Name: Observation et analyse de clignement diffusion Raman exaltée de Surface (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: Découvrez l'analyse du clignotement en diffusion Raman exaltée de surface pour étudier le comportement des molécules uniques sur des surfaces métalliques. Cette méthode permet d'observer simultanément plusieurs spots clignotants.

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L’auteur remercie le Prof. Y. Ozaki (Kwansei Gakuin University) et Dr T. Itoh (National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) pour leur discussion fructueuse de ce travail. Ce travail a été soutenu par KAKENHI (subvention pour la recherche scientifique C) depuis le ministère de l’éducation, Culture, Sports, Science et technologie (no 16K 05671).

1. préparation de l’échantillon
<ol><li>
Préparation de nanoparticules d’argent colloïdales 20<ol>
<li>Pour fabriquer des nanoparticules d’argent colloïdales, dissoudre 0,030 g de nitrate d’argent et 0,030 g de citrate de sodium dihydraté dans 150 mL d’eau dans un ballon à fond rond de 200 mL.</li>
		<li>Combiner la fiole avec un réfrigérant à reflux (Dimroth).</li>
		<li>Agiter la solution dans le ballon d’un agitateur magnétique. Ensuite, faire chauffer la solution en remuant dans la fiole dans un bain d’huile à 150 ° C pendant 60 min. Remarque : La solution devient jaune, puis laiteux gris.</li>
		<li>Laisser refroidir la suspension à la température ambiante et garder la suspension dans le flacon, recouvert de papier d’aluminium dans un réfrigérateur. Remarque : Le protocole peut être suspendu à ce stade. Utilisez les nanoparticules colloïdales, après avoir entreposé au réfrigérateur, dans le mois.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Préparation de l’échantillon pour multicolores clignotant d’émission 11<ol>
<li>Prêt d’une lame de microscope, laver avec du savon, une plaque de verre à la main et rincez-le à l’eau.</li>
		<li>Ajouter 0,1 % solution aqueuse de poly-L-lysine à la plaque de verre et supprimer la solution avec un ventilateur.</li>
		<li>Ajouter l’argentée suspension colloïdale à la plaque de verre et supprimer la suspension à l’air comprimé.</li>
		<li>Délimitent une zone de déposer sur la plaque de verre avec un stylo liquide bloqueur.</li>
		<li>Laisser tomber de l’eau distillée sur la plaque de verre et couvrir avec une autre plaque de verre pour créer une lame de microscope et empêcher l’eau de s’évaporer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Préparation de l’échantillon pour SERS clignotant couleur monotone 7 , 8 , 9 , 10<ol>
<li>Prêt d’une lame de microscope, laver avec du savon, une plaque de verre à la main et rincez-le à l’eau.</li>
		<li>Mélanger la suspension colloïdale argentée avec thiacyanine ou thiacarbocyanine du colorant (25 ou 4 µM, respectivement) et une solution aqueuse de NaCl (10 mM) dans un rapport de volume de 2:1:1.</li>
		<li>Laisser tomber la suspension de l’échantillon sur la plaque de verre et supprimer la suspension à l’air comprimé.</li>
		<li>Délimitent une zone de déposer sur la plaque de verre avec un stylo liquide bloqueur.</li>
		<li>Laisser tomber une solution aqueuse de NaCl (1 M) sur la plaque de verre pour immobiliser les nanoparticules d’argent et le couvrir avec une autre plaque de verre pour créer un disque de glissement du microscope et empêcher l’évaporation de la solution.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. observation de clignotement des nanoparticules d’argent
<ol><li>
Illumination de l’échantillon
	<ol>
<li>Placer la plaque de verre échantillon préparée en utilisant le protocole 1.2 ou 1.3 sur la scène d’un microscope inversé.</li>
		<li>Éclairer la plaque de verre d’échantillon à l’aide de la lumière blanche à travers un condenseur de champ sombre et de se concentrer sur différents spots de couleurs (bleus, verts, jaunes et rouges) sur la plaque de verre à l’aide d’une lentille d’objectif (60 X).</li>
		<li>Éclairer la plaque de verre d’échantillon à l’aide d’un faisceau atténué, livré à un angle de 30° par rapport à la surface de l’échantillon, d’un laser à diode pompé à l’état solide (DPSS) onde continue (cw) à travers un filtre d’interférence.</li>
		<li>Pour l’illumination laser permet d’observer l’argent nanoaggrégats comme des taches de couleur monotones dans un entourage de même couleur, déplacer la zone d’illumination laser vers le centre de la vue et se concentrer sur les taches sur la plaque de verre en ajustant la scène dans la direction z.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Observation de clignotement
	<ol>
<li>Insérer un filtre passe-longue après la lentille de l’objectif et éclairer la plaque de verre d’échantillon à l’aide d’un faisceau de cw-laser DPSS envoyée à un angle de 30° par rapport à la surface de l’échantillon à travers un filtre d’interférence.</li>
		<li>Trouver le clignotement taches tel qu’illustré à la Figure 1 (voir aussi Figure S1 dans les documents supplémentaires) en déplaçant la scène dans les directions x et y.</li>
		<li>Enregistrer des vidéos des taches clignotantes avec le microscope inversé, couplé à une caméra refroidie numérique couplé dispositif de charge (CCD), qui a une résolution temporelle de 61 à 120 ms, pendant 20 min.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. analyse de clignement SERS
<ol><li>
Dérivation de courbe de temps de vidéo
	<ol>
<li>Dans le logiciel qui contrôle la caméra CCD, ouvrez le fichier vidéo.</li>
		<li>Pour sélectionner les taches clignotants et la zone sombre, faites glisser les zones qui couvrent séparément des régions avec et sans taches dans l’image vidéo.</li>
		<li>Pour calculer les signaux intensité en fonction du temps des taches clignotantes et des zones sombres dans la vidéo, sélectionnez Analyse temporelle dans l’analyse, puis cliquez sur le calcul dans la fenêtre d’Analyse temporelle .</li>
		<li>Enregistrer les données dans un fichier texte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analyse de la courbe de temps
	<ol>
<li>Aplatir une ligne de base de la courbe de temps en soustrayant le profil temporel de la zone sombre et/ou de montage avec une fonction polynomiale, tel qu’illustré dans les Figures 2 a et 2 b.</li>
		<li>Évaluer une intensité moyenne de base se compose d’environ 2000 points, j’aibaseet un écart-type des intensités de base, σ, comme illustré dans les Figures 2 et 2D.</li>
		<li>Distinguer les événements lumineux de sombres événements à l’aide de grandes intensités à un seuil de j’aibase + 3σ et enregistrer la durée de chaque épreuve. Dans la Figure 3, par exemple, enregistrer l’événement de 0 à 3.5476 s que l’événement sombre (avec une durée t = 3.5476 s) et d’enregistrer l’événement de 3.5476 à 4.0981 s que l’événement lumineux (avec une durée t = 0.5505 s). Répétez la procédure comme indiqué dans le tableau 1.</li>
		<li>Compter le nombre d’événements claires et foncées pour chaque durée, telle qu’exprimée dans les première et deuxième lignes du tableau 2.</li>
		<li>Additionner le nombre d’événements pour chaque durée, à l’exception des événements plus courtes que la durée t. Tel qu’exprimé dans les deuxième et troisième lignes du tableau 2, par exemple, additionner le nombre d’événements pour chaque durée (à l’exception des événements pour t = 0,0612 s) sous la forme 41 + 18 + 9 +... ; le résultat est égal à la somme pour t = 0.1223 s, c'est-à-dire 103.</li>
		<li>Diviser les sommations par chaque durée et normaliser. Comme indiqué dans le tableau 2, par exemple, diviser la somme pour la durée t = 0,0612 s par la durée 0,0612 s. Le résultat est 3,351.5791. Ensuite, divisez le résultat par le nombre total des résultats à la quatrième ligne du tableau 2. La distribution de probabilité est dérivée pour être 0.64494.</li>
		<li>Tracer les distributions de probabilité pour les événements lumineux Psur(t) contre leur durée t dans un graphe de logarithme-logarithme et fit Log10Psur(t) Journal des10 (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq1.jpg">) pour déduire la puissance Loi exposant αsur un particulier clignotant spot. Si Psur(t) est monté par <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq1.jpg"> , la ligne équipée écarte les parcelles de petites valeurs de Psur(t), comme indiqué par la ligne pointillée en Figure 4A.</li>
		<li>Tracer les distributions de probabilité pour les sombres événements Poff(t) contre leur durée t dans un graphe de logarithme-logarithme et fit Log10Poff(t) par (10) Journal <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq3.jpg"> d’en déduire la loi exposant αoff et la troncature temps τ du clignotement même spot. Si Poff(t) est monté par <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq3.jpg"> , la courbe ajustée écarte les parcelles de petites valeurs de Poff(t).</li>
		<li>Répétez 3.2.1 à 3.2.8 pour les autres taches clignotants dans la vidéo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

L’auteur n’a rien à divulguer.

De la jonction nanoaggregate argent, SERS est émis. Par conséquent, nous devons préparer les nanoaggrégats plutôt que des nanoparticules colloïdales, qui sont couverts avec les anions de citrate. Agrégats argent sont formés à partir de l’effet créé par l’ajout de la poly-L-lysine, qui a -NH3+ et est à l’origine de la SERS, le salage ou Na+ cation de NaCl, tel qu’illustré dans Figure S2 du matériel supplémentaire. Par ailleurs, pour éclairer les nombreux spots dans la vast...

Diffusion (SERS) de Raman exaltée de surface est la spectroscopie Raman hautement sensible d’une surface de métal noble. Étant donné que le spectre Raman fournit des informations détaillées sur la structure moléculaire basée sur les positions de pic, à travers les modes vibrationnels de groupes fonctionnels dans les molécules, les informations d’une seule molécule sur une surface métallique peuvent être étudiées à l’aide de « sers »1,2,3. D’un nanoaggregate d’argent avec un adsorbat à l’échelle de la molécule unique, un signal clignotant on observe1,2,3,4,5,6, 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16et le spectre fluctue de1,2,3,4,5,6,7,8, 9,10,11,12,13,14. Clignotement peut être induite par une seule molécule qui se déplace au hasard dans et hors d’un champ électromagnétique amélioré de (EM) à un carrefour de taille nanométrique argent nanoaggregate. Par conséquent, clignotant est considéré comme une preuve simple pour la détection de molécules simples, par rapport à une technique utilisant une distribution de Poisson des intensités SERS et un bi-analyte2,3,17. Cependant, les mécanismes détaillés du spectre clignotant et fluctuant, qui peut dépendre fortement de comportement moléculaire sur la surface de l’Ag, sont encore controversés.
Dans des études antérieures, clignotant SERS a été analysée à l’aide de la fonction d’autocorrélation, qui permet de calculer le coefficient de diffusion et de la concentration des molécules se déplaçant dans et hors l’amélioration EM champ12,13,14 . En outre, un score normalisé écart-type, qui représente l’instabilité dans l’intensité totale, a été dérivé de la courbe de temps du signal15. Cependant, ces approches analytiques peuvent être basées sur le comportement de quelques molécules. En revanche, dans une imagerie Super-résolution de clignement SERS, comportement de molécules simples dans un champ électromagnétique amélioré peut être identifié16. Cependant, ces techniques peuvent obtenir des paramètres tels que dans un champ électromagnétique amélioré. Le comportement aléatoire d’une seule molécule dans une large gamme (par exemple, en clignotant « SERS ») peut être représenté comme une loi de puissance plutôt que d’une moyenne de4,5,6,7,8 ,9,10,11, similaire à fluorescence clignotant d’un semi-conducteur simple quantum dot (QD)18,19. En utilisant une alimentation droit analyse4,5,6,7,8,9,10,11, comportement moléculaire peut être estimée dans l’état lumineux (dans le champ EM amélioré) et état foncé10; autrement dit, on peut estimer le comportement de la molécule sur toute la surface argentée.
Pour cette technique, l’argent colloïdales nanoaggrégats sont utilisés4,5,6,7,8,9,10,11. Ces nanoaggrégats montrent diverses bandes de résonance (LSPR) plasmon de surface localisées qui affectent fortement améliorée des champs électromagnétiques, lorsqu’ils sont excités à certaines longueurs d’onde. Ainsi, argent de SERS-active nanoparticules existent en suspension colloïdale et certaines données peut immédiatement être obtenue. Dans le cas de simples nanostructures, qui ont des arrangements, des formes et des tailles spécifiques, la dépendance LSPR de SERS clignotant peut cacher des autres dépendances7; à savoir, si la nanostructure bonne ou mauvaise à LSPR est utilisée, les paramètres seront constants, et les autres dépendances seront donc cachées. Analyse Loi de puissance a été utilisée pour découvrir les différentes dépendances de la SERS clignotant argent colloïdal nanoaggrégats4,5,6,7,8, 9 , 10 , 11.

<table><tbody><tr><td>Nitrate d’argent, 99,8</td> %<td>Wako</td><td>194-00832</td><td></td></tr><tr><td>Citrate trisodique dihydraté, 99. %</td><td>Wako</td><td>191-01785</td><td></td></tr><tr><td>Solution aqueuse de poly-L-lysine, 0,1 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-disulfopropylthiacyanine triethylamine</td><td>Hayashibara Biochemical Laboratories</td><td>NK-2703</td><td>une sorte de colorants à base de thiacyanine</td></tr><tr><td>Sel iodé iodé 3,3'-diéthyl-5,5'-dichloro-9-méthylthiacarbocyanine</td><td>Laboratoires biochimiques Hayashibara</td><td>SMP-9</td><td>une sorte de colorants à base de thiacarobocyanine Chlorure de</td></tr><tr><td>sodium, 99,5 %</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td></td></tr><tr><td>Condenseur Dimroth</td><td>Iwaki</td><td>61-9722-22</td><td>perché de AS ONE</td></tr><tr><td>Agitateur magnétique</td><td>Corning</td><td>DC-420D</td><td></td></tr><tr><td>Bain</td> <td>d’huileAdvantech</td><td>OS-220</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de verre</td><td>Matsunami</td><td>S-1112</td><td>Lame de microscope</td></tr><tr><td>Souffleur</td><td>Hozan</td><td>Z-288</td><td>Plumeau à air</td></tr><tr><td>Stylo bloqueur de liquide</td><td>Daido Sangyo</td><td></td><td>BLOQUEUR de LIQUIDE (Super Pap Pen). Stylo barrière hydrophobe prêt à l’emploi conçu pour les applications d’immunohistochimie</td></tr><tr><td>Microscope inversé</td><td>Olympus</td><td>IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Objectif Olympus</td><td></td><td>LCPlanFl 60&times ;</td><td>NA 0,7</td></tr><tr><td>Condenseur à fond noir</td><td>Olympus</td><td>U-DCD</td><td>NA 0.8&ndash ; 0.92</td></tr><tr><td>Caméra CCD numérique refroidie</td><td>Hamamatsu</td><td>ORCA-AG</td><td>contrôlée par logiciel Aqua Cosmos</td></tr><tr><td>Logiciel pour la caméra CCD numérique refroidie</td><td>Hamamatsu</td><td>AquaCosmos</td><td>utilisé également pour la dérivation des profils temporels à partir des points clignotants dans la vidéo&nbsp ;</td></tr><tr><td>Caméra CCD couleur</td><td>ELMO</td><td>TNC-C920</td><td>non utilisée pour l’analyse</td></tr><tr><td>DPSS laser</td><td>RGB système</td><td>NovaPro532-75</td><td>&lambda ; = 532 nm ; 60 mW (correspond à une densité de puissance de 600 W/cm2)</td></tr><tr><td>Filtre interférentiel</td><td>Semrock</td><td>LL01-532-12.5</td><td></td></tr><tr><td>Filtre passe-long</td><td>Semrock</td><td>BLP01-532R-25</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel pour la distinction et le comptage des événements</td><td></td><td></td> clairs/sombres <td>ménage programmé par C++</td></tr><tr><td>Logiciel pour l’ajustement par une loi de puissance</td><td>LightStone</td><td>Origin6.1</td><td></td></tr></tbody></table>

observation et analyse de clignement diffusion raman exaltée de surface

Observation and Analysis of Blinking Surface-enhanced Raman Scattering

D’une seule molécule à une jonction d’argent nanoaggregate, clignotant Raman exaltée de surface scattering (SERS) est observée. Ici, un protocole est présenté sur la façon de préparer la SERS-active nanoaggregate d’argent, enregistrer une vidéo de certaines taches clignotants dans l’image microscopique et d’analyser les statistiques de clignotants. Dans cette analyse, une loi de puissance reproduit les distributions de probabilité des événements lumineux par rapport à leur durée. Les distributions de probabilité des événements sombres sont montées par une loi de puissance avec une fonction exponentielle. Les paramètres de la Loi de puissance représentent comportement moléculaire dans les États claires et sombres. On peuvent estimer le modèle de marche aléatoire et la vitesse de la molécule sur toute la surface argentée. Il est difficile d’estimer la même lors de l’utilisation de moyennes, fonctions d’autocorrélation et Super-résolution SERS imagerie. À l’avenir, analyses de loi de puissance devraient être combinées avec l’imagerie spectrale, parce que les origines de clignotement ne peuvent être confirmées par cette méthode d’analyse.

De l’argent nanoaggrégats avec poly-L-lysine, établie par le protocole 1.2, des taches clignotantes multicolores de SERS et fluorescence exaltée de surface sont observés, comme illustré à la Figure 111. En revanche, des taches de clignotants couleur monotones du SERS ont été observées pour l’argent nanoaggrégats avec les molécules de colorant préparés par protocole 1,37,8,...

Ce protocole décrit l’analyse de clignement Raman exaltée de surface en raison de la marche aléatoire d’une molécule unique sur une surface d’argent à l’aide des lois de puissance de diffusion.

Observation et analyse de clignement diffusion Raman exaltée de Surface

From a single molecule at a silver nanoaggregate junction, blinking surface-enhanced Raman scattering (SERS) is observed. Here, a protocol is presented on ...

L’objectif global de cette analyse de la diffusion Raman améliorée par la surface clignotante est d’étudier le comportement de molécules uniques sur des surfaces de nanoparticules métalliques. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en science des interfaces et des coraux sur le comportement de fonctionnement des interfaces solides et liquides. Le principal avantage de cette technique est que de nombreuses données peuvent être recueillies, car environ une douzaine de points clignotants peuvent être observés simultanément dans une vidéo. Pour commencer cette procédure, lavez deux lames de microscope en verre avec un détergent liquide et de l’eau du robinet.Rincez les lames à l’eau distillée et laissez-les sécher à l’air. Ensuite, appliquez une solution aqueuse de poly-l lysine à 0,1 % sur une lame sèche. Laissez la solution reposer sur la lame pendant deux à trois secondes.Ensuite, utilisez un souffleur d’air comprimé pour éliminer l’excès de solution et sécher la lame. Ensuite, appliquez une suspension de nanoparticules d’argent colloïdal sur la lame. Laissez la suspension reposer pendant deux à trois secondes.Séchez la lame avec de l’air comprimé. Ensuite, utilisez un stylo barrière hydrophobe pour enfermer complètement une zone de 26 millimètres sur 26 millimètres sur la lame. Laissez la barrière sécher.Déposez de l’eau distillée sur le toboggan pour remplir l’espace clos. Couvrez la diapositive avec la deuxième lame de verre propre et sèche pour éviter l’évaporation de l’eau. Placez l’ensemble de lames sur la platine d’échantillonnage du microscope inversé.Illuminez la diapositive avec une lumière blanche à travers un condenseur à fond sombre. Faites la mise au point sur des taches de différentes couleurs en passant d’un objectif 2x à un objectif 60x. Ensuite, utilisez un laser à ondes continues à semi-conducteurs de 532 nanomètres pompé par diode, un filtre d’interférence passe-bande et une lentille pour éclairer l’échantillon avec un faisceau atténué à un angle de 30 degrés par rapport à la surface de l’échantillon.Déplacez l’éclairage laser vers le centre de la vue et ajustez légèrement la direction z de la platine d’échantillonnage pour affiner la mise au point sur les spots. Observez les agrégats sous forme de taches monotones sur un fond uniforme. Ensuite, éteignez le laser et insérez un filtre à long bord de passage après la lentille de l’objectif.Éclairez l’échantillon avec le laser à un angle de 30 degrés par rapport à la surface de l’échantillon, à travers le filtre interférent et la lentille externe. Déplacez la platine dans les directions x et y pour trouver les points clignotants. Ensuite, utilisez une caméra CCD numérique deep cool avec un temps d’image de 61 à 120 millisecondes pour acquérir une vidéo de 20 minutes des spots.Pour commencer l’analyse, ouvrez la vidéo acquise dans le logiciel de la caméra CCD. Cliquez et faites glisser pour sélectionner des zones avec et sans points clignotants. Effectuez une analyse temporelle pour obtenir un profil temporel d’intensité du signal pour les taches et les zones sombres.Acquérez ainsi des profils pour tous les points clignotants et les zones d’intérêt sombres. Ensuite, générez des distributions de probabilité pour les événements lumineux et sombres en fonction de leurs durées. Des taches clignotantes multicolores ont été observées à partir de SERS de nanoagrégats d’argent, préparés avec des lames enrobées de poly-l lysine.Le signal clignotant est attribué aux molécules uniques à marche aléatoire aux jonctions de nano-agrégats d’argent. Les signaux de l’agrégat nano unique ont montré des intensités variables au fil du temps, contrairement à la fluorescence clignotante d’un point quantique. Le seuil pour les événements lumineux a été fixé à trois écarts-types au-dessus de l’intensité de base, et les durées des événements lumineux et sombres ont été déterminées pour chaque endroit.La distribution de probabilité des événements lumineux a été tracée en fonction de la durée de l’événement sous la forme d’une ligne et d’un graphique logarithmique, tandis que la distribution de probabilité des événements sombres a été tracée en fonction de la durée sous la forme d’une courbe. Comme les durées des événements sombres étaient généralement plus longues que les durées paires brillantes, les exposants de la loi de puissance pour les événements lumineux avaient tendance à être plus petits que ceux des événements sombres. Des temps de troncature plus courts pour les événements sombres indiquaient une marche aléatoire moléculaire plus rapide, une barrière d’énergie plus élevée d’un état non émissif à un état émissif, ou une combinaison des deux.Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’observer et d’analyser les phénomènes SERS clignotants.

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JoVE Journal

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Chimie

Nous discutons de la construction et l'exploitation d'un système optique complexe non linéaire qui utilise ultrarapide tout-optiques de commutation pour isoler Raman de signaux de fluorescence. Grâce à ce système, nous sommes en mesure de séparer les signaux succès Raman et de fluorescence en utilisant des énergies d'impulsion et de puissances moyennes qui restent biologiquement sûrs.

Rejet de fond de fluorescence de résonance et spontanée microspectroscopie Raman

&lt;p style='hauteur-de-ligne :1.2 ;margin-bottom :0pt ;margin-top :0pt ;' dir='ltr'&gt;Source : Espinoza, R., et al. Imagerie par diffusion Raman stimulée bicolore en temps réel du cerveau de souris pour le diagnostic tissulaire. J. Vis. exp. (2022). La vidéo démontre l’imagerie par diffusion Raman stimulée bicolore (SRS) de sections de tissu cérébral de souris. Deux faisceaux laser synchronisés sont dirigés sur la section tissulaire pour exciter les vibrations moléculaires, ce qui entraîne un...

Imagerie bicolore de diffusion Raman stimulée du tissu cérébral de souris

Nous décrivons la fabrication et la caractérisation de systèmes nano-biologiques intercalant des substrats nanostructurés avec des protéines immobilisées et des aptamères. Les étapes expérimentales pertinentes impliquant la fabrication lithographique de substrats nanostructurés, la biofonctionnalisation et la caractérisation par spectroscopie Raman améliorée de surface (SERS) sont rapportées. La détection SERS des protéines immobilisées en surface, et le sondage de la liaison protéine-ligand et...

Surface Enhanced Raman Spectroscopy Détection de biomolécules Utilisation EBL fabrication des substrats nanostructurés

Les auteurs décrivent la construction d’un spectromètre de (CW-SBS) continuous-ondulatoire-stimulé--diffusion Brillouin rapide. Le spectromètre emploie monofréquence-les lasers à diode et un vapeur atomique-filtre d’acquérir des spectres de transmission des échantillons turbide/non-trouble avec haute résolution spectrale à des vitesses jusqu'à 100 fois plus vite que ceux des spectromètres de CW-SBS existants. Cette amélioration permet une analyse du matériau Brillouin à grande vitesse.<br...

Spectromètre à diffusion Brillouin stimulée onde continue à grande vitesse pour l’analyse des matériaux

Dans ce manuscrit, la mise en œuvre d'un microscope à diffusion Raman (SRS) stimulé, obtenue par l'intégration d'un sER expérimental avec un microscope à balayage laser, est décrite. Le microscope SRS est basé sur deux sources laser femtoseconde (fs), un Ti-Sapphire (Ti:Sa) et un oscillateur paramétrique optique synchronisé (OPO).

Mise en œuvre d'un microscope non linéaire basé sur la diffusion stimulée de Raman

La microscopie à diffusion Raman stimulée (SRS) permet l’imagerie sélective et sans étiquette de fractions chimiques spécifiques et elle a été utilisée efficacement pour imager des molécules lipidiques in vivo. Ici, nous fournissons une brève introduction au principe de la microscopie SRS et décrivons des méthodes pour son utilisation dans le stockage des lipides d’imagerie dans Caenorhabditis elegans.

Imagerie sans étiquette de la dynamique de stockage des lipides chez Caenorhabditis elegans à l’aide de la microscopie de diffusion Raman stimulée

La microscopie à diffusion Raman stimulée (SRS) est une technique d’imagerie puissante, non destructive et sans étiquette. Une application émergente est l’histologie Raman stimulée, où l’imagerie SRS bicolore aux transitions Raman protéique et lipidique est utilisée pour générer des images de pseudo-hématoxyline et d’éosine. Ici, nous démontrons un protocole pour l’imagerie SRS bicolore en temps réel pour le diagnostic tissulaire.

Imagerie par diffusion Raman stimulée en deux couleurs en temps réel du cerveau de souris pour le diagnostic tissulaire

Nous présentons un protocole pour acquérir des images chimiques avec la microscopie à diffusion Raman stimulée à large bande (SRS). Basé sur un microscope SRS qui fonctionne avec une détection différentielle multicanal, le protocole décrit la préparation de l’échantillon, l’ajustement de l’appareil SRS et la chimiométrie pour démêler différents constituants d’échantillons chimiquement hétérogènes.

Imagerie chimique multiplex basée sur la microscopie à diffusion Raman stimulée à large bande

Un microscope à transformée de Fourier à large champ, basé sur un interféromètre biréfringent compact et ultra-stable, permet l’acquisition parallèle des spectres pour tous les pixels d’un détecteur 2D. L’approche dans le domaine temporel permet de démêler la photoluminescence et les signaux Raman, et permet un cartographie Raman rapide (~5 ms/pixel) avec une résolution spatiale de ~1 μm et une résolution spectrale de 23 cm-1 .

Un microscope Raman multimodal à grande transformée de Fourier

Ici, nous présentons un protocole pour analyser les petites vésicules extracellulaires (sEV) individuelles à l’aide de spectroscopie Raman améliorée à surface sans marquage (SERS), permettant un diagnostic des maladies mini-invasifs et une évaluation des sEVs comme vecteurs thérapeutiques de délivrance.

Exploration de l’application de la biodétection basée sur la diffusion Raman améliorée en surface des sEVs individuels dans le diagnostic et la thérapie des maladies

Découvrez l'analyse du clignotement en diffusion Raman exaltée de surface pour étudier le comportement des molécules uniques sur des surfaces métalliques. Cette méthode permet d'observer simultanément plusieurs spots clignotants.

Observation et analyse de clignement diffusion Raman exaltée de Surface

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