Name: TRANS-tympanique de médicaments pour le traitement de l’ototoxicité (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Découvrez l'administration trans-tympanique de médicaments pour traiter l'ototoxicité induite par la cisplatine chez le rat. Cette méthode permet une délivrance locale directe dans la cochlée avec moins d'effets secondaires systémiques.

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Les travaux décrits dans cet article était accompagnée d’une CA166907 RO1 NCI, NIDCD RO1-DC 002396 et de DC011621 RO3.

Wistar mâles rats ont été traités selon l’animal National Institutes of Health utiliser les lignes directrices et un protocole approuvé par le Comité à utiliser et de la Southern Illinois University School of médecine Laboratory Animal Care. Réponse auditif du tronc cérébral (PEATC) a été réalisée sur des rats, tandis que sous anesthésie avant l’administration de médicaments et 72 h après pour vérifier l’effet de l’administration de médicaments trans-tympanique.
1. réponse auditif du tronc cérébral (PEATC)
Remarque : Mesures d’ABR ont été recueillies à l’aide de l’équipement de test auditif et les logiciels. ABR représente potentiels évoqués ou des ondes de haute fréquence générées par le huitième nerf crânien (wave I et II) et autres structures auditifs du tronc cérébral supérieurs, y compris le noyau cochléaire antéroventral (wave III), lemnisque latéral (onde IV) et inférieure colliculus (onde V). Ces ondes sont différenciés selon le temps de latence. ABR mesures ont été réalisées comme décrit plus haut12.
<ol><li>Anesthésier les rats avec un mélange de 90 mg/kg la kétamine et 17 mg/kg de xylazine par injection intrapéritonéale. Confirmer la profondeur d’anesthésie par orteil-pinch réflexe. Appliquer les gouttes d’huile minérale (ou ophtalmiques lubrifiantes) pour les deux yeux pour que les yeux ne se dessèchent et éviter une ulcération pendant l’anesthésie.</li>
	<li>Placez le rat en décubitus ventral sur un coussin chauffant (37 ° C) à l’intérieur d’une cabine acoustique contrôlée. Équipement de test audiologie est situé à l’extérieur, à proximité de la cabine.</li>
	<li>Insérer des électrodes en acier inoxydable en conséquence : le flanc de l’électrode de terre à l’arrière, l’électrode positive entre les deux oreilles directement au sommet du crâne et les électrodes négatives sous le pavillon de chaque oreille.</li>
	<li>Appliquer des stimuli acoustiques utilisant des transducteurs haute fréquence comme une rafale de ton ms 5 à 8, 16 et 32 kHz. Déterminer des intensités de stimulation comme niveau de pression acoustique de décibel (dB SPL). Cela commence à 10 dB SPL et atteint 90 dB SPL avec une taille d’étape 10-dB. Calibrer les intensités sonores à un débit maximal de 90 dB SPL à l’aide d’une impulsion précision sonomètre. Remarque : Le résultat donne une indication de l’intégrité de l’organe de l’audition périphérique, la cochlée et les structures auditives susmentionnés. Les ondes sont générées dans les 15 ms d’impulsion d’entrée et de la latence des ondes dépend des temps de conduction, qui à son tour, sont régi par trois facteurs essentiels : volume du cerveau, l’intensité et la fréquence du son. Potentiels évoqués auditifs ont été enregistrés à l’aide du logiciel fourni par le fabricant.</li>
	<li>Considérer l’intensité minimale qui peut évoquer deux formes d’onde différentes (II et III) d’une amplitude 0,5 µV comme seuil en bonne place. Remarque : Déplacement de seuil correspond à la différence du seuil mesuré après que traitement contre le seuil obtenu avant le traitement.</li>
</ol>2. Trans-tympanique Injections
<ol><li>Pour administrer le médicament trans-tympanically, placez le rat en position de décubitus latéral gauche.<ol>
<li>Insérer les spéculums jetables oreille 2,5 mm dans le conduit auditif.</li>
		<li>Avec l’utilisation d’une chirurgie étendue, positionnez le spéculum pour que la membrane tympanique est visible.</li>
		<li>À l’aide d’un 29 X ½, seringue de 0,5 mL de l’insuline, dresser 50 µL de l’adénosine d’isopropylique [R] - N - phényl (R-PIA) solution (1 µM), 8-Cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine (DPCPX) solution (3 µM) ou siRNA (0,9 µg) à injecter (5 unités).</li>
		<li>Utiliser le spéculum pour diriger l’aiguille dans la région antérieure et inférieure de la membrane tympanique.</li>
		<li>Piquez un trou à travers la membrane avec l’aiguille et administrer les médicaments mentionnés au point 1.2.3. Laissez le rat se reposer dans cette position pendant 15 min. Remarque : 50 µL devrait être le volume adéquat pour monter derrière la membrane tympanique. Aucun fluide ne devrait être dans le conduit auditif après l’administration.</li>
		<li>Placez le rat en décubitus latéral position et répéter les étapes 1.2.1 à 1.2.5, pour administration dans l’autre oreille à droite.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pour les rats recevant le cisplatine par voie intrapéritonéale, placez le rat en décubitus dorsal sur un coussin chauffant à 37 ° C.<ol>
<li>À l’aide d’un 21 X 3/4 papillon aiguille (tuyau 12"), dresser cisplatine (11 mg/kg, 1 mg/mL d’une solution dans une solution saline tampon de phosphate stérile [PBS]).</li>
		<li>À l’aide d’un pousse-seringue, administrer le cisplatine (1 mg/mL) par injection intrapéritonéale pendant 30 min. Remarque : Pour un rat de 250 g, le volume serait 2,75 mL à un taux d’environ 0,1 mL / min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Continuer à surveiller la profondeur de l’anesthésie tout au long de ces procédures. Une fois que l’administration de cisplatine est terminée, replacez le rat dans la cage en décubitus ventral, assurant qu’il n’y a rien pour gêner sa respiration.</li>
	<li>Surveiller le rat jusqu'à ce que complètement guéri.</li>
</ol>3. détartrage et Dissection de la cochlée
<ol><li>Après la final ABR (après 72 h), anesthésier le rat avec un mélange de 90 mg/kg la kétamine et 17 mg/kg de xylazine par injection intrapéritonéale. Confirmer l’anesthésie avec un réflexe d’orteil-pincement. Euthanasier la rat par décapitation.</li>
	<li>Disséquer sur l’OS temporal comme décrit plus haut13.</li>
	<li>Placer cochlée dans 4 % de paraformaldéhyde à 1 x solution de PBS dans un flacon de verre de 7 mL à scintillation (recouvrant complètement la cochlée). Réfrigérer pendant une nuit à 4 ° C. Enlevez paraformaldéhyde et lavez avec une solution de 1 PBS x à température ambiante.</li>
	<li>Retirez les PBS et remplir le tube avec une solution d’EDTA (pH 7,3) de 120 mM. Placer sur un agitateur à température ambiante et laisser décalcification pendant 2 à 3 semaines, en changeant la solution d’EDTA par jour.</li>
</ol>4. Cryosectioning
<ol><li>Après le détartrage, immergez complètement la cochlée dans les solutions suivantes (7 mL) pendant 24 h à 4 ° c : 10 % de sucrose, 20 % de sucrose, mélange 1:1 de 20 % de sucrose et de coupe optimale de température (OCT) incorporation composé.</li>
	<li>Placez OCT frais composé de remplir et de couvrir complètement la cochlée dans un 15 mm x 15 mm x 5 mm jetable enrobage moule. Orienter la cochlée sur son côté il est parallèle au fond du moule encastrement, tel que décrit par Whitlon et al. 14
</li>
	<li>Placer immédiatement le moule sur la glace sèche pour solidifier l’OPO et stocker à-80 ° C durant la nuit.</li>
	<li>Plonger les lames de microscope à 0,01 % Poly-L Lysine à température ambiante pendant 30 min. Retirer les lames, ne pas rincer et laisser sécher pendant la nuit. Utiliser ces lames pour coupes cryogéniques.</li>
	<li>Retirez la cochlée en OCT du congélateur-80 ° C et placez-le sur la glace sèche. Utiliser une lame à tranchant microtome (L x w : 80 mm x 8 mm, épaisseur 0,25 mm, angle de coupe de 34 °), la section des blocs de OCT à 10 µm à l’aide d’un cryostat à-30 ° C. Placez les deux parties par diapositive.</li>
	<li>Réfrigérer les lames à 4 ° C lorsque vous avez terminé.</li>
</ol>5. immunohistochimie
<ol><li>Déposer les lames dans une lame de microscope de verre plat sur une grille coulissante de coloration. Remplir le plat avec 350 mL de solution 1 PBS x et laver les lames pendant 5 min trois fois à la température ambiante.</li>
	<li>Supprimer les diapositives de la capsule et sécher la zone qui entoure le tissu à l’aide d’un chiffon sec, en veillant à ne pas sécher les tissus.<ol>
<li>À l’aide d’un stylo liquid de blocage, tracez un cercle autour de la section de tissu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bloquer le tissu pendant 1 h à température ambiante en ajoutant 150 µL de solution de saturation contenant du sérum normal de 10 % (âne), détergent non-ionique 1 % et 1 % de BSA dans du PBS 1 x.</li>
	<li>Touchez au large de la solution de saturation excessive et incuber le tissu pendant la nuit à 4 ° C dans une chambre humidifiée avec 150 µL de sérum normal de 10 % (âne), 0,1 % de détergent non ionique et anticorps primaire (voir la remarque ci-dessous) dans du PBS 1 x. Remarque : Pour les anticorps suivants, ces dilutions ont été utilisées : Figure 2 et 3, p-STAT1 Ser727 1 : 300. Figure 4, p-STAT1 Ser727, au 1/100 et 1/100 de TRPV1.</li>
	<li>Déposer les lames dans la lame de microscope de verre plat sur une grille coulissante de coloration. Remplir le plat avec 350 mL de solution 1 PBS x et les lames pendant 5 min trois fois à la température ambiante.</li>
	<li>Incubation avec l’anticorps secondaires dilués dans une solution contenant un détergent non-ionique 0,01 % et sérum normal de 10 % (âne) dans du PBS 1 x pendant 2 à 3 h à température ambiante dans une chambre humidifiée dans l’obscurité. Remarque : Pour les anticorps secondaires suivantes, ces dilutions ont été utilisées : Figure 2 et 3, 1:600 âne anti-lapin IgG. Pour la Figure 4, Rhodamine (TRITC) âne anti-lapin IgG 1/500 et Donkey anti-Goat IgG 1/500.</li>
	<li>Déposer les lames dans la lame de microscope de verre plat sur une grille coulissante de coloration. Remplir le plat avec 350 mL de solution 1 PBS x et les lames pendant 5 min trois fois à la température ambiante.</li>
	<li>Pressez l’excès de liquide hors de la diapositive et sécher la lame avec un chiffon sec autour du tissu. Monter les diapositives en ajoutant une goutte de l’agent de montage au DAPI directement sur le tissu. Lentement, placez le couvre-objet sur le dessus, en veillant à ce qu’aucune bulle ne se forment au-dessous et laisser les lames guérir du jour au lendemain à la température ambiante dans l’obscurité. Stocker les lames à 4 ° C.</li>
	<li>Diapositives d’image à l’aide de la microscopie confocale. Utilisent des lasers pour l’imagerie comme suit : laser UV pour DAPI, laser 488 nm âne des IgG anti-lapin et 543 nm laser pour la rhodamine TRITC.</li>
</ol>

<ol><li>McKeage, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+adverse+effect+profiles+of+platinum+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Comparative adverse effect profiles of platinum drugs.</a> Drug Saf. 13 (4), 228-244 (1995).</li>
<li>Boulikas, T., Vougiouka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin+and+platinum+drugs+at+the+molecular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Rep%22%5BJournal%5D)">Cisplatin and platinum drugs at the molecular level.</a> Oncol Rep. 10 (6), 1663-1682 (2003).</li>
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<li>Rybak, L. P., Husain, K., Morris, C., Whitworth, C., Somani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+protective+agents+against+cisplatin+ototoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Otol%22%5BJournal%5D)">Effect of protective agents against cisplatin ototoxicity.</a> Am J Otol. 21 (4), 513-520 (2000).</li>
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<li>Montgomery, S. C., Cox, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+Mount+Dissection+and+Immunofluorescence+of+the+Adult+Mouse+Cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea.</a> J. Vis. Exp. (107), e53561(2016).</li>
<li>Whitlon, D. S., Szakaly, R., Greiner, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoembedding+and+sectioning+of+cochleas+for+immunocytochemistry+and+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Cryoembedding and sectioning of cochleas for immunocytochemistry and in situ hybridization.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 6 (3), 159-166 (2001).</li>
<li>Londos, C., Cooper, D. M., Wolff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subclasses+of+external+adenosine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Subclasses of external adenosine receptors.</a> Proc Natl Acad Sci. 77 (5), 2551-2554 (1980).</li>
<li>Lohse, M. J., Klotz, K. N., Lindenborn-Fotinos, J., Reddington, M., Schwabe, U., Olsson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((8-Cyclopentyl-1%2C3-dipropylxanthine+%28DPCPX%29--a+selective+high+affinity+antagonist+radioligand+for+A1+adenosine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX)--a selective high affinity antagonist radioligand for A1 adenosine receptors.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 336 (2), 204-210 (1987).</li>
<li>Rybak, L. P., Whitworth, C., Scott, V., Weberg, A. D., Bhardwaj, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+as+a+potential+model+for+hearing+loss+in+biotinidase+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Otol+Rhinol+Laryngol%22%5BJournal%5D)">Rat as a potential model for hearing loss in biotinidase deficiency.</a> Ann Otol Rhinol Laryngol. 100 (4), Pt 1 294-300 (1991).</li>
<li>Mukherjea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOX3+NADPH+oxidase+couples+transient+receptor+potential+vanilloid+1+to+signal+transducer+and+activator+of+transcription+1-mediated+inflammation+and+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">NOX3 NADPH oxidase couples transient receptor potential vanilloid 1 to signal transducer and activator of transcription 1-mediated inflammation and hearing loss.</a> Antioxid Redox Signal. 14 (6), 999-1010 (2011).</li>
<li>Kaur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A1+receptor+protects+against+cisplatin+ototoxicity+by+suppressing+the+NOX3%2FSTAT1+inflammatory+pathway+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Adenosine A1 receptor protects against cisplatin ototoxicity by suppressing the NOX3/STAT1 inflammatory pathway in the cochlea.</a> J Neurosci. 36 (14), 3962-3977 (2016).</li>
<li>Kaur, T., Mukherjea, D., Sheehan, K., Jajoo, S., Rybak, L. P., Ramkumar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+interfering+RNA+against+STAT1+attenuates+cisplatin-induced+ototoxicity+in+the+rat+by+suppressing+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Short interfering RNA against STAT1 attenuates cisplatin-induced ototoxicity in the rat by suppressing inflammation.</a> Cell Death Dis. 2 (180), (2011).</li>
</ol>

Aucun conflit d’intérêts ne déclarés.

La route trans-tympanique administration autorise une livraison localisée de médicaments et d’autres agents à la cochlée qui pourrait produire autrement des effets secondaires systémiques importants s’il est administré de façon systémique. Cette méthode d’administration des médicaments permet un accès rapide des médicaments sur le site d’action à des doses nettement plus élevés que se ferait par voie systémique. Les résultats présentés ici et publiés a déjà montrent que l’administration de l’adénosine de [R] - N...

Le système auditif périphérique est extrêmement sensible aux médicaments comme les antibiotiques aminosides et cisplatine. Cisplatine est un agent chimiothérapeutique utilisé pour le traitement d’une variété de tumeurs solides, comme les ovaires, testicules et tête et cou cancers. Ototoxicité expérimentée avec l’utilisation de ce médicament est limitant la dose et assez fréquent, touchant 75-100 % des patients traités1. D’autres drogues, telles que le carboplatine et d’oxaliplatine, ont émergé comme alternative au cisplatine2,3,4,5, mais leur utilité est limitée à quelques cancers.
Les premières études ont montré le rôle essentiel des espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans la médiation de l’ototoxicité produite par cisplatine et aminoglycosides. Des études ultérieures ont montré que l’isoforme NOX3 de la NADPH oxydase est la principale source des ROS dans la cochlée et est activé par le cisplatine6,7. La génération de compromis ROS l’antioxydant le pouvoir tampon des cellules, menant à a augmenté la peroxydation lipidique des membranes cellulaires,8. En outre, cisplatine augmente la production de radicaux hydroxyles qui génèrent l’aldéhyde hautement toxiques 4-hydroxynonenal (4-HNE), initiateur de cellule mort9,10. Basé sur ces résultats, plusieurs antioxydants ont été examinés pour le traitement de l’ototoxicité de cisplatine. Il s’agit de N-acétyl-cystéine (NAC), thiosulfate de sodium (STS), amifostine et D-méthionine. Cependant, une préoccupation majeure de la thérapie antioxydante est que ces antioxydants pourraient réduire efficacité chimiothérapie cisplatine lorsqu’il est administré systématiquement11 grâce à l’interaction du cisplatine avec des groupements thiol dans les molécules antioxydantes.
Compte tenu de ces problèmes avec la thérapie antioxydante, l’objectif de cette étude était d’examiner la route trans-tympanique de la prestation d’antioxydants et autres drogues à la cochlée pour réduire la perte d’audition. La route trans-tympanique des drogues et interférant court (si) RNA, décrit ci-dessous, semble particulièrement prometteuse.

<table><tbody><tr><td>Cétathésie (100 mg/ml) 10 ml</td><td>Henry Schein</td><td>56344</td><td>Substance contrôlée&nbsp ;</td></tr><tr><td>AnaSed Injection/Xylazine (20 mg/ml) 20 ml</td><td>Henry Schein</td><td>33197</td><td></td></tr><tr><td>2,5 mm spéculum auriculaire jetable</td><td>Welch Allyn</td><td>52432</td><td></td></tr><tr><td>Portée chirurgicale</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>29 G X 1/2 seringue à insuline</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-841-32&nbsp ;</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>cis-Diamminedichlorure de platine(II)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4394</td><td>TOXIQUE - porter un EPI approprié</td></tr><tr><td>Harvard 50-7103 Unité de contrôle de couverture homéothermique</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Series 863</td><td></td></tr><tr><td>Excel International 21 G X 3/4 aiguille papillon</td><td>Fisher</td><td>14-840-34&nbsp ;</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>Pompe à seringue à vitesse unique BSP</td><td>Brain Tree Sci, Inc</td><td>BSP-99</td><td></td></tr><tr><td>Système de mesure du son d’impulsion</td><td>Bruel & Logiciel Kjaer</td><td>Pulse 13</td> Module haute fréquence Bruel &<td></td></tr><tr><td></td><td> Kjaer</td><td>3560C</td><td></td></tr><tr><td>1/8&Prime ; Microphone à champ de pression &mdash ;-Type 4138</td><td>Bruel & Kjaer</td><td>bp2030</td><td></td></tr><tr><td>Sonde haute fréquence</td><td>Système auditif intelligent</td><td>M014600</td><td></td></tr><tr><td>Transmetteur de puissance Opti-Amp</td><td>Système auditif intelligent</td><td>M013010P</td><td></td></tr><tr><td>Système ABR SmartEP</td> Système <td>auditif intelligent</td><td>M011110</td><td></td></tr><tr><td>Électrodes EEG sous-cutanées jetables</td><td>CareFusion</td><td>019-409700</td><td></td></tr><tr><td>16 % Formaldéhyde, sans méthanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>TOXIQUE - porter un EPI approprié&nbsp ;</td></tr><tr><td>7 mL Flacon à scintillation en verre borosilicaté</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-26</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP118-500</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Fisher Scientific</td><td>S5-500</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>Tissue Plus OCT Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>CryoMolds (15 mm x 15 mm x 5 mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-553</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>Lames de microscope (25 mm x 75 mm)</td><td>MidSci</td><td>1354W</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>Lamelles (22 x 22 x 1)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542-B</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs Solution</td></tr> de <tr><td>poly-L-lysine (0,01 %)</td><td>EMD Millipore</td><td>A-005-C</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>HM525 NX Cryostat</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>956640</td><td></td></tr><tr><td>MX35 Premier Disposable Low-Profile Microtome</td><td>Blades Thermo Fischer Scientific</td><td>3052835</td><td></td></tr><tr><td>Wheaton&trade ; &nbsp ; Plat de coloration en verre à 20 lames avec support amovible</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-812</td><td></td></tr><tr><td>Super Pap Pen Liquid Blocker</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>Sérum d’âne normal</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>017-000-121</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Acros</td><td>21568</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>Peut être acheté auprès d’autres fournisseurs</td></tr><tr><td>Anticorps Phospho-Stat1 (Ser727) Signalisation</td><td>cellulaire</td><td>9177</td><td></td></tr><tr><td>VR1 Anticorps (C-15)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-12503</td><td></td></tr><tr><td>DyLight 488 Donkey anti Rabbit</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>711-485-152</td><td>Discontinué</td></tr><tr><td>DyLight 488 Donkey anti Goat</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>705-485-003</td><td>Discontinué</td></tr><tr><td>Rhodamine (TRTIC) Donkey anti Rabbit</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>711-025-152</td><td>Discontinué</td></tr><tr><td>ProLong&reg ; Diamant Antifade Mountant avec DAPI</td><td>Thermo Fisher</td><td>P36971</td><td></td></tr> <tr><td>(&minus ;)-N6-(2-Phénylisopropyl)adénosine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4532</td><td></td></tr><tr><td>8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C101</td><td></td></tr><tr><td>siRNA pSTAT1</td><td>Qiagen</td><td>Custome Made</td><td>Kaur et al. 201120</td></tr><tr><td>siRNA NOX3</td><td>Qiagen</td><td>Custome Made</td><td>Kaur et al. 201120Sbrouled</td></tr> <tr><td>Negative Control siRNA</td><td>Qiagen</td><td>1022076</td><td>Kaur et al. 201120</td></tr></tbody></table>

trans-tympanique de médicaments pour le traitement de l’ototoxicité

Trans-Tympanic Drug Delivery for the Treatment of Ototoxicity

L’administration systémique d’agents protecteurs pour traiter l’ototoxicité induite par le médicament est limitée par la possibilité que ces agents protecteurs susceptibles de gêner l’efficacité chimiothérapeutique de la drogue primaire. Cela est particulièrement vrai pour la cisplatine, dont l’action anticancéreuse est atténuées par des antioxydants qui assurent une protection adéquate contre la perte d’audition. Autres agents otoprotective actuels ou potentiels pourraient poser un problème similaire, s’il est administré de façon systémique. L’application des divers produits biologiques ou les agents de protection directement à la cochlée permettrait à des niveaux élevés de ces agents localement ayant limité les effets secondaires systémiques. Dans ce rapport, nous démontrons une méthode trans-tympanique de la livraison de divers médicaments ou réactifs biologiques à la cochlée, ce qui devrait améliorer la recherche scientifique fondamentale sur la cochlée et offrent un moyen simple de diriger l’utilisation d’agents otoprotective dans les cliniques. Ce rapport détaille un procédé de medicaments trans-tympanique et fournit des exemples de comment cette technique a été utilisée avec succès chez les animaux expérimentaux pour traiter l’ototoxicité de cisplatine.

ABR réactions mesurées chez des rats à trois jours après administration de cisplatine a montré une nette élévation des seuils. Élévation de ces seuils a été significativement réduite chez les rats, administrés en association avec trans-tympanique [R] - N - phénylisopropyladénosine (R-PIA), l’adénosine A1 récepteur agoniste15, avant le cisplatine. La spécificité de l’action de R-PIA à l’adénosine, un récepteur1 a été ...

Nous présentons une technique pour l’administration déconcentrée de drogues par voie trans-tympanique dans la cochlée. Administration de médicaments par le biais de cette route ne serait pas interférer avec l’efficacité de la lutte contre le cancer des médicaments chimiothérapeutiques comme le cisplatine.

TRANS-tympanique de médicaments pour le traitement de l’ototoxicité

The systemic administration of protective agents to treat drug-induced ototoxicity is limited by the possibility that these protective agents could ...

L’objectif global de cette procédure transtympanique est de délivrer localement de fortes concentrations d’antioxydants, d’agents otoprotecteurs ou de réactifs biologiques directement dans la cochlée pour le traitement de la perte auditive. La voie transtympanique d’administration des médicaments permet l’administration localisée de médicaments et d’autres agents dans la cochlée qui peuvent causer des effets secondaires importants s’ils sont administrés par voie systémique. Le principal avantage de cette matière est qu’elle permet l’administration rapide de médicaments à des doses significativement plus élevées dans la cochlée que celles qui seraient obtenues par une administration systémique.Cette technique a le potentiel d’administrer de manière prophylactique des réactifs pour prévenir la perte auditive induite par le cisplatine sans interférer avec l’effet antitumoral. Après avoir confirmé une absence de réponse au pincement de l’orteil, appliquez une pommade sur les yeux du rat. Pour évaluer la réponse auditive du tronc cérébral, placez le rat en position couchée sur un coussin chauffant à 37 degrés Celsius à l’intérieur d’une cabine acoustique contrôlée et insérez une électro

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Cette vidéo présente la canalostomie, une procédure qui permet l’administration locale d’un médicament dans l’oreille interne d’une souris par le canal semi-circulaire avec des dommages minimes à l’audition et à la fonction vestibulaire. Cette méthode permet d'inoculer des vecteurs viraux, des produits pharmaceutiques et de petites molécules dans l'oreille interne de la souris.

Canalostomie pour l’administration locale de médicament dans l’oreille interne d’une souris adulte

Les implants cochléaires (IC) de permettre l'audition par la stimulation électrique directe du nerf auditif. Cependant, la mauvaise fréquence et la résolution d'intensité limite la qualité de l'audience avec les IC. Nous décrivons ici la stimulation optogenetic du nerf auditif chez la souris comme une stratégie alternative pour la recherche et le développement auditif futurs IC.

Stimulation optogenetic du nerf auditif

L’approche chirurgicale post-auriculaire décrite permet une administration rapide et directe dans la rampe tympanique cochléaire de souris tout en minimisant la perte de sang et la mortalité animale. Cette méthode peut être utilisée pour la thérapie cochléaire en utilisant l’administration moléculaire, pharmacologique et virale à des souris postnatales à travers la membrane de la fenêtre ronde.

Méthode chirurgicale pour Virally Mediated Gene livraison à l&#39;oreille de la souris intérieure à travers la membrane de fenêtre ronde

Diverses méthodes existent pour introduire des agents ototoxiques dans les cochlées de modèles animaux. Il s’agit d’un protocole chirurgical pour l’administration d’agents ototoxiques dans la niche de la fenêtre ronde. La procédure est fiable, crée des lésions intra-cochléaires ciblées et évite les dommages mécaniques à la microarchitecture. L’examen de l’auto-réparation/régénération cochléaire est possible.

L&#39;approche de la souris ronde-fenêtre pour ototoxiques Delivery Agent: Un rapide et fiable Technique d&#39;incitation à Cochlear dégénérescence cellulaire

Deux approches de microchirurgie pour l’administration locale de médicament dans l’oreille interne sont décrites ici et comparées en termes d’impact sur les paramètres auditifs, la cytoarchitecture cochléaire et l’expression des marqueurs inflammatoires.

Une étude comparative des médicaments Méthodes de livraison ciblés à l'oreille de la souris intérieure: Bullostomy Versus Transtympaniques Injection

Nous rapportons une méthode chirurgicale d’administrer des médicaments à l’oreille interne d’un primate non humain, l’Ouistiti commun (Callithrix jacchus), par l’intermédiaire de la membrane de la fenêtre ronde.

Une intervention chirurgicale de l’Administration des médicaments à l’oreille interne dans un Non-Human primates commune Ouistiti (Callithrix jacchus)

Nous décrivons ici la procédure canalostomy qui permet la livraison de drogue local dans l’oreille interne de souris adultes et néonatales par le biais du canal semicirculaire avec le minimum de dommages à fonction auditif et vestibulaire. Cette méthode peut être utilisée pour inoculer des vecteurs viraux, de produits pharmaceutiques et de petites molécules dans l’oreille interne de la souris.

Canalostomy comme une approche chirurgicale pour la livraison de drogue Local dans l’oreille interne de souris adultes et néonatales

La stimulation électro-acoustique (EAS) avec des électrodes plus longues peut offrir une couverture cochléaire plus large et divers types de cartes en cas de perte auditive à haute fréquence. La combinaison d’une chirurgie moins invasive, d’électrodes flexibles de la paroi latérale et de l’administration de stéroïdes permet une insertion plus profonde avec peu ou pas de traumatisme chirurgical, ce qui permet une bonne préservation de l’audition.

Amélioration de la couverture cochléaire et de la préservation de l’audition dans les hautes fréquences grâce à la stimulation électroacoustique avec une électrode plus longue

Une procédure d'ablation thermique des tumeurs est décrite. L'ensemble de la procédure est détaillée, y compris la planification pré-traitement et d'imagerie, l'anesthésie, les techniques adjuvantes pour faciliter une approche percutanée, guidage par imagerie du dispositif d'ablation de la tumeur, le traitement post-traitement thermique de soins et de suivi.

Ablation thermique pour le traitement des tumeurs abdominales

Osmotique Drug Delivery à hindlimbs ischémiques et la perfusion de la vascularisation avec Microfil pour Micro-en tomodensitométrie

Découvrez l'administration trans-tympanique de médicaments pour traiter l'ototoxicité induite par la cisplatine chez le rat. Cette méthode permet une délivrance locale directe dans la cochlée avec moins d'effets secondaires systémiques.

TRANS-tympanique de médicaments pour le traitement de l’ototoxicité

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