Routine de procédé de criblage de microparticules dans les Transfusions de plaquettes

L’objectif global de cette méthode est de caractériser les transfusions plaquettaires par des tests de routine qui peuvent être effectués dans des centres de donneurs ou des banques de sang hospitalières afin d’optimiser l’utilisation de ces produits sanguins pour les patients hémorragiques ou atteints d’un cancer du sang. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en médecine transfusionnelle, telles que la question de savoir si une transfusion de plaquettes contient des plaquettes activées ou non activées. Le principal avantage de cette technique est qu’elle fournit un dépistage rapide et précis de la teneur en microparticules en tant qu’indicateur éprouvé de l’activation plaquettaire.

Les personnes qui ne connaissent pas cette méthode devront apprendre à prélever des échantillons à partir de segments de tubes de sacs, car cela ne se fait pas systématiquement à l’heure actuelle. Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous avons vu que les plaquettes de différents donneurs avaient une grande variabilité dans le statut d’activation, ce qui semblait avoir un impact sur le patient. Il existe trois méthodes pour obtenir un échantillon à partir d’un concentré de plaquettes.

Pour prélever des échantillons à partir d’un sachet, mélangez bien le contenu du sac de plaquettes en effectuant un léger mouvement horizontal pendant cinq secondes, en basculant d’un bout à l’autre, cinq fois. Ouvrez la pince à la pochette, la pochette est évacuée et se remplira d’elle-même. Il n’est pas nécessaire de remplir complètement le sachet, car seul un échantillon de 100 microlitres sera nécessaire pour la diffusion dynamique de la lumière ou les tests DLS.

Déconnectez le sachet du sac en scellant thermiquement le tube de raccordement à l’aide d’une scelleuse de tubes. Lors de l’échantillonnage à partir d’une tubulure vide, vérifiez que la tubulure du sac plaquettaire a été stockée vide et que le bloc de tubulure est toujours en place. Inspectez visuellement la tubulure pour vérifier qu’il n’y a pas de concentré de plaquettes dans la tubulure.

Fermez le décapant de tube sur le tube, aussi près que possible du bloc de tube, en comprimant les poignées pour presser le tube entre les rouleaux tout en gardant le décapant fermé, libérez le bloc de tube. Tirez lentement le décapant vers le bas du tube vide, permettant au tube de se remplir lentement derrière le décapant. Continuez jusqu’à ce que la section sous le décapant soit complètement gonflée ou jusqu’à ce que le décapant soit à moins d’un pouce de l’extrémité du tube.

Il est essentiel de comprimer fermement les poignées du décapant de tube et de tirer lentement le décapant vers le bas du tube. Une fois le point d’arrêt atteint avec le décapant, utilisez la scelleuse de tubes pour sceller à chaud le tube à un pouce au-dessus du décapant. Maintenant, relâchez les poignées de la décapeuse de tube manuelle.

Thermoscellez à nouveau, un à deux pouces au-dessus du joint précédent pour créer le segment de test. Ensuite, coupez le segment de test de l’unité plaquettaire. Ce segment sera utilisé pour les tests DLS.

Lors de l’échantillonnage d’un tube qui n’est pas vide, suspendez le sac verticalement et relâchez le bloc de tube, s’il est en place. Inspectez visuellement le tube pour déterminer s’il y a des amas solides importants. S’il y a des amas solides, scellez-les au-dessus, de sorte qu’ils ne puissent pas être dénudés dans le sac.

Ensuite, fermez le décapant de tube sur le tube, aussi près que possible de l’extrémité scellée du tube. Décapage le contenu du tube, dans le sac, en comprimant les poignées pour presser le tube entre les rouleaux. Tout en maintenant la force de serrage, déplacez le décapant de tube le long du tube vers le sac.

Retirez le sac de plaquettes du crochet de suspension et mélangez doucement le sac pendant cinq secondes, en le renversant cinq fois d’un bout à l’autre, tout en gardant le décapant fermé. Accrochez le sac à la verticale, tout en gardant le décapant fermé. Tirez lentement le décapant vers le bas du tube vide, permettant au tube de se remplir lentement derrière le décapant.

Continuez jusqu’à ce que la section sous le décapant soit complètement gonflée, ou jusqu’à ce que le décapant soit à moins d’un pouce de l’extrémité du tube. Une fois le point d’arrêt atteint avec le décapant, utilisez le scelleur de tubes pour sceller thermiquement le tube, un pouce au-dessus du décapant. Après avoir relâché le décapant, thermocollez à nouveau un à deux pouces au-dessus du joint précédent pour créer le segment de test.

Coupez et jetez la dernière partie du tube. Ensuite, coupez le segment de test de l’unité plaquettaire. Ce segment sera utilisé pour les tests DLS.

À l’aide d’un écran anti-éclaboussures et de ciseaux propres et secs, coupez une extrémité du tube du sachet ou du segment d’essai. Remplissez immédiatement le capillaire à l’aide de l’outil d’échantillonnage pour prélever l’échantillon directement de la poche ouverte ou du segment de tubulure dans le capillaire. Scellez le fond du capillaire rempli en le poussant doucement dans le scellant du tube capillaire, tout en appliquant une légère torsion et une certaine pression contre le plateau.

Ensuite, débranchez la pipette à volume fixe de 100 microlitres et l’embout du capillaire, en vous assurant que le capillaire reste fermement ancré dans le produit d’étanchéité du tube capillaire. Retirez le capillaire du plateau d’étanchéité du tube capillaire et essuyez-le avec un tampon d’alcool isopropylique. Assurez-vous qu’aucune bulle d’air n’est piégée en effleurant doucement le bas du capillaire.

Enfin, placez le capillaire dans le système DLS. Pour commencer, démarrez la console, suivez les instructions sur l’écran tactile pour vous connecter et sélectionnez l’option de test de microparticules ou de MP pour lancer un nouveau test DLS pour mesurer la teneur en microparticules d’un échantillon de plaquettes. Entrez les informations de l’échantillon à l’aide d’un lecteur de codes-barres ou saisissez-les manuellement.

Placez le capillaire dans le système DLS lorsque vous vous y êtes invité et démarrez le test. Une fois l’analyse terminée, retirer l’échantillon du support capillaire et éliminer les consommables de manière appropriée conformément aux directives de l’établissement. Étiquetez le sac de plaquettes avec la couleur correspondant au résultat.

Par exemple, orange pour non activé et rose pour activé. La diffusion dynamique de la lumière mesure la vitesse des particules se déplaçant en suspension par un mouvement brownien. En fonction des différentes vitesses, les petites particules se déplacent rapidement et les grosses particules se déplacent lentement.

Cette technologie détermine la distribution de la taille d’un échantillon. DLS détermine que cette transfusion contient des plaquettes non activées en fonction d’une teneur en microparticules inférieure à 15 %. Vraiment. La plupart du temps, des plaquettes discoïdes avec très peu de microparticules étaient visibles à la microscopie.

Cependant, une transfusion de plaquettes différente, qui, à l’œil nu, ressemble exactement à la première poche, contenait des plaquettes activées, basées sur une teneur en microparticules de plus de 15 %. Dans cet échantillon, diverses morphologies de plaquettes, de petits agrégats et de nombreuses microparticules étaient visibles au microscope. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon dont vous procédez de manière non invasive pour prélever un échantillon d’un sac de plaquettes, remplir le capillaire et tester la teneur en microparticules de l’échantillon, afin de permettre d’optimiser l’utilisation d’un inventaire de plaquettes.

Lors de cette procédure, il est important de bien mélanger le sac afin d’obtenir un bon échantillon représentatif. Et en suivant cette procédure, vous pouvez utiliser d’autres méthodes, telles que la cytométrie en flux, pour répondre aux questions sur l’origine cellulaire des microparticules. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en deux minutes et demie environ.

Avec le test de cinq minutes, les transfusions de plaquettes peuvent être caractérisées en moins de huit minutes. Après son développement, cette technique a permis aux banques de sang hospitalières de dépister leur inventaire de plaquettes, de traiter les patients en hématologie/oncologie uniquement avec des plaquettes non activées et d’observer une réduction des transfusions de plaquettes utilisées. Comme nous l’avons dit, la transfusion la plus sûre est celle qui n’est pas administrée.

Bien que cette méthode donne un aperçu de la caractérisation des plaquettes avant la transfusion, elle peut également être utilisée pour tester le plasma riche en plaquettes directement des donneurs. Les implications de cette technique s’étendent au traitement des patients atteints de cancer du sang car ils bénéficient de transfusions de plaquettes non activées, qui réduisent le risque de devenir réfractaires.