Name: Laminotomy pour accès de Ganglion de la racine dorsale lombaire et Injection chez le porc (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Découvrez la laminotomie lombaire pour accéder aux ganglions des racines dorsales chez le porc et réaliser des injections intraganglionnaires guidées. Cette technique chirurgicale permet de confirmer la livraison ciblée d'agents thérapeutiques et d'étudier leurs effets sur les cellules neuronales en neurosciences translationnelles.

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L’étude a été réalisée avec le soutien de la Fondation de la famille Schulze (pour le certificat).

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Aucun ; les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêt associés à cette étude.

Nous avons cherché à décrire une méthode d’exposition chirurgicale de DRG via laminotomy et intraganglionic injection chez une espèce animale saine, plus précisément, de peste porcine. Chez les rongeurs, une méthode similaire a été détaillée 12 et utilisé pour fournir des agents pharmacologiques conventionnels 8,10 et vecteurs viraux 6,7,9</sup...

Les ganglions rachidiens (DRG) sont des collections anatomiquement discrets, neuronales, situées le long de la colonne vertébrale. Chaque DRG contient les neurones sensoriels primaires qui codent et relais des stimuli périphériques au système nerveux central (CNS) des régions spécifiques du corps. Par exemple, la douleur de l’arthrose commence lorsque les récepteurs de la douleur situés sur une articulation perçoivent des stimuli nociceptifs. Ce processus est appelé la nociception. Sensibilisation à long terme des stimuli nociceptifs mène à la douleur chronique 1.
La douleur chronique est un sujet fréquent d’étude préclinique 2 où un seul but est de développer des méthodes utiles pour l’administration ciblée des analgésiques à DRG, telles que l’injection intraganglionic 3. Cependant, DRG sont difficiles d’accès, parce qu’ils résident dans les limites boney du foramen intervertébral 4. Plusieurs groupes ont avec succès surmonter cet obstacle grâce à l’utilisation de la chirurgie de la colonne vertébrale en rongeurs 5,6,7,8,9,10.
Dans la clinique, une laminectomie est une opération courante de la colonne vertébrale et se réfère à l’ablation chirurgicale de la lame vertébrale, érosion ainsi le canal vertébral 11. Incorporation de techniques chirurgicales pour permettre un accès direct DRG a réussi à rongeurs 5,12, cependant, la traduction peut être irréalistes vu différences dans la taille des structures concernées et qui influence pharmacocinétique ou faisabilité technique 13,14. Par exemple, une étude a déterminé le diamètre transversal de la moelle épinière à T10 à 3.0, 7.0 et 8,2 mm pour rat, cochon et l’homme, respectivement le 15. Ainsi, le gros animal modèles mieux approximatives dimensions humaines des structures nerveuses.
Chez le porc, Raore al utilisé laminectomie multi-niveau pour accéder à la moelle épinière cervicale pour plusieurs injections intramédullaires 16. La procédure a été bien tolérée et ont conduit à une phase I essai clinique où des résultats chirurgicaux comparables ont été documentées 17. Ces résultats encouragent la poursuite de l’utilisation de modèles animaux grands précliniques comme prédicteurs de la faisabilité technique et de la sécurité chez les humains.
A ce jour, aucune méthodologie détaillée n’existe pour accès chirurgical et injection de DRG chez une espèce animale. Pour réduire cet écart translationnel, nous rapportons un protocole pour l’exposition DRG et injection via laminotomy chez le porc. Matériaux, instruments et techniques neurochirurgicales standard ont été utilisées et la méthode a été conçue pour imiter la pratique chirurgicale moderne. Nous démontrer intraganglionic injection en utilisant une solution aqueuse de DRG lombaire et confirmer la mise en œuvre réussie par histologie après jour postopératoire 21.

<table><tbody><tr><td>Grande élingue pour animaux sans cruauté</td><td>Britz & </td><td>Entreprise 002539</td><td>Modifié pour inclure l’ouverture abdominale</td></tr><tr><td>Électrode adhésive de retour du patient - 9 pouces</td><td>Medtronic</td><td>E7506-Système</td><td></td></tr> <tr><td>de réchauffement du sang et des fluides</td><td>3M</td><td>24500-Fluide</td><td></td></tr> de <tr><td>Ringer lacté</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-09-Dispositif</td><td></td></tr> <tr><td>de réchauffement de l’air Force</td><td>3M</td><td>77500</td><td>-</td></tr><tr><td>Solution Duraprep avec applicateur, 26 mL (0,7 % d’iode povacrylex, 74 % d’alcool isopropylique)</td><td>3M</td><td>8630-Serviettes</td><td></td></tr> <tr><td>chirurgicales jetables stériles</td><td>Medline</td><td></td> <td>MDT2168286-Ioban</td></tr> <tr><td>2 champ d’incision</td><td>3M</td><td>6651EZSB-Aspirateur</td><td></td></tr> <tr><td>jetable et tubulure</td><td>Medline</td><td></td> <td>DYND44703H-Interrupteur</td></tr> <tr><td>crayon</td> <td>monopolaire électrochirurgicalMedtronic</td><td>E2450H-Pince</td><td></td></tr> <tr><td>électrochirurgicale bipolaire fine et droite, 4 1/2 pouces</td><td>Bovie</td><td>A826</td><td>-</td></tr><tr><td>#15 lame</td><td>Miltex</td><td>4-315</td><td>-</td></tr><tr><td>#11 lame</td><td>Miltex</td><td>4-311-4</td><td></td></tr> <tr><td>x 4 gaze chirurgicale</td><td>Dynarex</td><td>3262-Weitlaner</td><td></td></tr> <tr><td>écarteur auto-retentissant, 8 pouces</td><td>Miltex</td><td>11-618</td><td>-</td></tr><tr><td>Enrouleur auto-rétentif Meyerding, 1 x 2 3/8 pouces</td><td>Sklar</td><td>42-2078-Gelpi</td><td></td></tr> <tr><td>enrouleur auto-récent, 7 pouces</td><td>Sklar</td><td>60-6570-Freer</td><td></td></tr> <tr><td>elevator, 5 mm</td><td>Medline</td><td></td> <td>MDS4641518F-Bone</td></tr> <tr><td>wax</td><td>Ethicon</td><td>W31G-Spurling</td><td></td></tr> <tr><td>rongeur de disque intervertébral, 3 mm</td><td>Sklar</td><td>42-2852</td><td>-</td></tr><tr><td>Spurling 45 degrés, rongeur Kerrison à mordant vers le haut,</td> rongeur coudé <td>Medline</td><td></td> <td>MDS4052802-Leksell</td> de 2 mm</tr><tr><td>, 2 mm</td><td>Sklar</td><td>40-4097-Gelfoam</td><td></td></tr><tr><td>, taille 50</td><td>Pfizer</td> <td>AZL32301-Cottonoid</td><td></td></tr> <tr><td>patty</td><td>Medtronic</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>8004007-Frazier embout d’aspiration, 6 Fr</td><td>Sklar</td><td>50-2006-Frazier</td><td></td></tr> <tr><td>d’aspiration, 10 Fr</td><td>Sklar</td><td>50-2010-Dandy</td><td></td></tr> <tr><td>blunt crochet nerveux à angle droit</td><td>Medline</td><td></td> <td>MDS4005220-Nylon</td></tr> <tr><td>suture, 6-0</td><td>Ethicon</td><td>697G-Castroviejo</td> <td>porte-micro</td></tr> <tr><td>aiguille lisse</td><td>Medline</td><td></td> <td>MDG2428614-22</td></tr> <tr><td>gauge Quinke point spinal needle</td><td>Halyard Health</td><td>18397-32</td><td></td></tr> <tr><td>gauge CED needle avec moyeu Luer verrouillable</td><td>Voir les commentaires</td><td>n/a</td><td>Comme dans : Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia : validation in the pig model and prospective modeling in humans. Note technique. J Neurosurg. 121(4), 851-8 (2014).</td></tr><tr><td>Tube en polyéthylène, 5 pieds</td><td>Scientific Commodities</td><td>BB31695-PE/05-Seringue</td><td></td></tr> <tr><td>Monoject, 3 mL</td><td>Kendall</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>SY15352-NanoJet pousse-seringue</td><td>Chemyx</td><td>10050-DAPI</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-Fast</td><td></td></tr> <tr><td>Green FCF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7252-Bulb</td><td></td></tr> <tr><td>seringue d’irrigation</td><td>Medline</td><td></td><td>DYND20125-Pince</td></tr> <tr><td>Adson à dents fines</td><td>Medline</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MDS1000212-Vicryl suture, 0</td><td>Ethicon</td><td>J603H-Suture</td><td></td></tr> <tr><td>en Vicryl, 2-0</td><td>Ethicon</td><td>J317H-Compteur</td><td></td></tr> <tr><td>d’aiguilles</td><td>Medline</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>NC20FBRGS-Steri-strip fermeture cutanée, 1/2x4 pouce</td><td>3M</td><td>R1547</td><td>-</td></tr></tbody></table>

laminotomy pour accès de ganglion de la racine dorsale lombaire et injection chez le porc

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Les ganglions rachidiens (DRG) sont des structures anatomiques bien définies qui contiennent tous les neurones sensitifs primaires au-dessous de la tête. Ce fait rend les cibles intéressantes DRG pour l’injection de nouveaux médicaments destinés à traiter la douleur chronique. Dans des modèles animaux petits, laminectomie a été utilisée pour faciliter l’injection de DRG parce qu’elle implique l’ablation chirurgicale de l’OS vertébral entourant chaque DRG. Nous démontrons une technique d’injection intraganglionic de DRG lombaire dans une espèce animale, nommément, de peste porcine. Laminotomy est effectuée afin de permettre un accès direct à la DRG en utilisant les matériaux, les instruments et les techniques neurochirurgicales standard. Par rapport à la plus vaste retrait d’OS via une laminectomie, nous implémentons laminotomy pour conserver de l’anatomie de la colonne vertébrale tout en assurant un accès suffisant DRG. Des progrès peropératoire d’injection DRG est surveillé à l’aide d’un colorant non toxique. Suite à l’euthanasie au jour postopératoire 21, le succès d’injection est déterminé par histologie pour intraganglionic distribution de 4', 6-diamidino-2-phénylindole (DAPI). On injecte une solution biologiquement inactif pour démontrer le protocole. Cette méthode pourrait être appliquée à l’avenir précliniques de solutions thérapeutiques cible de DRG. Notre méthodologie devrait faciliter le contrôle de la traduisibilité des paradigmes animaux petits intraganglionic dans une espèce animale. En outre, le présent protocole peut servir une ressource clé pour ceux qui envisagent des études précliniques de l’injection de DRG chez le porc.

Évaluation histologique de propagation d’injection co-Set Mise en œuvre réussie d’injection co-Set de DRG est déterminée par une évaluation histologique de DAPI répartie. La technique consiste à positionner la pointe de l’aiguille au centre en trois dimensions de la DRG. Par conséquent, mise en œuvre réussie est déterminée en évaluant l’ampleur du DAPI coloration partir de coupes histologiques tous deux près (sections centrales de DRG) et lointain (périphériques DRG sections) à la pointe de l’aiguille...

Nous décrivons une méthode pour laminotomy chez le porc qui donne accès au rachidiens lombaires (DRG) pour injection intraganglionic. Progrès de l’injection sont surveillée de manière et histologiquement confirmé jusqu'à 21 jours après la chirurgie. Ce protocole pourrait être utilisé pour de futures études précliniques impliquant l’injection de DRG.

Laminotomy pour accès de Ganglion de la racine dorsale lombaire et Injection chez le porc

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

L’objectif global de cette procédure est de fournir un accès chirurgical à un ganglion de la racine dorsale lombaire chez le porc pour l’injection intraganglionnaire d’une solution à l’aide d’une aiguille d’administration assistée par convection. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines des neurosciences fondamentales et translationnelles concernant l’effet d’un nouveau médicament sur les cellules DRG lorsqu’il est administré directement au parenchyme DRG. Le principal avantage de cette technique est qu’elle fournit les données techniques nécessaires pour confirmer qu’une solution a été livrée avec succès à DRG et pour comparer les résultats entre les réplicats biologiques.Cette technique sera la norme de référence pour l’accouchement intraganglionnaire. L’objectif ultime est la diffusion guidée par l’image. Grâce à cet étalon de référence, nous pouvons caractériser de manière unique l’efficacité thérapeutique des agents et l’efficacité de l’administration.Anesthésie un porc pour une intervention chirurgicale, puis positionne-le dans une grande écharpe modifiée pour animaux sans cruauté avec une ouverture abdominale rembourrée. Assurez-vous que les

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La transplantation précurseurs neuraux est une stratégie prometteuse pour protéger et / ou le remplacement perdu / dysfonctionnel cervicale neurones moteurs phrénique des blessures de la moelle épinière (SCI) et les neurones moteurs désordre, la sclérose amyotrophique latérales (SLA). Nous fournissons un protocole pour la livraison de cellule à la corne moelle épinière cervicale ventrale dans des modèles rongeurs de la SLA et la SCI.

Cell Transplantation intraspinale pour le ciblage du col corne ventrale de la sclérose latérale amyotrophique et les lésions de la moelle épinière

Imagerie en temps réel des axones de la racine dorsale après Rhizotomie

Brève description visuelle de la technique chirurgicale et le dispositif utilisé pour la livraison de (génique et cellulaire) thérapies dans la moelle épinière. La technique est démontrée chez l'animal, mais est entièrement traduisible et est actuellement utilisé pour une application humaine.

Technique chirurgicale pour la livraison de la moelle épinière des thérapies: Démonstration de procédure à Göttingen miniporcs

Source : Unger, M. D., et al., Laminotomie pour l’accès et l’injection du ganglion de la racine dorsale lombaire chez le porc. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo montre une procédure de laminotomie chez un porc anesthésié pour accéder au ganglion de la racine dorsale lombaire pour une administration neurothérapeutique ciblée à l’aide d’une administration assistée par convection.

Laminotomie pour injection ciblée dans le ganglion de la racine dorsale lombaire dans un modèle porcin

Source : Cheah, M.,  et al. Injection du ganglion de la racine dorsale et blessure par écrasement de la racine dorsale comme modèle de régénération sensorielle des axones. J. Vis. Exp. (2017). Cette vidéo montre une procédure étape par étape pour injecter une suspension virale dans les ganglions de la racine dorsale (DRG) et induire une lésion axonale contrôlée via un écrasement de la racine dorsale chez un rat anesthésié. Le protocole consiste à exposer les DRG, à délivrer un vecteur viral...

Modélisation de la régénération sensorielle des axones chez un rat à l’aide d’une injection de ganglion de la racine dorsale et d’une lésion par écrasement de la racine dorsale

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Le présent protocole décrit l’imagerie calcique in vivo pour mesurer les réponses d’ensembles de neurones lombaires-6 DRG à des stimuli somatiques et viscéraux. Des comparaisons approfondies peuvent être faites entre les neurones répondant à différents stimuli. Ce protocole est précieux pour étudier les mécanismes de la douleur viscérale et de la stimulation somatique, comme l’acupuncture.

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Ce protocole chirurgical est un guide étape par étape pour insérer un cathéter intrathécal dans l’espace sous-dural de la colonne vertébrale d’un rongeur afin d’administrer un traitement ciblé.

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Foraminotomie lombaire endoscopique complète transforaminale sous anesthésie locale pour la sténose foraminale du segment adjacent L5/S1

Cet article détaille les méthodes d’administration intrathécalienne pour les traitements ciblant le SNC chez les souris adultes, en mettant l’accent sur la précision des protocoles et la possibilité d’injections répétées. Il inclut les résultats d’une étude de validation où les oligonucléotides antisens ont réduit l’expression mutante de SOD1 chez des souris modèles SOD1-SLA, soutenant l’utilité de cette approche dans la recherche préclinique sur les maladies neurodégénératives.

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Découvrez la laminotomie lombaire pour accéder aux ganglions des racines dorsales chez le porc et réaliser des injections intraganglionnaires guidées. Cette technique chirurgicale permet de confirmer la livraison ciblée d'agents thérapeutiques et d'étudier leurs effets sur les cellules neuronales en neurosciences translationnelles.

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