Name: La Stimulation électrique chronique transcrânienne et Intracortical enregistrement chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 51 s
Description: Apprenez à fabriquer et implanter des électrodes de stimulation transcrânienne chronique chez le rat. Cette méthode permet d'étudier les effets à long terme sur l'activité cérébrale et d'explorer des applications thérapeutiques pour l'épilepsie et la dépression.

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Ce travail a été soutenu par les EU-FP7-ERC-2013-Starting grant (No.337075), le programme « Momentum » de l’Académie hongroise des Sciences (LP2013-62) et la subvention de GINOP-2.3.2-15-2016-00018. Nous remercions Máté Kozák pour documenter la stimulation et l’enregistrement des électrodes et Mihály Vöröslakos des échanges fructueux lors de la conception du protocole.

Toutes les méthodes décrites ici sont conformes aux directives des Communautés européennes Conseil (86/609 ECC) et ont été approuvés par le Comité d’éthique pour la recherche animale à l’Albert Szent-Györgyi médicale et pharmaceutique Center de l’Université de Szeged (XIV/218/2016).
1. fabrication des électrodes de Stimulation
<ol><li>Pour faire une stimulation électrode, coupez six pièces de long de 10 cm de fils de branchement miniature, enlever 2 cm de la gaine sur une extrémité et 1 cm sur l’autre extrémité.</li>
	<li>Torsadez les deux câbles et souder sur le côté Pelé plus court.</li>
	<li>Acquérir une bande de trois emballages de bande de n’importe quel circuit intégré avec boîtier SOT-353.</li>
	<li>Piquer les fils torsadés dans les trois trous du package. Le segment le plus Pelé des fils doit être dans les cavités du package. Positionner les câbles afin que la fin de l’isolement est aligné avec le bord des trous.</li>
	<li>Mettre le ciment dentaire sur les trous pour fixer les fils. ATTENTION : Le ciment dentaire doit être suffisamment dense pour éviter les fuites dans la cavité du package.</li>
	<li>Une fois que le ciment est solidifiée (minimum 10 min), retournez l’emballage et mettez une fine couche de colle dans le trou pour former un joint d’étanchéité vers le ciment poreux. Éviter de coller les fils pelées.</li>
	<li>Torsadez les câbles sur le côté le plus court Pelé et souder (Figure 1 a).</li>
	<li>Prenez le segment le plus Pelé des fils avec le bout des pinces fines, roulez-les autour et les envelopper dans les cavités (Figure 1 b). Couper l’excédent de câble, si nécessaire.</li>
</ol>2. fabrication des électrodes enregistrement
<ol><li>Pour faire un enregistrement vu électrode de triplet (Figure 1-D), couper un morceau long d’un cm de tube d’acier inoxydable à l’aide du rotary à grande vitesse. Enlever l’aileron de l’extrémité du tube avec une aiguille fine, puis assurez-vous que le tube est complètement perméable et exempt de débris. Remarque : Ne pas utiliser de pinces, car ils déformeront le tube.</li>
	<li>Plier une épingle d’entretoise plaquée or Conseil avec une longueur minimale de 3 cm pour former un support J-forme. Couper la jambe plus longue de la forme de « J » et les souder ensemble pour récupérer la forme originale de réaliser une jonction amovible entre la partie de temps linéaire, qui se déroulera sous l’appareil stéréotaxique, et la forme de « U », qui va tenir l’électrode et servir de point d’ancrage . Coller le tube et la jambe courte du titulaire « J ». Coller quelques longues barres supplémentaires de 1 cm, si nécessaire, pour la stabilité.</li>
	<li>Couper 3 morceaux de fils électrodes longues 2,5 cm avec l’acier inoxydable, ciseaux ultrafines. Assurez-vous que c’est une coupe claire et nette, et l’isolation est intacte à la surface circulaire du fil électrode. Veillez également à ce que l’extrémité coupée n’est pas pliée à cause de la force appliquée. Plier 1 ou 2 mm à une extrémité de chacun des fils à des angles différents (par exemple, une droite gauche, un 45 ° et un angle droit) pour les rendre reconnaissable.</li>
	<li>Remplir le tube avec les fils, choisissez un espacement approprié des électrodes pour l’expérience (par exemple, pour cortical potentiel de champ local (LFP) et l’actuelle source densité (CSD) enregistrement, la saillie recommandée des extrémités des fils de la ouverture du tube : 3,7 mm, 4,5 mm et 4,1 mm respectivement). Remarque quel fil correspond à quelle profondeur pour maintenir l’ordre sur un canal approprié.</li>
	<li>Une fois les fils alignement à droite à côté de l’autre et sont parallèles avec le tube, pour fixer les fils de l’électrode, placez une seule goutte de superglue liquide aux deux extrémités du tube avec une aiguille fine. Veillez à ce que la colle s’écoule dans le tube en raison de l’effet de capillarité, mais pas vers les sites d’enregistrement aux extrémités saillantes.</li>
	<li>Préparer une carte d’interface électrode avec un bon microconnector compatible avec le système d’enregistrement à utiliser.</li>
	<li>Introduire les extrémités non enregistrement, tordues des fils dans les trous de la carte d’interface électrode correspondant à la chaîne d’enregistrement désiré. Lorsque tous les fils sont en position, poussez les broches en or dans les trous avec des pincettes. NOTE : Épingles d’or peuvent être fixés en place à l’aide de ciment dentaire, mais dans la plupart des cas, il est assez stable même sans cette étape de sécurité.</li>
</ol>3. l’anesthésie
<ol><li>Placer l’animal dans une chambre à induction anesthésie scellé et remplissez-le avec 4-5 % d’isoflurane à 2 L/min d’air médical.</li>
	<li>Lorsque le rat est couché, retirer l’animal de la chambre et le placer dans un cadre stéréotaxique avec un morceau de nez de ventilation appropriée.</li>
	<li>Définissez le niveau de l’isoflurane à 2 %, bien que le taux de flux d’air reste le même. Vérifiez le niveau de l’anesthésie. S’il y a une absence du réflexe de retrait de patte en réponse à pincer, continuer, sinon d’augmenter la profondeur de l’anesthésie.</li>
	<li>Surveiller et maintenir la température corporelle du rat à 37 ° c ± 0,5 ° C, avec un système de surveillance homéothermes. Appliquer une goutte d’onguent de paraffine sur les yeux pour éviter le dessèchement de la cornée. Répétez cette procédure pendant l’opération plusieurs fois, si nécessaire.</li>
	<li>Injecter par voie sous-cutanée de 0,3 mg/kg l’atropine pour éviter la formation de mucus dans les voies respiratoires. Répétez cette procédure toutes les quatre heures dans le cas de chirurgies plus longtemps. Surveiller la respiration et régler le vaporisateur, si nécessaire.</li>
</ol>4. implantation de la Stimulation et les électrodes d’enregistrement
NOTE : Autoclave tout le nécessaire surgical instruments et suivre attentivement les règles générales de l’asepsie et l’antisepsie pendant toute la procédure. Évitez de toucher les zones non stériles à l’extérieur de la zone chirurgicale. Plonger les électrodes dans l’alcool éthylique (70 %) pendant 30 min avant l’implantation.
<ol><li>Supprimer la plupart des cheveux sur le cuir chevelu avec une tondeuse à cheveux. Appliquez la crème dépilatoire sur le cuir chevelu, étalez-la sur la surface et attendre quelques minutes. Utilisez une spatule pour retirer délicatement la crème et les cheveux restant. Rincer la peau avec de l’eau, puis avec le désinfectant.</li>
	<li>Injecter 1-2 % de lidocaïne (ne pas dépasser une dose totale de 7 mg/kg) par voie sous-cutanée pour engourdir la peau. Appliquer une goutte de pommade vétérinaire pour les yeux (p. ex., paraffine).</li>
	<li>Faites une profondeur et une incision sagittale de long (environ 2 cm) à la ligne médiane avec un scalpel, depuis le front jusqu'à la nuque. Disséquer les tissus, y compris le périoste du crâne, puis à l’aide d’une pince à épiler ciseau ou dent de nettoyer la zone située entre les crêtes des deux OS temporaux. Gardez le crâne exposé en rétractant la peau disséquée en utilisant quatre bulldogs.</li>
	<li>Doucement, placer des pinces fines entre le bord escarpé de l’OS temporal et les muscles et les séparer. Faire des mouvements à la turlutte pour exposer comme une grande partie de la grande surface de l’OS temporal que possible, de préférence à partir du bord de l’os occipital au plan de la suture coronale, sans endommager les muscles.</li>
	<li>Placer bitemporally de rétracteurs pour garder l’OS temporal exposés.</li>
	<li>Rincer la surface du crâne avec 1 à 2 mL 3 % H2O2, puis laver à l’eau 1 à 2 mL.</li>
	<li>Sécher la surface de l’OS temporal avec beaucoup d’attention, éponger l’humidité avec des bâtons oculaires. Tester si les électrodes de stimulation s’insère sur la surface nettoyée crâne verticale (le bord supérieur de l’électrode de stimulation doit être aligné avec le bord de la crista de l’OS temporal). Rétablissez les bulldogs et les enrouleurs ou façonner des électrodes de stimulation avec des ciseaux, si nécessaire.</li>
	<li>Remplir les cavités de la stimulation électrodes avec électroconducteurs gel et mettent une fine couche de colle sur le rebord des électrodes.</li>
	<li>Placer l’électrode de stimulation sur la surface sèche de l’OS temporal avec un mouvement précis et maintenir fermement en place pendant une minute avec des pinces fines. S’assurer que l’humidité ne soit en contact avec la colle. Éponger avec des bâtons oculaires, si nécessaire. ATTENTION : dans le cas où une instabilité de l’électrode est vécue, supprimez-le. Après le nettoyage de l’OS, répétez cette étape avec une nouvelle électrode de stimulation.</li>
	<li>Mettre le ciment dentaire sur les bords de l’électrode de stimulation, tandis que l’humidité qui fuient des tissus est tarie en continu avec des bâtons oculaires. Couvrir l’électrode de stimulation ensemble avec du ciment.</li>
	<li>Après que le ciment est complètement trempé, répétez ces étapes sur le côté controlatéral.</li>
	<li>Percer des trous partout dans le crâne pour vis d’ancrage. Vis miniature en voiture dans les trous et mis le ciment dentaire sur eux. Utiliser un plus petit diamètre d’environ 10 % percer la tête par rapport au diamètre de la vis.</li>
	<li>Selon le but des expériences, soit souder un connecteur vers les extrémités des câbles, placez-le sur la surface, puis le couvercle avec du ciment, ou continuer à implanter les électrodes d’enregistrement et les fibres optiques ou préparer une fenêtre crânienne sur le crâne. Dans ce dernier cas, souder les connecteurs et les ancrer à la construction qu’à la fin. Dans le cas de la nécessité des enregistrements à long terme de TES et LFP simultanés, implanter les triplets de ladite électrode au lieu du fils unique. Remarque : Cette configuration permet l’élimination du commun mode stimulation artefacts8. Pour les détails de l’implantation d’électrodes d’enregistrement, consultez précédents protocoles14,15.</li>
	<li>Laver les tissus exposés abondamment avec du désinfectant. Injecter 1-2 % de lidocaïne (ne pas dépasser une dose totale de 7 mg/kg) par voie sous-cutanée.</li>
	<li>Débrider les bords de la plaie et fermez-les avec des sutures interrompus simples autour du connecteur/implant. Désinfecter la plaie avec la povidone iodée.</li>
	<li>Injecter le carprofene 5 mg/kg par voie sous-cutanée. Répétez cette opération si nécessaire. Remarque : N’importe quel autres analgésiques peuvent être utilisés en atteindre les exigences établies par le Conseil des autorisations éthiques locales.</li>
	<li>Suspendre l’anesthésie, l’earbars et l’embout de sortie et mettre l’animal dans une cage de récupération post-opératoire à reprendre conscience.</li>
	<li>S’assurer que l’animal est sous étroite surveillance pendant les premières heures postopératoires. Continuer de surveiller la zone d’implant périodiquement. Remarque : L’animal ne doit pas être laissé sans surveillance jusqu'à ce qu’il a repris connaissance suffisante pour maintenir le décubitus sternal. Maison l’animal individuellement jusqu'à la guérison complète de la procédure.</li>
</ol>

<ol><li>Ozen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+electric+stimulation+entrains+cortical+neuronal+populations+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Transcranial electric stimulation entrains cortical neuronal populations in rats.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (34), 11476-11485 (2010).</li>
<li>Ali, M. M., Sellers, K. K., Frohlich, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+alternating+current+stimulation+modulates+large-scale+cortical+network+activity+by+network+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Transcranial alternating current stimulation modulates large-scale cortical network activity by network resonance.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (27), 11262-11275 (2013).</li>
<li>Helfrich, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entrainment+of+brain+oscillations+by+transcranial+alternating+current+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+biology+%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Entrainment of brain oscillations by transcranial alternating current stimulation.</a> Current biology : CB. 24 (3), 333-339 (2014).</li>
<li>Bikson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+direct+current+stimulation+for+major+depression%3A+a+general+system+for+quantifying+transcranial+electrotherapy+dosage%5BTitle%5D)+AND+%22Current+treatment+options+in+neurology%22%5BJournal%5D)">Transcranial direct current stimulation for major depression: a general system for quantifying transcranial electrotherapy dosage.</a> Current treatment options in neurology. 10 (5), 377-385 (2008).</li>
<li>Lefaucheur, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+guidelines+on+the+therapeutic+use+of+transcranial+direct+current+stimulation+%28tDCS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+neurophysiology+%3A+official+journal+of+the+International+Federation+of+Clinical+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Evidence-based guidelines on the therapeutic use of transcranial direct current stimulation (tDCS).</a> Clinical neurophysiology : official journal of the International Federation of Clinical Neurophysiology. 128 (1), 56-92 (2017).</li>
<li>Kuo, M. F., Nitsche, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+transcranial+electrical+stimulation+on+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+EEG+and+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of transcranial electrical stimulation on cognition.</a> Clinical EEG and neuroscience. 43 (3), 192-199 (2012).</li>
<li>Sandrini, M., Fertonani, A., Cohen, L. G., Miniussi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double+dissociation+of+working+memory+load+effects+induced+by+bilateral+parietal+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychologia%22%5BJournal%5D)">Double dissociation of working memory load effects induced by bilateral parietal modulation.</a> Neuropsychologia. 50 (3), 396-402 (2012).</li>
<li>Berenyi, A., Belluscio, M., Mao, D., Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-loop+control+of+epilepsy+by+transcranial+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Closed-loop control of epilepsy by transcranial electrical stimulation.</a> Science. 337 (6095), New York, N.Y. 735-737 (2012).</li>
<li>Kozak, G., Berenyi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+efficacy+of+closed+loop+electrical+stimulation+for+long-term+treatment+of+absence+epilepsy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Sustained efficacy of closed loop electrical stimulation for long-term treatment of absence epilepsy in rats.</a> Scientific reports. 7 (1), 6300(2017).</li>
<li>Fertonani, A., Ferrari, C., Miniussi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+do+you+feel+if+I+apply+transcranial+electric+stimulation%3F+Safety%2C+sensations+and+secondary+induced+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+neurophysiology+%3A+official+journal+of+the+International+Federation+of+Clinical+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">What do you feel if I apply transcranial electric stimulation? Safety, sensations and secondary induced effects.</a> Clinical neurophysiology : official journal of the International Federation of Clinical Neurophysiology. 126 (11), 2181-2188 (2015).</li>
<li>Marshall, L., Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+transcranial+oscillatory+stimulation+to+research+on+neural+networks%3A+an+emphasis+on+hippocampo-neocortical+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+human+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Contribution of transcranial oscillatory stimulation to research on neural networks: an emphasis on hippocampo-neocortical rhythms.</a> Frontiers in human neuroscience. 7, 614(2013).</li>
<li>Reato, D., Rahman, A., Bikson, M., Parra, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+weak+transcranial+alternating+current+stimulation+on+brain+activity-a+review+of+known+mechanisms+from+animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+human+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of weak transcranial alternating current stimulation on brain activity-a review of known mechanisms from animal studies.</a> Frontiers in human neuroscience. 7, 687(2013).</li>
<li>Thut, G., Miniussi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+rhythmic+brain+activity+from+TMS-EEG+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+cognitive+sciences%22%5BJournal%5D)">New insights into rhythmic brain activity from TMS-EEG studies.</a> Trends in cognitive sciences. 13 (4), 182-189 (2009).</li>
<li>Gage, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+implantation+of+chronic+neural+electrodes+for+recording+single+unit+activity+and+electrocorticographic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Surgical implantation of chronic neural electrodes for recording single unit activity and electrocorticographic signals.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (60), (2012).</li>
<li>Vandecasteele, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+recording+of+neurons+by+movable+silicon+probes+in+behaving+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Large-scale recording of neurons by movable silicon probes in behaving rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (61), e3568(2012).</li>
<li>Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+Continuous+EEG+Monitoring+in+Small+Rodent+Models+of+Human+Disease+Using+the+Epoch+Wireless+Transmitter+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (101), e52554(2015).</li>
<li>Ung, K., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber-optic+implantation+for+chronic+optogenetic+stimulation+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Fiber-optic implantation for chronic optogenetic stimulation of brain tissue.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (68), e50004(2012).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+craniotomy+surgery+procedure+for+chronic+brain+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (12), (2008).</li>
</ol>

Antal Berényi est le propriétaire et fondateur de Amplipex Ltd, une société de fabrication à grande échelle multiplexage biosignal amplificateurs. Gábor Kozák et Tamás Földi n’ont rien à divulguer.

L’étape la plus critique du présent protocole est le collage de l’ensemble de l’électrode sur la surface osseuse. Dans le cas d’une mauvaise étanchéité, un espace se forme entre les électrodes et l’os et du tissu cicatriciel secondaire peut se transformer en cet écart, ce qui diminue la qualité de la stimulation. La surface osseuse doit être complètement sec au cours des étapes de coller sur le colis, et dans le cas touchés par l’instabilité des électrodes, il doit être supprimé et remplacé par un nouveau package pour ob...

La stimulation transcrânienne électrique (TES) est une approche méthodologique précieuse d’influencer l’activité cérébrale de façon limitée dans le temps. Selon la taille et le positionnement des électrodes de stimulation, TES peut affecter les volumes gros cerveau et monter les populations neuronales diffusément1,2,3. La stimulation transcrânienne courant continu est déjà médicalement approuvée pour le traitement du trouble dépressif majeur4,5et de nombreuses études mettant l’accent sur montrant les effets cognitifs de la stimulation transcrânienne dans les humains6 , 7. en outre, promettant des résultats ont été rapportés concernant le potentiel de TES dans le contrôle des crises d’épilepsie8,9.
Malgré les recherches intensives, il existe encore de nombreuses questions en suspens concernant les modalités d’action, effets secondaires et les résultats à long terme de l’application de cette méthode10,11,12. Par conséquent, il est extrêmement important d’avoir un protocole fiable et reproductible pour étudier les effets de TES dans des modèles animaux. Étant donné que de nombreux troubles (par exemple, la dépression, l’épilepsie et la schizophrénie) peuvent seulement être étudiées chez des animaux éveillés, et la nature de ces conditions médicales nécessitent généralement le traitement à long terme, nous fournissons un protocole pour la chronique implantation d’électrodes transcrânienne chez les rats. La méthode présentée ici peut être utilisée pour les études comportementales ou peut être combinée avec l’implantation d’électrodes d’enregistrement(p. ex., fils, silicone sondes, électrodes juxtacellular) ou avec des fenêtres crâniennes chroniques pour des expériences électrophysiologiques et imagerie, respectivement. Selon le protocole expérimental, le timing des stimuli peut être aléatoire ou déclenchés par l’événement aux signaux comportements spécifiques, ou pour les marques électrophysiologiques du cerveau particulier États (convulsions, oscillations thêta)8, 11 , 13.
Il est important de mentionner que contrairement à l’approche humaine utilisé actuellement, qui utilise un mode de réalisation d’électrodes placées sur la peau, nous montrons ici une méthode qui utilise le droit de l’implantation sous-cutanée sur la surface de l’OS temporal, depuis des rats à peine tolérer quoi que ce soit placé sur leur peau qui est facilement accessible à l’aide de leurs pattes.
Conformément aux principes de remplacement, réduction et raffinement, en raison de la chronicité de l’implantation, cette méthode permet de réduire le nombre d’animaux, étant donné que chaque animal peut être recruté dans différentes conditions expérimentales pendant des mois, ce qui permet l’utilisation de moins d’animaux pour tester différentes hypothèses.
Dans la présente étude, nous fournissons un protocole détaillé, étape par étape de l’électrode de stimulation transcranienne fabrication (Figure 1 a-B) et démontrer l’implantation chronique de ces électrodes sur l’OS temporal d’un six-month-old rats Long-Evans mâles.

<table><tbody><tr><td>Cyanoacrylate liquide</td><td>Henkel</td><td>Loctite 401</td><td></td></tr><tr><td>Gel cyanoacrylate</td><td>Henkel</td><td>Loctite 454</td><td></td></tr><tr><td>Fil pour électrodes de stimulation</td><td>Phoenix Wire Inc.</td><td>36744MHW - PTFE Microminiature Hook-Up Wire</td><td></td></tr><tr><td>Board Spacer</td><td>E-tec Interconnect</td><td>SP1-020-S378/01-55</td><td></td></tr><tr><td>Connecteur</td><td>E-tec Interconnect</td><td>P2510I-02</td><td></td></tr><tr><td>Emballage de ruban pour électrodes de stimulation</td><td>Nexperia</td><td>74HC1G00GW</td><td>L’emballage de ruban de n’importe quel circuit intégré avec boîtier SOT-353 peut être utilisé</td></tr><tr><td>Grip Cement Caulk de qualité industrielle</td><td>Dentsply</td><td>675571 (poudre) 675572 (solvant)</td><td></td></tr><tr><td>Gel électroconducteur</td><td>Rextra</td><td>ECG Gel</td><td></td></tr><tr><td>Fil d’électrode d’enregistrement</td><td>California Fine Wire Co.</td><td>.002 (50 microns) Tungstène 99,95 % (CFW Matériau # : 100-211), HMl-Natural, coupé en morceaux de 3,0 pouces, rond, coupe de la longueur du fil</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux ultrafins Ciseaux ultrafins</td><td>Hammacher Instrumente</td><td>Stainless HSB 544-09</td><td></td></tr><tr><td>Tube en acier inoxydable</td><td>Vita Needle Company</td><td>29 RW, 304SS Tubing, T.I.G. Welded and Plug</td><td></td></tr><tr><td>Scie rotative à grande vitesse</td><td>Dremel</td><td>Modèle # 395</td><td></td></tr><tr><td>Porte-scie rotative</td><td>Dremel</td><td>Modèle # 220</td><td></td></tr><tr><td>Scie rotative Disque à tronçonner</td><td>Dremel</td><td>Modèle # 409</td><td></td></tr><tr><td>Bâtonnets oculaires</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td>Pro-ophta Sticks</td><td></td></tr><tr><td>Désinfectant humide</td><td>Egis</td><td>Betadine</td><td></td></tr><tr><td>Désinfectant sec</td><td>Wagner Pharma</td><td>Reseptyl-urée Perceuse</td><td></td></tr><tr><td></td><td>NSK-Nakanishi Royaume-Uni</td><td>Vmax35RV Pack</td><td></td></tr><tr><td>Vis d’ancrage</td><td>Antrin Miniature Specialties, Inc.</td><td>000-120X1/16 SL BIND MS SS</td><td></td></tr></tbody></table>

la stimulation électrique chronique transcrânienne et intracortical enregistrement chez le rat

Chronic Transcranial Electrical Stimulation and Intracortical Recording in Rats

La stimulation transcrânienne électrique (TES) est une approche relativement simple et puissante pour diffusément influent sur l’activité cérébrale au hasard ou de façon boucle fermée a déclenché l’événement. Bien que de nombreuses études mettent l’accent sur les avantages et les effets secondaires de TES dans les cerveaux sains et pathologiques, il existe encore de nombreuses questions en suspens fondamentale concernant le mécanisme d’action de la stimulation. Par conséquent, il est clairement nécessaire pour une méthode fiable et reproductible pour tester les aigus et les effets chroniques de TES chez les rongeurs. TES est cumulable avec les techniques comportementales et électrophysiologiques d’imagerie réguliers d’enquêter sur les réseaux neuronaux en vivo. L’implantation d’électrodes de stimulation transcrânienne n’impose pas des contraintes supplémentaires sur la conception expérimentale, alors qu’il offre un outil polyvalent et flexible pour manipuler l’activité cérébrale. Ici, nous fournissons un protocole détaillé, étape par étape pour fabriquer et implanter des électrodes de stimulation transcranienne pour influencer l’activité cérébrale de façon limitée dans le temps pendant des mois.

L’implantation d’électrodes de stimulation chronique (Figure 1 b) peut être associée d’implantation additionnelle d’enregistrement des électrodes (Figure 1-D). Ces réglages sont adaptés former l’enregistrement à la demande et les systèmes de stimulation d’interférer avec les activités spécifiques du cerveau. Nous présentons ici les résultats représentatifs d’une détection de boucle fermée l’épilepsie et le systèm...

Ce protocole détaillé décrit le placement des électrodes stimulation transcrânienne sur l’OS temporal afin d’étudier les effets à court et à long terme de stimulation électrique transcranienne en se déplaçant librement des rats.

La Stimulation électrique chronique transcrânienne et Intracortical enregistrement chez le rat

Transcranial electrical stimulation (TES) is a powerful and relatively simple approach to diffusely influence brain activity either randomly or in a ...

L’objectif global de cette procédure est de montrer un protocole étape par étape pour fabriquer et implanter des électrodes de stimulation transcrânienne chronique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neurostimulation, telles que les effets à long terme de la stimulation électrique transcrânienne diffuse ciblée dans le temps. Le principal avantage de cette technique est que la petite taille de l’implant permet de la combiner avec des techniques électrophysiologiques, optogénétiques et d’imagerie régulières chez des animaux se déplaçant librement.Les implications de cette technique sont centrées sur le traitement de l’épilepsie, de la dépression et d’autres troubles neuropsychologiques, car elle est capable d’influencer rapidement les réseaux cérébraux à grande échelle. Pour fabriquer une électrode de stimulation, coupez six morceaux de fils de connexion miniatures de 10 centimètres de long. Retirez deux centimètres de revêtement à une extrémité et un centimètre à l’autre extrémité.Ensuite, tordez deux câbles ensemble et soudez-les avec le côté pelé le plus court. Ensuite, procurez-vous une bande de trois emballages de bande de n’importe quel circuit intégré avec boîtier SOT-353. Cousez les fils torsadés à travers les trois trous du colis.Le segment pelé le plus long des fils doit se trouver dans les cavités de l’emballage. Positionnez le câble de manière à ce que l’extrémité de l’isolant soit alignée avec le bord des trous. Ensuite, appliquez du ciment dentaire sur les trous pour fixer les fils.Une fois le ciment solidifié, retournez l’emballage pour introduire une fine couche de super colle dans le trou afin de former un joint de type eau vers le ciment poreux. Évitez de coller les fils pelés. Après cela, tordez les câbles ensemble sur le côté pelé le plus court et soudez-les.Saisissez le segment pelé le plus long des fils avec la pointe d’une pince à épiler fine. Roulez-les et enroulez-les dans les cavités. Coupez l’excédent de câble si nécessaire.Pour fabriquer une électrode triplet d’enregistrement, coupez un morceau de tube en acier inoxydable d’un centimètre de long à l’aide d’une scie rotative à grande vitesse. Retirez l’ailette des extrémités du tube à l’aide d’une aiguille pointue et assurez-vous que le tube est exempt de débris et complètement perméable. Pliez la goupille d’espacement de la planche plaquée or d’une longueur minimale de trois centimètres pour former un support en forme de J.Coupez la branche la plus longue de la forme en J et soudez-la ensemble pour récupérer la forme d’origine afin de faire un joint détachable entre la partie linéaire longue, qui sera maintenue par le dispositif stéréotaxique, et la forme en U, qui maintiendra l’électrode et servira de point d’ancrage. Ensuite, collez le tube et la jambe la plus courte du support en J ensemble. Collez quelques barres supplémentaires d’un centimètre de long si nécessaire pour la stabilité.Ensuite, coupez trois morceaux de fils d’électrode de 2,5 centimètres de long avec des ciseaux ultra-fins en acier inoxydable. Assurez-vous qu’il s’agit d’une coupe nette et nette et que l’isolation est intacte à la surface circulaire du fil d’électrode. Assurez-vous également que la pointe coupée n’est pas pliée en raison de la force appliquée.Pliez un ou deux millimètres à une extrémité de chacun des fils à des angles différents pour les rendre distincts. Ensuite, remplissez le tube avec les fils et choisissez un espacement approprié des électrodes pour l’expérience. Notez quel fil correspond à quelle profondeur pour maintenir un ordre correct des canaux.Une fois que les fils s’alignent l’un à côté de l’autre et sont parallèles au tube, fixez les fils d’électrode en plaçant une seule goutte de super colle liquide aux deux extrémités du tube avec une aiguille pointue. Assurez-vous que la colle s’écoule dans le tube en raison de l’effet capillaire, mais pas vers les sites d’enregistrement aux extrémités saillantes. Préparez une carte d’interface d’électrode avec un micro-connecteur approprié compatible avec un système d’enregistrement à utiliser.Ensuite, introduisez les extrémités pliées des fils dans les trous de la carte d’interface d’électrode correspondant au canal d’enregistrement souhaité. Lorsque tous les fils sont en place, enfoncez les goupilles dorées dans les trous avec une pince à épiler. Dans cette procédure, retirez la plupart des poils du cuir chevelu de l’animal à l’aide d’une tondeuse à cheveux.Ensuite, appliquez une crème dépilatoire sur le cuir chevelu. Étalez-le uniformément sur la surface et attendez quelques minutes. À l’aide d’une spatule, retirez délicatement la crème et les cheveux restants.Rincez la peau avec un désinfectant. Injecter 1 à 2 % de lidocaïne par voie sous-cutanée pour engourdir la peau. Ensuite, appliquez une seule goutte de pommade vétérinaire sur chaque œil.Faites une incision sagittale profonde et longue le long de la ligne médiane avec un scalpel du front vers le cou. Par la suite, disséquez les tissus, y compris le périoste, du crâne. Ensuite, à l’aide d’un ciseau ou d’une pince à dents, nettoyez la zone entre les crêtes des deux os temporaux.Gardez le crâne exposé en rétractant la peau disséquée à l’aide de quatre bouledogues. Placez doucement la pince à épiler fine entre le bord raide de l’os temporal et les muscles et séparez-les. Faites des mouvements de secousse pour exposer autant que possible la grande surface de l’os temporal, de préférence du bord de l’os occipital au plan des sutures coronales sans endommager les muscles.Ensuite, placez les écarteurs bi-temporalement pour garder les os temporaux exposés. Rincez la surface du crâne avec un à deux millilitres de peroxyde d’hydrogène à 3 %. Ensuite, lavez-le très soigneusement avec un à deux millilitres d’eau et laissez la surface des os temporaux éponger l’humidité avec des bâtonnets oculaires.Ensuite, testez si les électrodes de stimulation s’adaptent à la surface verticale du crâne nettoyée. Le bord supérieur de l’électrode de stimulation doit être aligné avec le bord de la crête de l’os temporal. Réajustez les bouledogues et les écarteurs, ou façonnez les électrodes de stimulation avec des ciseaux, si nécessaire.Ensuite, remplissez les cavités des électrodes de stimulation avec du gel électroconducteur. Et mettez une fine couche de colle sur le bord des électrodes. Placez l’électrode de stimulation sur la surface sèche de l’os temporal d’un mouvement précis et maintenez-la fermement en place pendant une minute à l’aide d’une pince à épiler.Assurez-vous qu’aucune humidité n’est en contact avec la colle et épongez avec des bâtonnets oculaires si nécessaire. Assurez-vous que l’électrode de stimulation est uniformément collée à l’os temporal sec. Épongez fréquemment l’humidité et rétractez soigneusement les tissus environnants.Demandez de l’aide si nécessaire. Après cela, appliquez du ciment dentaire sur les bords de l’électrode de stimulation pendant que l’humidité qui s’échappe des tissus est continuellement séchée avec des bâtonnets oculaires. Couvrez toute l’électrode de stimulation avec du ciment.Une fois que le ciment a complètement durci, répétez ces étapes du côté controlatéral. Par la suite, à l’aide d’une tête de forage de 10 % plus petite que le diamètre de la vis, percez des trous sur tout le crâne pour l’ancrage des vis. Enfoncez des vis miniatures dans les trous et appliquez du ciment dentaire dessus.Ensuite, poursuivez l’implantation des électrodes d’enregistrement. Soudez les connecteurs et ancrez-les à la construction à l’extrémité. Ensuite, lavez abondamment les mouchoirs exposés avec un désinfectant.Injecter 1 à 2 % de lidocaïne par voie sous-cutanée. Ensuite, pour reconstituer les bords de la plaie, entourez-les de simples sutures interrompues autour de l’implant connecteur. Par la suite, désinfectez la plaie avec de la povidone iodée.Ici, nous montrons les résultats représentatifs d’un système de détection et d’intervention des crises d’épilepsie en boucle fermée, appliqué sur des rats Long-Evans, exprimant des crises spontanées. Ce train est connu pour montrer les symptômes comportementaux dans les modèles électrographiques de l’épilepsie d’absence, appelée décharge de pointe et d’onde. Voici les traces LFP de l’intervention convulsive, démontrant la performance stable des stimuli ciblés temporellement dans l’interruption des crises pendant 16 semaines.Cela démontre la robustesse et la fiabilité des électrodes de stimulation implantées. Pour mettre ces résultats en contexte, voici l’enregistrement d’une expérience avortée où du tissu secondaire s’est développé entre l’os temporal et la surface de l’électrode, en raison de l’étanchéité et de la cimentation inadéquates des électrodes. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’implanter des électrodes de stimulation transcrânienne.Suite à cette procédure, d’autres méthodes telles que l’implantation d’électrodes d’enregistrement ou de fenêtres crâniennes peuvent être effectuées afin d’enregistrer différentes modalités pendant la stimulation.

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