Un essai de tache de Dot Quantitative pour AAV titrage et son utilisation pour l’évaluation fonctionnelle de l’Adeno-associated Virus activation Assemblée protéines

Cette méthode permet de déterminer à la fois les titres de vacance AV purifiés et non purifiés et d’évaluer la capacité de l’AAP AAV à favoriser l’assemblage de sérotype-capse AV apparenté et hétérologue. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une méthode simple et peu coûteuse qui évite les inconvénients des autres méthodes de titrage AAV. Bien que cette méthode ait été couramment utilisée pour la quantification des vecteurs AAV, elle peut également être appliquée pour répondre à diverses questions fondamentales sur la biologie des AAV, comme le montre ce protocole.

Le jour zéro, après avoir cultivé 293 cellules HEK à 90 % de confluence, préparez le réactif de transfection en mélangeant les plasmides dans 96 microlitres de PBS sans calcium ni magnésium dans des tubes à centrifuger stériles de 1,5 millilitre. Comme l’indique ce tableau, la quantité totale d’ADN est de deux microgrammes par puits. Ajouter quatre microlitres de solution PEI au mélange d’ADN plasmidique PBS.