peptide+array+to+identify+binding+motifs+and+interaction+networks+for+modular+domains%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Using peptide array to identify binding motifs and interaction networks for modular domains.</a> Methods Mol Biol. 570, 67-76 (2009).</li>
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<li>Duquesnoy, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+leukocyte+antigen+epitope+antigenicity+and+immunogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Human leukocyte antigen epitope antigenicity and immunogenicity.</a> Curr Opin Organ Transplant. 19 (4), 428-435 (2014).</li>
<li>Lavinder, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+the+constituent+human+serum+antibodies+elicited+by+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of the constituent human serum antibodies elicited by vaccination.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (6), 2259-2264 (2014).</li>
<li>Kloetzel, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+processing+by+the+proteasome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Antigen processing by the proteasome.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 2 (3), 179-187 (2001).</li>
<li>Filippone, E. J., Farber, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Humoral+Theory+of+Transplantation%3A+Epitope+Analysis+and+the+Pathogenicity+of+HLA+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">The Humoral Theory of Transplantation: Epitope Analysis and the Pathogenicity of HLA Antibodies.</a> J Immunol Res. 2016, 5197396(2016).</li>
<li>Claas, F. H., Witvliet, M. D., Duquesnoy, R. J., Persijn, G. G., Doxiadis, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acceptable+mismatch+program+as+a+fast+tool+for+highly+sensitized+patients+awaiting+a+cadaveric+kidney+transplantation%3A+short+waiting+time+and+excellent+graft+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The acceptable mismatch program as a fast tool for highly sensitized patients awaiting a cadaveric kidney transplantation: short waiting time and excellent graft outcome.</a> Transplantation. 78 (2), 190-193 (2004).</li>
</ol>

Aucun conflit d’intérêts ne déclarés.

La conception du tableau SPOT décrit ici est pour une étude expérimentale de la spécificité des alloanticorps dans la transplantation contre les antigènes HLA du donneur de l’organe. Contrairement à l’essai de SAB existante, largement utilisé en clinique, la méthode array et antigène a un avantage majeur dans sa conception flexible pouvant accueillir les séquences HLA vrais du donateur individuel. La nouvelle plateforme exploite le potentiel de la technologie de séquençage ADN essor rapide qui sera bientôt en mesure de p...

Thérapie de remplacement d’orgue qui est systématiquement menée à travers le monde a sauvé des millions de vies. Transplantation d’organes solides se produit dans environ 100 patients par million de personnes aux Etats-Unis chaque année, alors qu’un plus grand nombre encore sont sur listes d’attente pour recevoir des organes du donneur en raison d’une grave pénurie d’approvisionnement (selon les informations fournies par l’organe Approvisionnement et Transplantation Network - OPTN/UNOS : optn.transplant.hrsa.gov). Transplantation d’organe est fortement réglementée afin de réduire le gaspillage de l’orgue et de sauver des vies, mais les outils scientifiques utilisés pour informer de ces règlements sont limitées en termes d’efficacité. Par exemple, la communauté scientifique reconnaît pleinement les États fortement polymorphes de molécules HLA et précis tests génétiques d’ADN à l’aide de typage de haute résolution et axée sur la séquence tapant (SBT) ont été développés au cours des dernières années1, 2. Toutefois, les méthodes d’essai alloanticorps n’ont pas encore été en mesure de produire la grande variété des séquences individuelles de HLA comme sondes de l’antigène. Le test standard utilise de nos jours un panneau invariable de ~ 100 antigènes alléliques qui sont composent des variations courantes du HLA, A, B, C, DQ, DP et DR séquences dans les populations humaines3,4,5,6. Fréquemment, les séquences HLA du donneur réelles ne sont pas inclus dans le panneau de test, forçant transplantation médecins et chirurgiens d’inférer la réactivité de donateurs spécifique basée sur partagé similarités du donneur séquences réelles et correspondant de « normes » dans la test jeu7,8. Par conséquent, il est parfois difficile de faire une estimation fiable du risque de rejet issu des anticorps test résultats9,10,11,12. Donc, nouveau personnellement personnalisables tests pour allo-anticorps sont nécessaires d’urgence13,14.
Les gènes HLA encodent les récepteurs de (MHC) complexes majeur d’histocompatibilité qui ont une fonction essentielle dans la réponse immunitaire6. Les gènes HLA sont connus pour être les plus polymorphes gènes du génome humain6. En raison des progrès rapides dans l’ADN, séquençage des stratégies pour les gènes HLA, nouveaux variants alléliques (ou simplement appelés allèles) sont découverts à un taux explosif15,16. En mars 2017, 16 755 validés allèles avaient été déposés à la base de données IMGT/HLA (http://www.ebi.ac.uk/ipd/index.html), de laquelle 12 351 étaient de classe I et 4 404 ont été des groupes de classe II. En contraste, seulement un peu plus de 100 différents allèles sont représentés dans l’analyse standard single-antigène perles (SAB), qui est régulièrement utilisée pour détecter des allo-anticorps dans la transplantation d’organes. La méthode SAB est construite sur une plateforme Luminex cytométrie. Puisque le test utilise un ensemble invariable des antigènes, en dehors des variabilités de lots mineures dans la production, le test de l’antisérum peut être robuste normalisé selon les individus et les laboratoires5. Toutefois, ce test est incapable de capturer tous les allo-anticorps mis au point spécifiquement contre les allèles de donateurs, en particulier lorsque les séquences de donateurs sont absents de la SAB. Bien que la fabrication sur commande d’antigènes des donateurs basés sur des séquences vrais sont souhaitables, il reste des défis techniques à rationaliser la production nécessaire et au contrôle.
Nous avons récemment décrit une méthode alternative dans une étude de faisabilité de la transplantation rénale sujets17. La méthode utilisée antigènes peptidiques dans un format de tableau pour sonder pré et post transplantation sérums de sujets individuels. Chaque tableau a été personnalisé généré à l’aide de la tache synthèse méthode18,19,20,21,22,23 qui produit des antigènes peptidiques, chaque 15 acides aminés dans la longueur, entièrement fondé sur les allèles HLA du donneur organe respectives de A, B, C, DQA1, DQB1 et DRB1. Synthèse SPOT est exploitée sur une membrane de cellulose à l’aide de la norme Fmoc-chimie22 et peut produire des centaines de peptides personnalisés en parallèle avec un système robotique entièrement automatisé19,21. Le tableau de la membrane résiste à plusieurs cycles de décapage et reprobing cycles. Dans notre étude rétrospective17, nous avons détecté des changements dans l’antigène avec les antisérums de transplantation stockée recueillis dans une série chronologique (c.-à-d., avant et après la transplantation). Dans les présentes, nous décrivons le protocole technique pour le flux de travail y compris la baie conception, fabrication, analyse de palpage et résultat d’antisérum. La méthode est conçue pour la détection des allo-anticorps contre des épitopes linéaires spécifiques sur des molécules HLA transplantation des donateurs.

<table><tbody><tr><td>Réseau de peptides</td><td>INTAVIS Bioanalytical Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7170</td><td></td></tr><tr><td>Lait écrémé</td><td>Bio Rad Laboratories</td><td>1706404</td><td></td></tr><tr><td>TBST</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>10711454001</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-humaines de chèvre. HRP&nbsp ;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A18811</td><td></td></tr><tr><td>Clarity Western ECL</td><td>Substrate Bio Rad Laboratories</td><td>1705061</td><td></td></tr><tr><td>Restore Western Blot Stripping Buffer</td><td>Thermo Scientifics</td><td>21059</td><td></td></tr><tr><td>Système d’imagerie sur gel ChemiDoc</td><td>Bio Rad Laboratories</td><td>1708265&nbsp ;</td><td></td></tr></tbody></table>

personnalisés de microéchantillons de peptides pour la détection des allo-anticorps hla dans la transplantation d’organes

Personalized Peptide Arrays for Detection of HLA Alloantibodies in Organ Transplantation

Transplantation d’organes, la fonction et la longévité de la prothèse critique s’appuient sur le succès de contrôler la réactivité immunologique de rejet contre les antigènes des leucocytes humains (HLA). Histocompatibilité lignes directrices sont fondées sur des tests de laboratoire de l’immunité anti-HLA, qui présente en tant que la préexistant ou de novo généré anticorps HLA qui constituent un obstacle majeur de la transplantation. Les tests actuels sont construits sur une plate-forme unique-antigène perles (SAB) en utilisant un ensemble fixe d’antigènes HLA ~ 100 présélectionnés pour sonder les sérums de transplantation. Cependant, chez les humains, il existe une variété beaucoup plus grande de types HLA, avec aucun deux individus autres que les jumeaux identiques qui peuvent partager la même combinaison de séquences HLA. Alors que les technologies de pointe pour le typage HLA et le séquençage direct peuvent capturer précisément toute inadéquation dans la séquence d’ADN entre un donneur et HLA du receveur, le dosage de la SAB, en raison de sa variété limitée dans la représentation de la séquence, est incapable de détecter avec précision allo-anticorps spécifiquement contre le donneur HLA des incompatibilités. Nous avons cherché à développer une méthode complémentaire à l’aide d’une technologie différente pour détecter et caractériser les anticorps HLA anti-bailleurs de fonds sur une base personnalisée. L’outil de dépistage est un tableau personnalisé de peptide de séquences de donneur HLA-dérivées pour sonder post-transplantation sérums du receveur orgue pour évaluer le risque de rejet humoral. Sur un tableau unique pour une paire de donateur-bénéficiaire, jusqu'à 600 peptides uniques sont prises en fonction sur les séquences de protéines HLA du donneur, chaque peptide transportant au moins un résidu ne correspondent pas dans une séquence d’acides aminés 15. Dans nos expériences pilotes pour comparer les modèles d’antigène pour pré et post-transplantation sérums sur ces tableaux, nous avons pu détecter des signaux anti-HLA avec la résolution que nous a également permis d’identifier les épitopes immunitaires impliqués. Ces personnalisés tableaux antigène faire une détection à haute résolution de des épitopes spécifiques donneur HLA dans la transplantation d’organes.

Dans l’étude originale en utilisant le tableau17de la méthode de dépistage, nous avons inscrit un total de 5 sujets de greffe de rein. Nous avons obtenu le HLA typage des résultats de notre cohorte et de leurs bailleurs de fonds respectifs. Leurs antécédents médicaux et les titres d’anticorps allélique de CCS essais étaient également à notre disposition. Dans notre étude pilote de ces 5 patients, nous avons mis au point deux méthodes différentes : un tableau standa...

Incompatibilités dans les séquences antigen (HLA) leucocytaire humain entre donneur d’organe et de paires de destinataire sont la principale cause de rejet humoral dans la transplantation d’organes. Nous présentons ici l’utilisation de tableaux d’antigène personnalisés qui sont basées sur les séquences de HLA de donateurs individuels pour sonder des allo-anticorps d’anti-donneurs HLA chez des receveurs d’organes.

Personnalisés de microéchantillons de peptides pour la détection des allo-anticorps HLA dans la Transplantation d’organes

In organ transplantation, the function and longevity of the graft critically rely on the success of controlling immunological rejection reactivity against ...

L'objectif général de cette méthode personnalisée de puces à ADN pour la détection des alloanticorps est de définir les épitopes de l'antigène leucocytaire humain, ou HLA, dans la transplantation d'organes. Cette méthode permet de répondre à des questions essentielles dans le domaine de la transplantation d'organes concernant les épitopes immunitaires spécifiques impliqués dans le rejet de greffe. Le principal avantage de cette technique est qu'elle est entièrement personnalisable, permettant l'intégration de jeux d'antigènes personnalisés qui peuvent refléter les séquences HLA de donneurs d'organes individuels.La technique permet de détecter spécifiquement les épitopes HLA pour les alloanticorps. Pour extraire les séquences à partir de la base de données du projet International Immunogenetics Project sur les antigènes leucocytaires humains, ouvrez le formulaire de requête d'allèles dans la page des combinaisons d'allèles ambigus, puis saisissez le nom du premier allèle du sujet dans la zone « Search for ». Cliquez sur « Search for Alleles Now » et repérez le nom de l'allèle correspondant affiché à l'écran.Cliquez sur Allèle et copiez-collez la séquence protéique dans un document t

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Une méthode nouvelle DC indépendante pour l'induction et l'expansion des cellules T spécifiques d'antigènes est décrite. HLA A2-Ig des cellules à base Antigène artificielle Présentation (AAPC) sont chargés avec des peptides HLA-A2 restreint efficacement l'expansion des CTL spécificité antigénique divers. Cette technologie offre un grand potentiel pour CTL à base d'immunothérapie adoptive.

HLA-Ig des cellules à base Antigène artificielle Présentation d&#39;Efficient Ex vivo Extension du CTL humaines

Cette vidéo présente un test permettant de détecter les allo-anticorps HLA anti-donneur chez les receveurs d’organes. Un réseau de peptides est synthétisé pour représenter des épitopes potentiels pour le rejet d’organe médié par des anticorps. La matrice est incubée avec le sérum du receveur, contenant des allo-anticorps qui se lient à leurs épitopes cibles. La liaison des anticorps est détectée à l’aide de la chimiluminescence pour identifier les épitopes HLA spécifiques du donneur qui...

Détection par puce peptidique d’allo-anticorps HLA anti-donneur chez les receveurs d’organes

Cette vidéo présente une technique qui applique la technologie des microréseaux peptidiques pour profiler la spécificité des anticorps reconnaissant les modifications post-traductionnelles (PTM) sur les peptides d’histones. Une lame de microréseau contenant des peptides d’histones conjugués à des fluorophores immobilisés avec des combinaisons PTM connues est traitée avec des anticorps spécifiques de PTM cibles. Ce processus permet d'identifier la spécificité de l'anticorps pour la cible et sa...

Une technologie de microréseau peptidique pour le profilage de spécificité des anticorps

Dosages biochimiques avec des molécules du CMH II recombinants humains peuvent fournir des indications rapides quantitatives dans l'identification de l'épitope immunogène, la suppression, ou la conception. Ici, une analyse de liaison peptide-CMH II à l'échelle de plaques à 384 puits est décrite. Ce format rentable devrait se révéler utile dans les domaines de deimmunization de protéine et la conception et le développement de vaccins.

Un essai de liaison à haut débit CMH II pour l&#39;analyse quantitative du peptide épitopes

Des complexes HLA / peptide de classe I intactes sont éliminées par les cellules cancéreuses, ce qui représente un biomarqueur potentiel de cancer concerné. En utilisant la technologie des capteurs sans étiquette et récepteur des cellules T imitant les anticorps monoclonaux, la détection de la remise MIF / HLA-A * 02: 01 complexes dans les surnageants de cellules MDA-MB-231, dopés sérum humain, et le plasma du patient est démontrée, ce qui permet le développement de un nouveau cancer de la...

Détection de l&#39;antigène leucocytaire humain biomarqueurs du cancer du sein Utilisant la technologie des biocapteurs Sans étiquette

Cet article décrit une méthode de génération et de propagation de clones de lymphocytes T humains qui répondent spécifiquement à un alloantigène défini. Ce protocole peut être adapté pour le clonage de lymphocytes T humains spécifiques à une variété de ligands peptide-CMH.

Génération de cellules T humaines allo-spécifiques du sang périphérique

Nous décrivons ici une méthode pour générer des microréseaux d’antigènes personnalisables qui peuvent être utilisés pour la détection simultanée d’auto-anticorps IgG et IgM sériques chez l’homme et la souris. Ces réseaux permettent une détection quantitative et à haut débit d’anticorps contre tout antigène ou épitope d’intérêt.

Génération de deux couleurs Antigène Microarrays pour la détection simultanée des IgG et IgM autoanticorps

Ici, les auteurs présentent un protocole simple et efficace pour définir un épitope antigénique linéaire à l’aide d’un anticorps monoclonal purifié et d’un balayage peptidique par hybridation dot-blot. L’épitope identifié peut ensuite être utilisé dans des applications thérapeutiques et diagnostiques.

L&#39;identification d&#39;un épitope linéaire des cellules B monoclonales d&#39;anticorps reconnus par le peptide à balayage assistée

Ce manuscrit décrit des méthodes pour l'application de la technologie des micro-aigres peptidiques au profilage spécifique des anticorps qui reconnaissent les histones et leurs modifications post-traductionnelles.

Analyse de la spécificité d&#39;anticorps d&#39;histone avec des microarrays de peptides

Nous présentons ici un protocole pour la purification des complexes peptidiques de classe I et de classe II du CMH à partir de lignées cellulaires de souris et d’humains fournissant des données immunopeptidomiques de haute qualité. Le protocole se concentre sur la préparation d’échantillons à l’aide d’anticorps disponibles dans le commerce.

Immunopeptidomique : isolement de peptides associés à la souris et au CMH humain de classe I et II pour l’analyse par spectrométrie de masse

Découvrez une méthode de microéchantillons de peptides personnalisés pour détecter les allo-anticorps HLA dans la transplantation d'organes. Cette technique améliore la compréhension des réponses immunitaires et du rejet.

Personnalisés de microéchantillons de peptides pour la détection des allo-anticorps HLA dans la Transplantation d’organes

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