Name: Quantification de l’endogène auxine et cytokinine durant la Culture entre-nœud d’ipéca (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Découvrez la quantification de l'auxine endogène et des cytokinines par LC-MS/MS lors de la formation de pousses adventives chez l'ipéca. Cette méthode sensible permet d'analyser les dynamiques phytohormonales pour la régénération tissulaire végétale.

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Nous sommes reconnaissants à M. Akira Murakami, du département de Biosciences appliquées, Université de Toyo et M. Koudai Taniguchi de l’Agricultural Technology Center de Gunma pour leur assistance technique. Nous sommes également reconnaissants au professeur Shosaku Kashiwada et Dr Uma Maheswari Rajagopalan, Université Toyo pour leurs suggestions. Cette étude a été financée en partie par le centre de recherche pour la vie et Sciences de l’environnement, l’Université Toyo.

Remarque : Ipéca (c. ipécacuanha) a été utilisée dans cette étude, car elle facilite l’analyse des phytohormones endogènes.
1. croissance Conditions d’induire des pousses adventives d’ipéca
<ol><li>Préparer un milieu B5 sans phytohormone ajusté à pH 5,710et ajoutez la gomme Gellane 0,2 %. Stériliser à l’autoclave.</li>
	<li>Verser 25 mL de milieu stérilisé dans une boîte de Petri stérile (90 × 20 mm).</li>
	<li>Couper des segments internodales 8 mm de plantules d’ipéca utilisant un scalpel chirurgical avec une lame n ° 22 sur une plaque acrylique stérile et placer sur le support (Figure 1).</li>
	<li>Culture sur un milieu B5 sans phytohormone à 24 ° C sous 15 µmol m−2 s−1 de la lumière dans un cycle de sombre lumière/10 h de 14 h pendant 5 semaines.</li>
	<li>Identifier les régions j’ai (apical) à IV (basal) dans chaque segment (Figure 1B). Compter le nombre de tiges adventives > 0,3 mm de longueur dans chaque région sous un microscope, une fois par semaine.</li>
</ol>2. extraction et Purification de Phytohormones
<ol><li>Mettre un boudin de 5 mm zircone dans chacun des quatre tubes échantillon de 2 mL.</li>
	<li>Couper les segments en régions I à IV (chaque 2 mm de longueur) à l’aide d’un bistouri sur une plaque acrylique stérile.</li>
	<li>Collecter les huit segments de chaque région dans les tubes d’échantillons distincts (10-30 mg de poids frais).</li>
	<li>Peser et puis congeler les échantillons dans l’azote liquide.</li>
	<li>Écraser les échantillons congelés en utilisant un homogénéisateur axée sur le talon.</li>
	<li>Suspendre les échantillons écrasées dans 1 mL d’acétonitrile contenant 500 pg de chaque étalon interne de l’auxine et CKs (d5-IAA, d5- tZ, d5- tZR, d6- iP, d6- droits de propriété intellectuelle) à l’aide d’un agitateur Vortex.</li>
	<li>Maintenez à 4 ° C pendant 1 h, puis centrifuger à 3 500 × g pendant 5 min à température ambiante.</li>
	<li>Laver le culot dans l’acétonitrile de 80 % (v/v) contenant 1 % (v/v) d’acide acétique. Centrifuger à nouveau à 3 500 × g pendant 5 min à température ambiante. Combiner les surnageants (à partir de mesures 2.7 et 2.8) dans un tube de verre jetable.</li>
	<li>Ajouter 600 µL d’eau contenant l’acide acétique 1 % (v/v) pour chaque surnageant combinée et évaporer l’acétonitrile utilisant une pompe à vide.</li>
	<li>Equilibrer les cartouches de colonne (HLB) hydrophile-lipophile-équilibré en appliquant 1 mL d’acétonitrile, méthanol et de l’eau contenant 1 % (v/v) d’acide acétique.</li>
	<li>Appliquer une solution de l’échantillon par cartouche HLB équilibré.</li>
	<li>Laver les cartouches avec 1 mL d’eau contenant 1 % (v/v) d’acide acétique.</li>
	<li>Éluer les hormones avec 2 mL d’acétonitrile 80 % (v/v) contenant 1 % (v/v) d’acide acétique dans un tube de verre.</li>
	<li>Évaporer l’acétonitrile dans l’éluat pour obtenir l’extrait dans l’eau contenant 1 % (v/v) d’acide acétique à l’aide d’une pompe à vide. Remarque : Ne pas sécher cela complètement.</li>
	<li>Equilibrer les cartouches colonne échangeuse de cations en mode mixte, forte (MCX) en appliquant 1 mL d’acétonitrile, 1 mL de méthanol, 0,5 mL HCl 0,1 de M et 1 mL d’eau contenant 1 % (v/v) d’acide acétique.</li>
	<li>Appliquer une solution de l’échantillon par cartouche MCX équilibré.</li>
	<li>Laver les cartouches avec 1 mL d’eau contenant 1 % (v/v) d’acide acétique.</li>
	<li>Éluer IAA avec 2 mL d’acétonitrile 30 % (v/v) contenant 1 % (v/v) d’acide acétique dans un tube de verre.</li>
	<li>Laver les cartouches avec 2 mL d’acétonitrile 80 % (v/v) contenant 1 % (v/v) d’acide acétique.</li>
	<li>Laver les cartouches avec 2 mL d’eau et 1 mL d’eau contenant de l’ammoniaque aqueuse de 5 %.</li>
	<li>Éluer les CKs avec 2 mL d’acétonitrile 60 % (v/v) contenant de l’ammoniaque aqueuse 5 % dans un tube de verre.</li>
	<li>Laisser évaporer le solvant de chaque fraction de l’hormone à l’aide d’une pompe à vide et conserver à −30 ° C jusqu'à l’analyse de LC-MS/MS.</li>
</ol>3. LC-MS/MS analyse des IAA et CKs
<ol><li>Dissoudre chaque extrait d’hormone dans un tube contenant 600 µL de méthanol et transvaser la solution dans un flacon de récupération totale de cou de vis. Laisser évaporer le solvant à l’aide d’une pompe à vide.</li>
	<li>Dissoudre la fraction IAA dans 20 µL 30 % (v/v) d’acétonitrile et les fractions CK dans 20 µL eau contenant 1 % (v/v) d’acide acétique à vis récupération totale flacons.</li>
	<li>Analyse des échantillons en mode ion positif sur un système de MS triple-quadrupôle équipé d’un système HPLC. NOTE : Nous avons mis les conditions CLHP comme indiqué au tableau 1.<ol>
<li>Pour l’élution de l’IAA, utiliser un gradient binaire de 5 à 50 % de solvant B plus de 7 minutes, puis augmenter de 98 % de solvant B pendant 1 min et ensuite équilibrer pendant 2 min à 5 % de solvant B par injection de nid.</li>
		<li>Pour l’élution de la CK, utiliser un gradient binaire de 2 % - 40 % solvant B pendant 5 min, 40-70 % de solvant B à 7 min, puis augmenter de 95 % de solvant B maintenez pendant 1 min et ensuite équilibrer pendant 2 min à 2 % de solvant B par injection de nidification.</li>
		<li>Définir l’ionisation par électrospray (ESI)-MS des paramètres de la source d’ions énumérés au tableau 2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utiliser la réaction multiples surveillance passage (MRM) pour la quantification de chaque analyte énuméré au tableau 3.</li>
	<li>Quantifier les taux endogènes de IAA et CK contre une courbe d’étalonnage du ratio de sans étiquette aux normes marqués au deutérium.</li>
</ol>

<ol><li>Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen. Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).</li>
<li>Skoog, F., Miller, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+regulation+of+growth+and+organ+formation+in+plant+tissues+cultured+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Symp+Soc+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro.</a> Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).</li>
<li>Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N. <a target="_blank" href="NULL">Transgenic plants and crops</a>. Khachatourians, G. G., McHughen, A., Scorza, R., Nip, W. K. , CRC Press. Ch. 4 69-84 (2002).</li>
<li>Teshima, D., Ikeda, K., Satake, M., Aoyama, T., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+emetic+alkaloid+by+in+vitro+culture+of+Cephaelis+ipecacuanha%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Production of emetic alkaloid by in vitro culture of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 278-280 (1988).</li>
<li>Chatterjee, S. K., Nandi, R. P., Ghosh, N. C. Cultivation and utilixzation of medicinal plants. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Cultivation-Utilization-Medicinal-Plants-Kapur/dp/B001I6AQI6">Regional Research Laboratory, Council of Scientific and Industrial Research</a>. Atal, C. K., Kapur, B. M. , Jammu-Tawi, India. 295-301 (1982).</li>
<li>Bajaj, Y. P. S. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/trends/biotechnology/abstract/0167-7799(94)90092-2">Biotechnology in Agriculture and Forestry 21, Medicinal and Aromatic Plants IV</a>. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. 87-103 (1993).</li>
<li>Ideda, K., Teshima, D., Aoyama, T., Satake, M., Shimomura, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24241769">Clonal propagation of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 288-291 (1988).</li>
<li>Yoshimatsu, K., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+shoot+formation+on+internodal+segments+and+alkaloid+formation+in+the+regenerates+of+Cephaelis+ipecacuanha+A.+Richard%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient shoot formation on internodal segments and alkaloid formation in the regenerates of Cephaelis ipecacuanha A. Richard.</a> Plant Cell Rep. 9 (10), 567-570 (1991).</li>
<li>Koike, I., Taniguchi, K., Shimomura, K., Umehara, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00344-017-9684-8">Dynamics of endogenous indole-3-acetic acid and cytokinins during adventitious shoot formation in ipecac.</a> J. Plant Growth Regul. , (2017).</li>
<li>Gamborg, O. L., Miller, R. A., Ojima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+requirements+of+suspension+cultures+of+soybean+root+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells.</a> Exp. Cell Res. 50 (1), 151-158 (1968).</li>
<li>Watad, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0304423896008746">Adventitious shoot formation from carnation stem segments: a comparison of different culture procedures.</a> Scientia Hortic. 65 (4), 313-320 (1996).</li>
<li>Ajithkumar, D., Seeni, S. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s002990050418">Rapid clonal multiplication through in vitro axillary shoot proliferation of Aegle marmelos (L.) Corr., a medicinal tree.</a> Plant Cell Rep. 17 (5), 422-426 (1998).</li>
<li>Tiwari, V., Tiwari, K. N., Singh, B. D. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1023/A:1010652006417">Comparative studies of cytokinins on in vitro propagation of Bacopa monniera.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 66 (1), 9-16 (2001).</li>
<li>Rao, M. S., Purohit, S. D. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10535-006-0079-0">In vitro shoot bud differentiation and plantlet regeneration in Celastrus paniculatus Willd.</a> Biol. Plant. 50 (4), 501-506 (2006).</li>
<li>Sanikhani, M., Frello, S., Serek, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11240-005-9050-6">TDZ induces shoot regeneration in various Kalanchoë blossfeldiana Poelln cultivars in the absence of auxin.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 85 (1), 75-82 (2006).</li>
<li>Yoshimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+negatively+regulates+cell+death+by+controlling+NPR1-dependent+salicylic+acid+signaling+during+senescence+and+the+innate+immune+response+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Autophagy negatively regulates cell death by controlling NPR1-dependent salicylic acid signaling during senescence and the innate immune response in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 21 (9), 2914-2927 (2009).</li>
<li>Schaller, G. E., Bishopp, A., Kieber, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+yin-yang+of+hormones%3A+cytokinin+and+auxin+interactions+in+plant+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The yin-yang of hormones: cytokinin and auxin interactions in plant development.</a> Plant Cell. 27 (1), 44-63 (2015).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont aucun conflit d’intérêt.

Pour identifier la distribution des phytohormones impliqués dans l’organogenèse, c’est important d’utiliser des matières végétales dans lesquelles organogenèse peut être observé sur un milieu sans phytohormone, parce que quand les phytohormones sont appliqués exogène d’explants pour induire tiges ou racines, ils affectent l’explant entier, rendant difficile d’évaluer la plasticité inhérente des plantes dans la différenciation cellulaire et l’organogénèse. Des pousses adventives peuvent être induites sur milieux de cultur...

Gottlieb Haberlandt (1854-1945) a proposé le concept de « totipotence », par quelles plantes cellules peuvent diviser, différencier et régénérer des plantes entières même après leur différenciation préalable en types spécifiques de cellules de plantes matures1. En culture de tissus, si la régénération des plantes peut être induite ou non dépend de la combinaison et la concentration des phytohormones exogènes appliquées dans le milieu de croissance. Skoog et Miller ont constaté que des pousses adventives peuvent être induites de tabac cals sur milieu de culture contenant un taux élevé de CKs d’auxines, tandis que des racines adventives pouvaient être induites sur un milieu contenant un faible ratio2. Depuis cette conclusion, culture de tissus a été largement utilisée pour la propagation des cultures d’importance économique et pour la régénération des plantes transgéniques3. Des pousses adventives peuvent être induites de tissus autres que le méristème apical, tels que des feuilles, des racines et des entre-noeuds. Phytohormone traitement est nécessaire à l’induction des pousses adventives dans la plupart des espèces végétales. Toutefois, les combinaisons et les concentrations optimales diffèrent par espèce et entre les tissus utilisés comme explants. Ainsi, beaucoup d’efforts va en déterminer les concentrations optimales et les combinaisons de phytohormones pour des expériences.
Carapichea ipecacuanha (Brot.) L. Andersson (ipéca) est une plante médicinale qui contient des alcaloïdes tels qu’émétine et Céphéline, surtout dans les racines4. Extraits de racines sont utilisées comme expectorant, émétique et un amoebicide5. Bien que l’ipéca pousse naturellement dans les forêts tropicales du Brésil, il est réticent à mettre les graines dans la culture, et le taux de germination diminue pendant le stockage de semences au Japon, avec son de climat plus froid6. Au lieu de cela, il est propagé par culture de tissus, dans laquelle adventives tirer formation sur entre-noeuds est la plus efficace méthode de7,,8. Fait intéressant, les pousses adventives peuvent être induites chez cette espèce sans phytohormone traitement8.
Des pousses adventives sont forment sur l’épiderme dans la région apicale des segments internodales sans obtention, mais pas dans la région basale9. Cette différence indique les polarités de tissus dans les segments internodales, qui est probablement en vertu du règlement phytohormonal. Le système de culture d’ipéca permet une occasion unique d’analyser les changements dans les niveaux endogènes phytohormone au cours de la formation de pousses adventives. Ici, nous présentons notre méthode pour l’analyse des niveaux endogènes d’une auxine (acide indole 3-acétique (AIA)) et quatre CKs (isopentényl adénine (iP), isopentényl adénine riboside (iPR), trans-zéatine (tZ) et trans-zéatine riboside (tZR)) dans les segments internodales grâce à l’utilisation de CL-SM/SM.

<table><tbody><tr><td>[2H5]acide indole-3-acétique</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>031 1531</td><td>Étalon interne pour LC-MS/MS[</td></tr><tr><td>2H5]trans-zéatine</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0301</td><td>Étalon interne pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>[2H5]riboside trans-zéatine</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0311</td><td>Étalon interne pour LC-MS/MS[</td></tr><tr><td>2H6]N6-isopentenyl adénine</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0161</td><td>Étalon interne pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>[2H6]N6-isopentenyl adénosine</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0171</td><td>Étalon interne pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>indole-3-acétique Étalon</td><td>Wako</td><td>098 00181</td><td>Étalon pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>trans-zéatine</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>Z0876 Étalon 5MG</td><td>pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>trans-zéatine riboside</td><td>Wako</td><td>262 01081</td><td>Étalon pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>N6-isopentenyle adénine</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>D7674 Étalon 1G</td><td>pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>N6-isopentenyl adénosine</td><td>ACROS ORGANICS</td><td>22648 1000</td><td>étalon pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>acétonitrile hypergrade pour LC-MS LiChrosolv</td><td>MERCK</td><td>1.00029.1000</td><td>solvant pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>Eau pour chromatographie LiChrosolv</td><td>MERCK</td><td>1.15333.1000</td><td>solvant pour LC-MS/MS</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>SHIMADZU</td><td>Prominence</td><td></td></tr><tr><td>MS</td><td>Sciex</td><td>3200QTRAP</td><td></td></tr><tr><td>Oasis HLB 30 mg/1 cc</td><td>Waters</td><td>WAT094225</td><td>cartouche colonne</td></tr><tr><td>Oasis MCX 30 mg/1 cc</td><td>Waters</td><td>186000252</td><td>cartouche colonne</td></tr><tr><td>à vis col</td> vis flacon de récupération totale <td>Waters</td><td>186002805</td><td></td></tr><tr><td>bleu, 12 x 32mm bouchon à vis et septum en PTFE/silicone</td><td>Waters</td><td></td><td></td>186000274</tr><tr><td>Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 100 mm</td><td>Waters</td><td>186002350</td><td>Colonne UPLC</td></tr><tr><td>Proshell 120 EC-C18, 2,1 x 50 mm</td><td>Agilent</td><td>699775-902</td><td>Colonne UPLC</td></tr><tr><td>Microscope numérique</td><td>Leica</td><td>DHS1000</td><td></td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>QIAGEN</td><td>85300</td><td></td></tr><tr><td>Lame chirurgicale</td><td>Feather</td><td>No. 22</td><td></td></tr><tr><td>Manche de scalpel</td><td>Feather</td><td>No. 4</td><td></td></tr><tr><td>Savant SpeedVac/Piège à vapeur réfrigéré</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SPD111/RVT4104</td><td>concentrateur sous vide</td></tr><tr><td>Tobe en verre jetable (13x100 mm)</td><td>IWAKI</td><td>9832-1310</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri stérile</td><td>INA OPTICA</td><td>I-90-20</td><td></td></tr></tbody></table>

quantification de l’endogène auxine et cytokinine durant la culture entre-nœud d’ipéca

Quantification of Endogenous Auxin and Cytokinin During Internode Culture of Ipecac

La formation de pousses adventives est une technique importante pour la propagation des cultures d’importance économique et à la régénération de plantes transgéniques. Phytohormone traitement est nécessaire à l’induction des pousses adventives dans la plupart des espèces. Si des pousses adventives peuvent être induites sont déterminée par l’équilibre entre auxine et cytokinine (CK) niveaux. Beaucoup d’efforts va dans la détermination des concentrations optimales et des combinaisons de phytohormones dans chaque tissu utilisé comme explants et dans chacune des espèces végétales. Dans ipecac, toutefois, des pousses adventives peuvent être induites sur internodales segments dans le milieu de culture sans traitement phytohormone. Cela permet la plasticité inhérente d’ipéca pour la différenciation des cellules doit être évaluée. Pour induire des pousses adventives en ipecac, nous cultivées internodales segments à 24 ° C sous 15 µmol m−2 s−1 de lumière dans un cycle de sombre lumière/10 h de 14 h sur un milieu B5 sans phytohormone solidifié avec gomme Gellane 0,2 % pendant 5 semaines. Pour étudier la dynamique phytohormone au cours de la formation de pousses adventives, nous avons mesuré l’acide indole 3-acétique endogène et CKs dans les segments par spectrométrie de masse en tandem par chromatographie liquide LC-MS/MS. Cette méthode permet l’analyse de l’acide indole 3-acétique endogène et CKs niveaux de manière simple. Il peut être appliqué afin d’étudier la dynamique de l’auxine endogène et CK pendant l’organogenèse chez d’autres espèces végétales.

À la 1st semaine, aucun des pousses adventives n’avaient formé. À la 2ème semaine, petites pousses sont apparus. À la 3rd et 4ème semaines, le nombre de pousses accru pour la plupart dans les régions apicales (I et II) (Figure 2A). À la 5e semaine, le nombre de pousses était approximativement 7 en région I et 5 dans la région II (Figure 2B). ...

Des pousses adventives peuvent être induites sur les segments internodales d’ipéca sans traitement phytohormone. Pour évaluer la dynamique phytohormone au cours de la formation de pousses adventives, nous avons mesuré endogène auxine et cytokinine dans des segments internodales par LC-MS/MS.

Quantification de l’endogène auxine et cytokinine durant la Culture entre-nœud d’ipéca

Adventitious shoot formation is an important technique for the propagation of economically important crops and for the regeneration of transgenic plants. ...

L’objectif général de cette procédure est de décrire comment les niveaux de phytohormones endogènes changent lors de la formation de pousses adventives chez l’ipéca. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés liées à la régénération des tissus dans la roue de culture des tissus végétaux. Le principal avantage de cette technique est que le niveau endogène d’acide indole-3-acétique et les cytokinines peuvent être simplement analysées avec une grande sensibilité.L’implication de cette technique s’étend tout au long de l’établissement de la dégénérescence des tissus végétaux, car les changements dans le niveau de phytohormones endogènes déclenchent la formation de pousses adventices. Pour commencer, préparez un milieu B5 sans phytohormones et ajoutez 0,2 % de gomme gellane. Ensuite, autoclavez le milieu pour le stériliser.À l’aide d’un scalpel chirurgical sur une plaque acrylique stérile, coupez des segments internodaux de huit millimètres de plantules d’ipéca et placez-les sur le support. Ensuite, cultivez les segments d’ipéca à 24 degrés Celsius sous 15 micromoles par mètre carré de lumière dans un cycle de lumière de 14 heures et d’obscurité de 10 heures pendant cinq s

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Cet article décrit deux méthodes de phénotypage sans l’utilisation de peelings épidermiques pour caractériser les gènes contrôlant le développement stomatique. La première méthode montre comment analyser un phénotype stomatique à l’aide d’un épiderme végétal coloré au bleu de toluidine O. La deuxième méthode décrit comment identifier les ligands stomatiques et surveiller leurs activités biologiques.

Identification des gènes impliqués dans le développement stomatique par notation du phénotype épidermique

Nous décrivons ici un outil avancé conçu pour le suivi de la biosynthèse de la chlorophylle au cours des premiers stades de la désétiolement des plantules d’Arabidopsis . La nouvelle méthodologie fournit une imagerie non invasive de fluorescence de la chlorophylle en temps réel à haute résolution spatiale et temporelle.

Test non invasif pour la détermination de la cinétique de biosynthèse de la chlorophylle au cours des premiers stades de la désétiolement d’Arabidopsis

Découvrez la quantification de l'auxine endogène et des cytokinines par LC-MS/MS lors de la formation de pousses adventives chez l'ipéca. Cette méthode sensible permet d'analyser les dynamiques phytohormonales pour la régénération tissulaire végétale.

Quantification de l’endogène auxine et cytokinine durant la Culture entre-nœud d’ipéca

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