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DOI: 10.3791/57077-v
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Cette méthode montre comment visualiser invasion de pathogènes dans les cellules d’insectes avec des modèles tridimensionnels (3D). Hémocytes de larves de drosophile étaient infectées par des pathogènes virus ou bactériens, ex vivo ou in vivo. Hémocytes infectés ont été ensuite fixe et teintés d’imagerie avec un microscope confocal et la reconstruction cellulaire 3D ultérieure.
Cette technique peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’infection cellulaire et de la microbiologie, telles que la façon dont les hémocytes contribuent à la réponse immunitaire globale chez les mouches des fruits. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut être réalisée en laboratoire, en utilisant des larves précédemment infectées. Alternativement, les hémocytes de larves non infectées peuvent être utilisés pour une infection ex vivo.
La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle car les étapes d’imagerie sont difficiles à apprendre en raison de la complexité du microscope confocal et des options de reconstruction de modèles 3D. Pour commencer le protocole, superposez deux à trois morceaux de film de paraffine de dix centimètres sur dix centimètres sous un stéréomicroscope. Ensuite, préparez le capillaire en verre en réglant le chauffage polaire capillaire à 55 % du maximum.
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