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DOI: 10.3791/57033-v
Polina Zjablovskaja*1,2, Petr Danek*1, Miroslava Kardosova1, Meritxell Alberich-Jorda1,2
1Department of Hemato-Oncology,Institute of Molecular Genetics of the ASCR, 2Childhood Leukaemia Investigation Prague, Department of Paediatric Haematology and Oncology, 2nd Faculty of Medicine,Charles University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Ici sont présentés les protocoles détaillés pour cultiver la lignée murine précurseurs myéloïdes 32D/G-CSF-R, effectuant des infections virales et effectuer des tests de prolifération et la différenciation. Cette lignée cellulaire convient pour étudier le développement des cellules myéloïdes et le rôle des gènes d’intérêt dans la croissance des cellules myéloïdes et différenciation des neutrophile.
L’objectif global de cette expérience est de modifier génétiquement les cellules myéloïdes murines 32D-G-CSF-R en surexprimant ou en réduisant au silence le gène d’intérêt et en déterminant l’effet de ces changements sur la prolifération et la différenciation neutrophile de la lignée cellulaire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’hématologie, telles que la façon dont votre protéine d’intérêt peut être impliquée dans la croissance et la différenciation des cellules précurseurs myéloïdes. Le principal avantage de cette lignée cellulaire est qu’elle possède une capacité de prolifération illimitée, qu’elle est sensible aux manipulations génétiques, que son coût est relativement faible et qu’elle permet un certain degré de simplification biologique requis dans certaines approches expérimentales.
La démonstration de la procédure aujourd’hui sera assurée par Petr Danek, doctorant dans mon laboratoire. Préparez 250 millilitres de RPMI-1640 Medium complétés par du sérum de veau fœtal inactivé à 10 % et 10 nanogrammes par millilitre d’interleukine-3 murine. Préparez ensuite 50 millilitres de milieu de différenciation.
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